2021中國非小細(xì)胞肺癌RET基因融合臨床檢測專家共識（全文版）摘要

我國非小細(xì)胞肺癌患者中RET基因融合的發(fā)生率占1.4%~2.5%。目前國內(nèi)外已有針對RET基因融合的靶向藥物獲批上市，療效顯著。準(zhǔn)確檢測RET基因融合是實施RET抑制劑治療的前提。然而，相對于常見的EGFR、ALK基因變異的檢測，我國RET基因融合檢測起步較晚，臨床檢測尚需進(jìn)一步規(guī)范。本編寫組在組織國內(nèi)多中心研究的基礎(chǔ)上，結(jié)合臨床實踐經(jīng)驗、文獻(xiàn)閱讀并組織專家討論，制定了本共識，以期指導(dǎo)對臨床RET基因融合檢測的實踐。肺癌是我國最常見的惡性腫瘤之一。根據(jù)國家癌癥中心發(fā)布的數(shù)據(jù)顯示，我國的肺癌發(fā)病率和病死率均居所有惡性腫瘤之首［1］。近十余年來，靶向藥物治療極大地延長了晚期非小細(xì)胞肺癌（non-smallcelllungcancer，NSCLC）的生存期，提高了患者生存質(zhì)量。除常見基因變異（如EGFR、ALK等），越來越多的罕見基因變異（如ROS1、RET、MET、NTRKs、FGFRs、NRGs等）被發(fā)現(xiàn)。針對這些罕見基因變異的靶向藥物也逐漸上市應(yīng)用于臨床，并表現(xiàn)出顯著的療效。近期，RET抑制劑普拉替尼（pralsetinib）首先被國家藥品監(jiān)督管理局（NMPA）批準(zhǔn)用于既往接受過鉑類化療的有RET基因融合的局部晚期或轉(zhuǎn)移性NSCLC患者的治療。其他RET抑制劑還包括塞爾帕替尼（selpercatinib）等。目前我國已制定了針對NSCLC中EGFR、ALK、ROS1基因變異檢測的專家共識及指南。相對于EGFR、ALK常見基因變異的檢測，我國RET檢測起步較晚［2］，隨著檢測技術(shù)的不斷涌現(xiàn)及RET抑制劑靶向藥物的獲批，規(guī)范地檢測出攜帶有RET基因融合的NSCLC患者便成了分子病理檢測的當(dāng)務(wù)之急。大規(guī)模回顧性研究數(shù)據(jù)表明，中國肺癌患者中RET融合的發(fā)生率為1.4%~2.5%［3,4］。然而，目前我國臨床RET基因融合檢測尚缺乏指導(dǎo)性專家共識或指南。本文針對不同檢測人群、檢測標(biāo)本、恰當(dāng)?shù)臋z測方法的選擇進(jìn)行了闡述，并制定、優(yōu)化了檢測流程，以期指導(dǎo)臨床檢測獲得準(zhǔn)確的結(jié)果，使患者得到最大限度的獲益。RET原癌基因位于第10號染色體長臂（10q11.21），編碼一種具有酪氨酸激酶活性的單次跨膜糖蛋白受體，作用于神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞胞外信號分子，該類分子隸屬神經(jīng)營養(yǎng)因子家族［5］。RET激酶受體可通過細(xì)胞內(nèi)酪氨酸殘基的自磷酸化激活，觸發(fā)包括RAS-MARK、PI3K-AKT、JAK-STAT、PLCγ等與細(xì)胞增殖及存活相關(guān)的信號通路。大量研究認(rèn)為多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展與RET基因異常激活密切相關(guān)，主要包括兩種改變形式：RET基因點突變及RET基因融合。RET基因點突變常發(fā)生于甲狀腺髓樣癌（MTC），最常見的突變位點是M918T。RET基因融合變異常見于甲狀腺乳頭狀癌（PTC）、NSCLC，亦可見于結(jié)直腸癌、唾液腺癌、卵巢癌等其他多種癌種中［6,7,8,9,10,11,12］。RET基因融合具有驅(qū)動腫瘤發(fā)生、發(fā)展的作用。本共識專注于肺癌RET基因融合檢測。