TLC生物自顯影篩選天然產物菊花等中的抗氧化成分1TLC（thinlayerchromatography）薄層色譜，又稱薄層層析、薄板層析、薄板色譜。TLC為其簡稱薄層色譜又叫薄板層析，是色譜法中的一種，是快速分離和定性分析少量物質的一種很重要的實驗技術，屬固—液吸附色譜。薄層色譜(ThinLayerChromatography)常用TLC表示，又稱薄層層析，屬于固－液吸附色譜。是近年來發展起來的一種微量、快速而簡單的色譜法。它兼備了柱色譜和紙色譜的優點，一方面適用于少量樣品（幾到幾微克，甚至0.01微克）的分離；另一方面在制作薄層板時，把吸附層加厚加大，將樣品點成一條線，則可分離多達500mg的樣品。因此，又可用來精制樣品，此法特別適用于揮發性較小或較高溫度易發生變化而不能用氣相色譜分析的物質。此外，在進行化學反應時，薄層色譜法還可用來跟蹤有機反應及進行柱色譜之前的一種“預試”，常利用薄層色譜觀察原料斑點的逐步消失來判斷反應是否完成。薄層色譜是在被洗滌干凈的玻板（10×3cm左右）上均勻的涂一層吸附劑或支持劑，帶干燥、活化后將樣品溶液用管口平整的毛細管滴加于離薄層板一端約1cm處的起點線上，涼干或吹干后置薄層板于盛有展開劑的展開槽內，浸入深度為0.5cm。待展開劑前沿離頂端約1cm附近時，將色譜板取出，干燥后噴以顯色劑，或在紫外燈下顯色。薄層色譜法（TLC），系將適宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或鋁基片上，成一均勻薄層。待點樣、展開后，根據比移值（Rf）與適宜的對照物按同法所得的色譜圖的比移值（Rf）作對比，用以進行藥品的鑒別、雜質檢查或含量測定的方法。薄層色譜法是快速分離和定性分析少量物質的一種很重要的實驗技術，也用于跟蹤反應進程薄層色譜法是一種吸附薄層色譜分離法，它利用各成分對同一吸附劑吸附能力不同，使在移動相（溶劑）流過固定相（吸附劑）的過程中，連續的產生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，從而達到各成分的互相分離的目的。薄層層析可根據作為固定相的支持物不同，分為薄層吸附層析(吸附劑)、薄層分配層析(纖維素)、薄層離子交換層析(離子交換劑)、薄層凝膠層析(分子篩凝膠)等。一般實驗中應用較多的是以吸附劑為固定相的薄層吸附層析。吸附是表面的一個重要性質。任何兩個相都可以形成表面，吸附就是其中一個相的物質或溶解于其中的溶質在此表面上的密集現象。在固體與氣體之間、固體與液體之間、吸附液體與氣體之間的表面上，都可能發生吸附現象。物質分子之所以能在固體表面停留，這是因為固體表面的分子(離子或原子)和固體內部分子所受的吸引力不相等。在固體內部，分子之間相互作用的力是對稱的，其力場互相抵消。而處于固體表面的分子所受的力是不對稱的，向內的一面受到固體內部分子的作用力大，而表面層所受的作用力小，因而氣體或溶質分子在運動中遇到固體表面時受到這種剩余力的影響，就會被吸引而停留下來。吸附過程是可逆的，被吸附物在一定條件下可以解吸出來。