實驗二血涂片及染色第一頁，共二十一頁，編輯于2023年，星期二【目的】掌握血涂片的制備和染色。【原理】把血液制成細胞分布均勻的薄膜涂片，用瑞氏染液染色。不同的細胞種類及細胞的不同成分，對酸性及堿性染料的結合能力不同，而使各種細胞呈現出各自的染色特點?！酒鞑摹枯d玻片、推片、洗耳球、顯微鏡、香柏油、拭鏡紙、清潔液。【標本】EDTA，靜脈血。第二頁，共二十一頁，編輯于2023年，星期二瑞氏染色法【試劑】1．瑞氏(Wright)染液(1)I液:包含瑞氏染料1.0g、純甲醇600ml、甘油15ml。(2)Ⅱ液:磷酸鹽緩沖液(pH6.4～6.8)，含磷酸二氫鉀0.3g、磷酸氫二鈉0.2g、蒸餾水加至1000ml。第三頁，共二十一頁，編輯于2023年，星期二【操作】(1)采血(2)推片，推片與載片夾角30~45°平穩地向前移動，血膜應呈舌狀，頭、體、尾三部分，且清晰可見。第四頁，共二十一頁，編輯于2023年，星期二第五頁，共二十一頁，編輯于2023年，星期二(3)干燥:晃動。37℃溫箱中促干。(4)染色:將玻片平置于染色架上，滴加(Ⅰ液)3～5滴，約0.5～lmin后，滴加等量緩沖液(Ⅱ液)，搖動玻片混勻。(5)沖洗:5-10min后用流水沖去染液，待干。(6)觀察結果:將干燥后的血涂片置顯微鏡下觀察。用低倍鏡觀察血涂片體、尾交界處的血細胞。第六頁，共二十一頁，編輯于2023年，星期二一張良好血涂片的要求：

厚薄適宜頭體尾明顯細胞分布均勻邊緣整齊兩端和兩邊留有空隙第七頁，共二十一頁，編輯于2023年，星期二標準血涂片第八頁，共二十一頁，編輯于2023年，星期二血涂片分布不均主要原因：推片邊緣不齊、用力不均勻、載片不清潔

第九頁，共二十一頁，編輯于2023年，星期二四、瑞氏染色法(Wright’sstain)1.瑞士染液成分：

①

美藍（亞甲藍）：M＋堿性染料，易氧化稱為天青。

②伊紅：E－酸性染料

③

瑞氏染料：M＋＋E-ME↓（伊－美中性物）

④甲醇：溶解染料；固定細胞形態；蛋白質呈顆?；蚓W狀，增加細胞與染料的接觸。H2O甲醇第十頁，共二十一頁，編輯于2023年，星期二四、瑞氏染色法(Wright’sstain)

1.

染液成分：

①

美藍（亞甲藍）：M＋堿性染料

②伊紅（曙紅）：E－酸性染料

③

瑞氏染料：M＋＋E-ME↓（伊－美中性物）

④甲醇：溶解染料；固定細胞形態；蛋白質呈顆粒或網狀，增加細胞與染料的接觸。H2O甲醇第十一頁，共二十一頁，編輯于2023年，星期二

pH的影響：

H＋：堿性染料親和力下降，增強伊紅著色，出現紅染OH－：酸性染料親和力下降，增強美藍著色，出現藍染PBS緩沖液：pH6.4－6.8以維持恒定的pH環境第十二頁，共二十一頁，編輯于2023年，星期二3.染色方法

①

固定：滴加染液3~5滴，固定細胞0.5~1min

②

染色：加1~2倍PBS緩沖液，混勻染5~10min

③

沖洗：用流水沖去染液或加PBS緩沖液沖洗，待干。第十三頁，共二十一頁，編輯于2023年，星期二4.染色結果

①外觀：淡紫紅色

②鏡下：

紅細胞――粉紅色白細胞――胞核、胞漿及顆粒顯示特有的染色特征第十四頁，共二十一頁，編輯于2023年，星期二第十五頁，共二十一頁，編輯于2023年，星期二第十六頁，共二十一頁，編輯于2023年，星期二5.注意事項

①血膜要干透后才能染色，否則染色時易脫落；

②染色時間與染液濃度、室溫及細胞多少有關，一般染液淡、染色時間長些效果好；

③染液不能過少，以防蒸發沉淀；第十七頁，共二十一頁，編輯于2023年，星期二④沖洗時不能先倒掉染液，應以流水沖，防染料沉著。沖洗時間也不能長；⑤染色過淡時可復染，復染時先將染料稀釋好；

⑥染色過深可用水沖洗或浸泡，還可用甲醇脫色；

⑦分類最佳區域為體、尾交界處。第十八頁，共二十一頁，編輯于2023年，星期二4.影響瑞氏染色效果的一些因素：A.染料放置時間；B.溶液的酸堿度；