RET原癌基因發(fā)生融合的分子機(jī)制類似于ALK融合，主要通過本身斷裂與其他基因接合的方式發(fā)生重組，形成一個含有RET基因C端與另一基因N端的新的融合基因［13］。RET基因斷裂位點常常發(fā)生在第11號內(nèi)含子，其3′端殘基含有酪氨酸活化結(jié)構(gòu)域。而RET基因的融合伴侶基因斷點較多，其5′端殘基含有螺旋折疊二聚體結(jié)合域。基因融合發(fā)生時5′端殘基反轉(zhuǎn)并移位，在胞質(zhì)內(nèi)形成融合基因序列。由于伴侶基因失去泛素化降解，使RET基因酪氨酸活化結(jié)構(gòu)域變構(gòu)，暴露磷酸化位點引起RET活化，從而增強(qiáng)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)功能，導(dǎo)致腫瘤發(fā)生［14］。除此之外，RET激酶持續(xù)活化能使腫瘤細(xì)胞分泌趨化因子、細(xì)胞因子，對腫瘤轉(zhuǎn)移、炎性微環(huán)境及內(nèi)分泌抵抗具有一定作用。RET融合基因及其產(chǎn)生的融合蛋白為體外檢測提供了靶標(biāo)，同時為靶向藥物的研發(fā)提供了靶點。盡管RET基因融合在NSCLC中發(fā)生率僅為1.4%~2.5%，但以我國每年的NSCLC患者基數(shù)估算，中國每年新發(fā)RET陽性肺癌患者約上萬人。RET基因最常見的斷裂位點位于第11號內(nèi)含子，部分融合斷點位于第11號外顯子和第10號內(nèi)含子，至今已發(fā)現(xiàn)至少50余種RET融合變體。基于國內(nèi)多中心研究成果，非小細(xì)胞肺癌中KIF5B-RET為最常見的RET融合亞型，約占所有RET融合的68.3%，其最常見斷裂位點為K15∶R12及K16∶R12；其次為CCDC6-RET（16.8%，常見斷點C1∶R12）及NCOA4-RET（1.2%）。對于未接受過靶向治療的人群，RET融合通常與EGFR、ALK、ROS1、BRAF和METex14跳躍等驅(qū)動基因變異相排斥；但是有研究表明，靶向治療（如EGFR抑制劑治療、ALK抑制劑治療）耐藥后RET基因融合可作為耐藥機(jī)制存在［15,16］。在晚期肺癌患者中檢測RET基因融合狀態(tài)可以指導(dǎo)靶向用藥。兩款高選擇性RET抑制劑普拉替尼（pralsetinib）和塞爾帕替尼（selpercatinib）因在晚期RET基因融合陽性NSCLC中顯示出良好的抗腫瘤活性和安全性，已獲得美國FDA批準(zhǔn)用于轉(zhuǎn)移性RET基因融合陽性NSCLC，2021年3月普拉替尼膠囊已獲得國家藥品監(jiān)督管理局（NMPA）批準(zhǔn)，用于治療經(jīng)含鉑類化療的RET融合陽性的局部晚期或轉(zhuǎn)移性NSCLC成人患者。在我國批準(zhǔn)用于臨床的普拉替尼是一種強(qiáng)效、高選擇性的RET激酶抑制劑，通過抑制RET/SHC/ERK1/ERK2蛋白磷酸化，抑制MAPK信號通路，從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，達(dá)到抗腫瘤的作用［8］。在ARROWⅠ/Ⅱ研究中，普拉替尼在RET融合陽性的NSCLC患者中客觀緩解率（ORR）達(dá)63%，完全緩解達(dá)6%；中國亞組數(shù)據(jù)顯示，普拉替尼在經(jīng)鉑類治療失敗后的患者中ORR達(dá)56%，疾病控制率（DCR）達(dá)97%，其中半數(shù)的患者經(jīng)歷了≥3線的系統(tǒng)治療［17］。另外，其他幾種選擇性RET抑制劑正在研發(fā)中，包括TPX-0046，它是一種RET和SRC的大環(huán)抑制劑，在臨床前研究中證實對RET溶劑前沿突變引起的耐藥有效［18］。