在單位時間內被吸附于吸附劑的某一表面積上的分子和同一單位時間內離開此表面的分子之間可以建立動態平衡，稱為吸附平衡。吸附層析過程就是不斷地產生平衡與不平衡、吸附與解吸的動態平衡過程。例如用硅膠和氧化鋁作支持劑，其主要原理是吸附力與分配系數的不同，使混合物得以分離。當溶劑沿著吸附劑移動時，帶著樣品中的各組分一起移動，同時發生連續吸附與解吸作用以及反復分配作用。由于各組分在溶劑中的溶解度不同，以及吸附劑對它們的吸附能力的差異，最終將混合物分離成一系列斑點。如作為標準的化合物在層析薄板上一起展開，則可以根據這些已知化合物的Rf值（后面介紹Rf值）對各斑點的組分進行鑒定，同時也可以進一步采用某些方法加以定量。Rf=溶質移動的距離/溶液移動的距離。表示物質移動的相對距離。比移值各種物質的Rf隨要分離化合物的結構，濾紙或薄層板的種類、溶劑、溫度等不同而不同，但在條件固定的情況下，Rf對每一種化合物來說是一個特定數值。儀器與材料1載版用以涂布薄層用的載板有玻璃板、鋁箔及塑料板，對薄層板的要求是：需要有一定的機械強度及化學惰性，且厚度均勻、表面平整，因此玻璃板是最常用的。載板可以有不同規格，但最大不得超過20×20，玻璃板在使用前必須洗凈、干燥備用。玻板除另有規定外，用5cm×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm的規格，要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。(2)固定相（吸附劑）或載體層層析硅膠薄層層析硅膠最常用的有硅膠G、硅膠GF〈[254]〉、硅膠H、硅膠HF〈[254]〉，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化鋁、氧化鋁G、微晶纖維素、微晶纖維素F〈[254]〉等。其顆粒大小，一般要求直徑為10～40μm。薄層涂布，一般可分無粘合劑和含粘合劑兩種；前者系將固定相直接涂布于玻璃板上，后者系在固定相中加入一定量的粘合劑，一般常用10～15％煅石膏(CaSO4.2H2O在140℃烘4小時)，混勻后加水適量使用，或用羧甲基纖維素鈉水溶液(0.5～0.7％)適量調成糊狀，均勻涂布于玻璃板上。也有含一定固定相或緩沖液的薄層。3涂布器應能使固定相或載體在玻璃板上涂成一層符合厚度要求的均勻薄層違(4炸)百點樣南器鹿肥定性估：內烘徑為費0.警5m鄙m槽管口滾平整胞的普嶼通毛嘴細管躁。飄更定量籍：微撤量注早射劑柴。慢(5分)伐展開刪室皆劣應使領用適端合載昌板大容小的蜜玻璃利制薄洗層色取譜展或開缸濁，并摧有嚴隆密的霞蓋子正，除騙另有話規定蝕外，木底部濤應平幣整光壞滑，羅應便根于觀栽察。操作投薄層斬板制暗備比除另叢有規搬定外懸，將宴1份捐固定消相和熊3份晌水在寒研缽登中向頑一方禿向研誼磨混濱合，肝去除物表面逮的氣謙泡后蟲，倒獎入涂綁布器垃中，錦在玻惰板上電平穩洞地移心動涂劑布器亮進行逆涂布定（厚境度為常0.唇2～蜓0犧.3茂mm鴿），見取下子涂好顧薄層辰的玻證板，桑置水欺平臺都上于甘室溫準下晾酒干，擾后在畝11穴0譽℃著烘3臭0分韻鐘，牽即置見有干肺燥劑特的干諒燥箱津中備愉用。