實驗三細菌革蘭氏染色第一頁，共十六頁，編輯于2023年，星期二目的要求a.掌握細菌涂片標本的制備方法和普通染色的步驟和關鍵點b.掌握革蘭氏染色法的步驟和關鍵點c.識別細菌的革蘭氏染色結果并畫圖d.學習無菌操作技術

第二頁，共十六頁，編輯于2023年，星期二材料用具顯微鏡，擦鏡紙，紗布革蘭氏染液香柏油,自來水,95%酒精;載玻片,插鏡紙,接種環,鑷子,酒精燈;金黃色葡萄球菌,枯草芽孢桿菌,未知菌12小時的液體培養液大腸桿菌和酵母菌平板第三頁，共十六頁，編輯于2023年，星期二實驗步驟1.涂片左手持菌液試管,右手持接種環在火焰中灼燒,冷卻后從試管中去菌液一滴,在潔凈載玻片上做一涂膜;從固體斜面或平板上取菌時,用無菌接種環取少量菌體,涂抹均勻于玻片上預先滴有的一滴自來水中;第四頁，共十六頁，編輯于2023年，星期二實驗步驟2.干燥在空氣中自然干燥或在火焰快速通過干燥(與熱固定同步進行).

3.熱固定用鑷子夾住涂片一端,

在火焰上連續通過幾次;以載玻片在手背上試感覺不燙為宜.第五頁，共十六頁，編輯于2023年，星期二實驗步驟4.染色在固定的標本上加結晶紫染液1-2滴,染色1min,輕輕滴加水洗;吸干,加半滴水,蓋上蓋玻片,滴上半滴鏡油油鏡檢。

(到此實際上即為細菌普通染色)揭去蓋玻片,吸干水,滴加1-2滴革氏碘液媒染1min,輕輕水洗,吸干。第六頁，共十六頁，編輯于2023年，星期二實驗步驟滴加95%乙醇溶液(或30%丙酮乙醇脫色),輕輕搖動玻片至液滴無色,不要過分脫色(約30秒),立即輕輕滴加水洗;吸干。滴加蕃紅染液復染3min,輕輕滴加水洗;吸干載玻片背面及標本周圍水漬,滴上半滴水，蓋上蓋玻片,油鏡鏡檢;第七頁，共十六頁，編輯于2023年，星期二實驗步驟5.鏡檢

注意標本中細菌的形態,

大小,排列,和顏色.革蘭氏陽性菌為紫色;革蘭氏陰性菌為紅色;第八頁，共十六頁，編輯于2023年，星期二金黃色葡萄球菌(24hrs)染色結果第九頁，共十六頁，編輯于2023年，星期二金黃色葡萄球菌(48hrs)染色結果第十頁，共十六頁，編輯于2023年，星期二金黃色葡萄球菌(72hrs)染色結果第十一頁，共十六頁，編輯于2023年，星期二大腸桿菌(24hrs)染色結果第十二頁，共十六頁，編輯于2023年，星期二討論記錄并描繪革蘭氏染色結果,注意形狀,排列和顏色,看看與理論上是否相同;如不同,分析原因;

分析影響革蘭氏染色結果的因素;

酵母菌能進行染色嗎?結果如何?為什么?第十三頁，共十六頁，編輯于2023年，星期二注意事項干凈的載玻片,合適取菌量,菌齡,熱固定,每一步水洗要徹底而且吸干,和酒精脫色程度是實驗成功的關鍵禁止把染液倒入水池中,回收到廢液桶中第十四頁，共十六頁，編輯于2023年，星期二實驗三結束，準備實驗四肉湯蛋白胨培養基的配制（按實驗指導61頁配方瓊脂為2％）。400ml/組置500ml三角燒瓶中用封口膜封好瓶口，用記號筆在瓶上標明培養基名稱、組號（如周次－座次，1－3－2）、配制時間，高壓滅菌。包平皿10個/包/組、試管4支/包/組、1ml槍頭2個/包/組、5ml槍頭1個/包/組、涂布器1個/包/組，高壓滅菌。洗平