有研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，NSCLC術(shù)后患者中，與EGFR陽性患者相比，RET融合患者無復(fù)發(fā)生存期更短（20.9個月比28.4個月），約50%的患者分期更晚（ⅢA期）［19］，因此RET基因檢測可以指導(dǎo)手術(shù)患者預(yù)后。對于晚期不可手術(shù)的RET融合NSCLC患者，目前在國內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)一線治療方案為含鉑化療，無進(jìn)展生存期（PFS）為5~9個月，RET融合的患者對免疫治療獲益有限［20,21,22,23］。此外，有研究表明，不同的RET融合類型對RET抑制劑的療效亦有差異，在接受RET抑制劑治療后CCDC6-RET患者總生存期顯著優(yōu)于KIF5B-RET患者［24］。目前，RET基因融合檢測標(biāo)準(zhǔn)和推薦方法還無定論，NCCN指南推薦NSCLC患者進(jìn)行包括RET融合基因在內(nèi)的更廣泛的基因變異譜檢測，以鑒別有可及藥物的罕見驅(qū)動基因變異，或就臨床試驗的可能性向患者提供適當(dāng)?shù)慕ㄗh。中國臨床腫瘤學(xué)會（CSCO）NSCLC診療指南（2020）推薦通過二代測序確定包括RET基因融合在內(nèi)的具有臨床意義的目標(biāo)靶點（2B類證據(jù)）。由于RET基因融合也是EGFR激酶抑制劑及ALK激酶抑制劑（TKI）獲得性耐藥機(jī)制之一［15,16］，RET基因融合的檢測對于EGFR-TKI及ALK-TKI耐藥患者的預(yù)后及耐藥后治療也有指導(dǎo)意義。1.強(qiáng)烈推薦所有經(jīng)病理診斷為肺腺癌（包括含腺癌成分的NSCLC）的晚期患者進(jìn)行RET基因檢測。對于晚期NSCLC患者，RET基因融合檢測能夠有效篩選RET抑制劑獲益人群。2.推薦經(jīng)活檢組織病理學(xué)證實為非腺癌的晚期NSCLC患者進(jìn)行RET基因檢測。部分活檢為鱗狀細(xì)胞癌的患者，經(jīng)術(shù)后病理證實存在肺腺癌成分；其他非腺非鱗NSCLC也可存在RET基因融合。因此，本共識推薦經(jīng)活檢組織病理學(xué)證實為非腺癌的晚期NSCLC患者進(jìn)行RET基因檢測，以期使這部分患者獲得更多治療方案的選擇。3.推薦EGFR-TKI及ALK-TKI耐藥患者進(jìn)行RET基因融合檢測。已有文獻(xiàn)報道，對于EGFR-TKI及ALK-TKI用藥人群，RET基因融合可作為耐藥機(jī)制存在。因此，本共識推薦對于曾接受過EGFR-TKI及ALK-TKI治療的患者，耐藥后無論之前是否進(jìn)行過RET基因融合檢測，除進(jìn)行常見耐藥機(jī)制（如T790M等）檢測外，應(yīng)考慮通過二代測序技術(shù)檢測包括RET融合在內(nèi)的耐藥靶點，以期使這部分患者明確耐藥機(jī)制，為后續(xù)治療方案的選擇提供依據(jù)。4.推薦術(shù)后明確為浸潤性腺癌的患者，除檢測常見驅(qū)動基因變異（EGFR、ALK）外，應(yīng)考慮檢測包括RET基因融合在內(nèi)其他罕見基因變異。有研究表明，RET基因融合與手術(shù)患者預(yù)后相關(guān)。實驗室平臺可及時推薦RET與EGFR、ALK、ROS1等同時行多基因檢測。1.腫瘤組織樣本。病理醫(yī)師需要對組織病理切片進(jìn)行評估，包括有無出血、壞死和不利于核酸檢測的前處理（例如強(qiáng)酸脫鈣處理），腫瘤細(xì)胞的總量和比例。組織標(biāo)本中腫瘤細(xì)胞含量建議達(dá)到20%以上，低于此標(biāo)準(zhǔn)可富集后檢測。腫瘤組織樣本若保存時間過長或者未經(jīng)規(guī)范化前處理，可能會影響檢測結(jié)果。若腫瘤組織需要進(jìn)行脫鈣處理，推薦使用EDTA為基礎(chǔ)的脫鈣液以保證核酸的保存及質(zhì)量。2.細(xì)胞學(xué)樣本。