而使用叛前檢賣查其尊均勻率度（恰可通顆過透荷射光少和反蕉射光欠檢視利）。充齡帥手工繼制板懂一般暑分不漆含粘秒合劑濟的軟蓮板和告含粘夢合劑慚的硬基板倆臂種。水距章常用常吸附利劑的宗基本廁情況籍：顆院粒的拒大小棵，太里大洗鉆脫劑鼻流速殿快分幸離效俱果不字好，胡太細猛溶液奮流速巧太慢余。一插般說厭來吸沙附性腔強的菜顆粒壘稍大同，吸址附性糧弱的慧顆粒日稍小狹。氧腰化鋁學一般岡在1獄00脅-1脫50挨目。臭氧化逗鋁分攀為堿堡性氧饒化鋁第，適推用于棚碳氫換化合拉物、沈生物箱堿及水堿性笛化合緊物的則分離望，一趨般適鋪用于丙PH換為9爭-1喝0的董環境勸。中扣性氧閱化鋁配適用遼于醛導、酮餅、醌淋、酯萍等P金H約棋為7酬.5蜻的中齡性物火質的脂分離綠。酸頁性氧拆化鋁弓適用陷于P口H4遷~4竹.5雖的酸前性有蘇機酸不類的厭分離詳。氧鎮化鋁炎、硅榮膠根榴據活掘性分匪為五歐個級挖，一愿級活滿性最畫高，箭五級潛最低論。腥繪黏合絨劑及徑添加岡劑：聚為了務使固安定相且（吸勸附劑梨）牢賣固地蓬附著絨在載日板上始以增巨加薄泊層的轉機械驕強度殊，有士利于出操作雪，需降要時真在吸擦附劑丘中加宗入合頂適的辣黏合躁劑：杏有時賀為了者特殊志的分教離或芹檢出觸需要鞭，要花在固始定相尼中加飽入某衛些添工加劑馳。報助薄層鄙板的閑活化遙：硅梯膠板維于1守05利-1陣1℃炭烘3旅0分袖鐘，滑氧化訊鋁板棄于1現50撿-1徒60盤℃兼烘4泛小時腐，可嘩得活妻性的款薄層耀板。點樣務除另柔有規競定外齡，用辰點樣籍器點餡樣于名薄層炸板上業，一酒般為悄圓點雙，點萌樣基鈴線距示底邊暗2.尿0c樸m供，樣陸點直羊徑及費點間肝距離駐同紙味色譜慰法,落點間凈距離趁可視豆斑點滋擴散腫情況貞以不匆影響籮檢出虧為宜量。點慮樣時尼必須晝注意貞勿損兇傷薄祝層表術面。贏詞激點樣劉直徑惰不超槐過壤5m蜓m架，點輸樣距角離一斥般為稠1~老1.要5c穩m喉即可邊。叮魂樣品蘭在溶論劑中誠的溶將解度交很大寇，原慨點將觀呈空振心環宇——史環形鐮色譜愛效應駱。因母此配薪制樣氏品溶扭液時勵應選伏擇對關組分象溶解旦度相河對較拔小的熔溶劑愿。菠連點樣眼方式橫有點慢狀點已樣和除帶狀析點樣袖。展開\o"查看圖片"龍薄層岡展開童梳展開偷劑也娃稱溶她劑系掏統，霸流動浴性或亭洗脫揮劑，睡是在苦平面來色譜尿中用弊作流擔動相召的液竿體。周展開吹劑的吹主要斧任務都是溶奮解被誤分離擱的物驢質，聲在吸泡附劑挪薄層吃上轉瞇移被掛分離播物質椅，使嘩個組兩分的熊Rf控值在毀0.帥2~驗0.議8之項間并臺對被是分離庭物質碗要有濃適當要的竿選擇先性昏。作寄為展蜻開劑敵的溶慶劑應影滿足倆以下催要求捏：適業當的范純度航、適催當的辮穩定喘性、蛋低黏會度柳、線蔥性分缺配等燭溫線蔥、很才低或旬很高警的蒸寇氣壓局一級斤盡可宵能低愁的毒張性。剪軍貸展開就方式姐總的腳來講酬平面搜色譜鍬的展淘開有姻線性驢、環鳳形及分向心小3種掏幾何武形式器。喉斜A勺單次興展開朵用芽同一雄種展框開劑主一個淺方向種展開混一次鈴，這希種方正式在卸平面睜色譜精中應飯用最娃為廣遣泛。般（垂警直上捏行展愛開，報垂直謊下行裹展開聾，一湖向水訓平展躍開，咬對向驕水平榨展開羨）總此B糾多次湊展開堂單址向對旋此展橡開，煙用相綿同的雀展開輝劑沿騰同一網方向旨進行蹈相同曲距離饅的重負復展僚開，四直至診分離圣滿意努，廣摸泛應壽用于希薄層奮色譜奪法冒押C集雙向音展開慰用槽于成閉分較肆多、豬性質乞比較進接近剪的難禽分離岔組分駱的分項離。火逗潤薄層美展開鄙展開雜室如吐需預寶先用江展開夏劑飽譜和，蝦可在渡室中前加入運足夠歉量的宇展開凱劑，據并在涉壁上腎貼二明條與拾室一但樣高環、寬薦的濾課紙條廁，一飯端浸伍入展接開劑密中，盼密封嶼室頂廈的蓋南，使幼系統膀平衡澇或按到正文狼規定等操作躍。其將點鑰好樣媽品的鏡薄層鐮板放餡入展卻開室瞎的展晌開劑怠中，剝浸入純展開告劑的斤深度攪為距胡薄層養板底帝邊0惹.5芳～1新.0需cm艱（切捧勿將稅樣點疫浸入賽展開華劑中當），膝密封曠室蓋擁，待宴展開敵至規鑰定距瓦離(提一般蹄為1宅0～吉15盾cm六)，錢取出關薄層肉板，稿晾干勁，按夜各品冷種項布下的債規定較檢測題。慕賭影響階展開優的因殃素\o"查看圖片"拉制備朋離心橫色譜遇儀樹叔A籌相對芳濕度鼠的影類響防幕B薪溶劑甩蒸汽稅的影警響（玩a伯展開曠室的充飽和粒b泛預吸窄附）辨搬喚C裂溫度恐的影竿響野銀D礎展距納的影羽響釋與分藏離度狗僅正甚比與辭展距故的平訪方根腥。顯色格勉A向光學瞎檢出游法儀猾a奧自然鞭光（纖40屢0~巡80碼0n冒m）椒惰葛b叛紫外余光（欄25友4n艦m或冊36聰5n羨m）興貫婆c湊熒光疲一職些化依合物預吸收禾了較秋短波呼長的使光，戀在瞬新間發頑射出胳比照觸射光聽波長轉更長授的光狠，而權在紙上或薄鞭層上藏顯出止不同塞顏色奪的熒脅光斑處點（單靈敏大度巴高、居專屬導性高輪）喘竄B吃蒸汽弊顯色床法\o"查看圖片"顯色罵糾多數姨有機駁化合軋物吸柱附碘暖蒸氣酷后顯瞇示不沾同程車度的墊黃褐伍色斑險點，誠這種劍反應呈有可乒逆及綱不可烈逆兩塞種情川況，簽前者童在離潑開碘勵蒸氣穩后，閱黃褐疤色斑銀點逐辱漸消緒退，薯并且膊不會袋改變錦化合醬物的陣性質威，且厭靈敏邀度也消很高惱，故疏是定幟位時揭常用晌的方伐法；逐后者單是由單于化煉合物蟻被碘距蒸氣遣氧化奸、脫露氫增按強了食共軛渾體系礎，因瑞此在鹽紫外里光下針可以變發出壩強烈嬸而穩圈定的久熒光縫，對畜定性培及定雁量都局非常棋有利進，但籌是制系備薄酷層時斯要注亭意被竿分離白的化蹤合物謝是否竹改變江了原著來的線性質解。著滴C做物理章顯色撤法好越用紫慶外照冷射分描離后謎的紙蹈或薄撫層后冰，使責化合酒物產舟生光味加成揪，光座分解拜、光眾氧化名還原掙及光復異構生等光量化學坦反應戰，導息致物險質結搶構發破生某攤些變影化，首如形超成熒卵光發市射功仰能團殃。發插生熒蚊光增乞強或闖淬滅貓及熒送光物揪質的似激發耐或發朋射波題長發阻生移番動等乳現象情，從剃而提稿高了染分析昂的靈羅敏度極和選增擇性錦。輝土D諷試劑伶顯色秀法援媽廣泛點應用潤的定炊位方醉法。教用于泄紙色僵譜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