包括胸腹積液、支氣管刷檢、支氣管內(nèi)超聲引導(dǎo)細(xì)針穿刺活檢（EBUSFNA）樣本、痰、肺泡灌洗液等。此種樣本進(jìn)行基因檢測結(jié)果同樣有效，是晚期肺癌患者較為常用的檢測樣本類型。但此種樣本往往量少，需要評估樣本中的腫瘤細(xì)胞含量及比例，評估滿足檢測要求后方可進(jìn)行基因檢測。3.液體活檢。對于不能獲得組織或細(xì)胞學(xué)樣本的晚期肺癌患者，可采用血液、胸腹積液上清、腦脊液上清等進(jìn)行基因檢測，但存在一定的假陰性率。晚期NSCLC患者的血液中存在循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA），其血漿中ctDNA有相對更高的檢出率。推薦使用含有游離DNA保護(hù)劑及防細(xì)胞裂解保護(hù)劑的專用采血管收集血漿。若使用常規(guī)EDTA抗凝管，應(yīng)在血液離體后2h內(nèi)及時進(jìn)行血漿分離凍存或提取。嚴(yán)禁使用肝素抗凝管采集的血液進(jìn)行ctDNA檢測。對于部分晚期發(fā)生腦膜轉(zhuǎn)移的NSCLC患者，腦脊液上清對顱內(nèi)腫瘤的ctDNA具有富集作用，可通過腰椎穿刺獲取腦脊液上清提取ctDNA并進(jìn)行相關(guān)基因檢測。與腫瘤組織和細(xì)胞學(xué)樣本相比，血液和腦脊液中的ctDNA含量較低，應(yīng)選擇高靈敏度的二代測序方法，其基因結(jié)果具有較高的特異度，但靈敏度較差。因此液體活檢為無法獲得組織/細(xì)胞學(xué)樣本時的補(bǔ)充檢測，具有一定假陰性，若液體活檢未檢測到相關(guān)變異，可考慮再取組織或細(xì)胞學(xué)樣本進(jìn)行檢測。目前常見的分子病理檢測方法包括免疫組織化學(xué)（IHC）、熒光原位雜交（FISH）、即時熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）、二代測序技術(shù)等。其他技術(shù)平臺，如數(shù)字PCR、Nanostring等也逐漸成熟，有待進(jìn)入臨床應(yīng)用積累更多的臨床實踐經(jīng)驗。所有分子病理檢測方法均具有優(yōu)缺點，也受所檢基因變異類型和數(shù)量、標(biāo)本類型、標(biāo)本數(shù)量和質(zhì)量、實驗室條件等影響。必要時需行多平臺檢測互補(bǔ)和驗證［25］。以上五種方法基本可分為三類：基于蛋白表達(dá)的檢測，基于組織/細(xì)胞學(xué)樣本核酸（DNA或RNA）的檢測，及基于體液游離腫瘤DNA的檢測。以下詳細(xì)闡述各方法的優(yōu)勢及局限性。1.基于蛋白的RET基因融合檢測：免疫組織化學(xué)主要是利用抗原-抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對其進(jìn)行定位、定性及相對定量的檢測技術(shù)。在臨床病理診斷中廣泛應(yīng)用。最新研究表明IHC檢測RET融合其靈敏度50%~100%，特異度30%~90%，綜合評價靈敏度和特異度，IHC不是作為RET診斷的最佳手段。另外，RET融合蛋白的表達(dá)均位于胞質(zhì)中，少見胞膜表達(dá)，因此IHC判讀較為困難。并且，在實際操作過程中，存在抗體克隆選擇多樣、參照標(biāo)準(zhǔn)選擇不明確、陽性閾值不確定等問題，且病理報告解讀也是制約IHC檢測在臨床應(yīng)用的因素。此外，通過IHC檢測確定RET表達(dá)量指導(dǎo)臨床靶向治療療效也存在偏差，有報道證實存在RET無表達(dá)的患者使用RET抑制劑有效的現(xiàn)象［19］。因此，參考其他指南，目前暫不推薦直接用IHC檢測RET基因融合表達(dá)。特異性抗體選擇和IHC標(biāo)準(zhǔn)化流程制定是推動免疫組織化學(xué)技術(shù)在RET融合基因檢測應(yīng)用的關(guān)鍵。2.基于腫瘤組織或細(xì)胞DNA/RNA的RET基因融合檢測：（1）FISH檢測：FISH技術(shù)利用熒光標(biāo)記的特異核酸探針與細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的靶DNA分子雜交，通過觀察熒光信號，來確定目的基因分離或融合狀態(tài)，是檢測基因易位/融合的“金標(biāo)準(zhǔn)”。FISH檢測技術(shù)對腫瘤細(xì)胞的含量要求較低（樣本中存在50個以上的腫瘤細(xì)胞即可進(jìn)行判讀），但是在檢測RET融合時也存在以下幾點限制：首先FISH檢測不能提供關(guān)于融合伴侶基因的充分信息［24,26］，需進(jìn)一步明確定義陽性結(jié)果的臨界值（cut-off值）；其次，F(xiàn)ISH檢測對于操作和判讀要求相對較高，需有經(jīng)驗豐富的醫(yī)師判定結(jié)果；再者，有文獻(xiàn)報道FISH是一種敏感但是非特異的RET融合檢測方法，對于發(fā)生了RET基因重排但未產(chǎn)生實質(zhì)性基因融合的病例，F(xiàn)ISH可能會出現(xiàn)假陽性的情況，因此對于非典型的FISH結(jié)果（如單色、伴有信號擴(kuò)增等），建議使用RT-PCR或RNANGS進(jìn)行進(jìn)一步驗證［27］。除上述因素外，F(xiàn)ISH檢測經(jīng)典RET融合（KIF5B-RET，CCDC6-RET）的靈敏度最高，分別為100%和95%，其他非經(jīng)典融合如NCOA4-RET靈敏度僅為66.7%［28］。這些因素檢測時均應(yīng)引起關(guān)注。綜上所述，推薦在NGS或RT-PCR不可及的情況下使用FISH進(jìn)行檢測，或樣本量較少或質(zhì)量不佳時，首選FISH檢測。若遇非經(jīng)典分離/融合信號或位于判斷陽性閾值交界時，應(yīng)用其他檢測方法進(jìn)行驗證。（2）NGS高通量測序：NGS根據(jù)檢測基因分子的類型不同分為基于DNA水平和RNA水平進(jìn)行檢測RET基因融合。①DNA-NGS：通過捕獲平臺在DNA水平能夠檢測到包括已知和未知位點在內(nèi)的所有RET基因易位，但是其準(zhǔn)確性會受捕獲探針的覆蓋度、標(biāo)本DNA質(zhì)量，以及生物信息學(xué)分析等關(guān)鍵因素影響［29］。且DNA水平檢測到部分罕見融合斷裂位點可能并不能代表RNA水平的融合位點，在極少數(shù)情況下，DNA水平上檢測到的基因易位并不會引起融合基因的表達(dá)。目前文獻(xiàn)報道靈敏度為87.2%~100%，特異度為98.1%~100%。因此，基于DNA的靶向測序分析通常輔以RNA測序方法驗證，在臨床應(yīng)用前明確其靈敏度和特異度。②RNA-NGS：通過擴(kuò)增子平臺在RNA水平上進(jìn)行檢測，僅需要極少量的RNA就能檢測到RET融合基因表達(dá)，但是檢測范圍一般僅局限于特定的常見融合類型，罕見融合可能會漏檢。此外，RNA水平檢測對樣本質(zhì)量要求較高，保存時間較長導(dǎo)致RNA降解、FFPE組織在制作過程中導(dǎo)致RNA交聯(lián)無法完整提取等情況都對結(jié)果產(chǎn)生較大影響，高度降解或者交聯(lián)的RNA因片段太短而不能提供完整的基因信息，并且會妨礙文庫構(gòu)建和測序［30,31］。基于捕獲的文庫構(gòu)建能檢測所有基因融合變異，但同樣受到臨床樣本質(zhì)量的限制。NGS能有效鑒定出FISH不能明確診斷的RET陽性肺癌患者。除了檢測靈敏度比較高外，NGS還可以同時檢測多個其他靶點。這樣既節(jié)約了標(biāo)本，也節(jié)省了患者等待檢測結(jié)果的時間，對于突變頻率不高的靶點，重要性顯著提高。基于這些優(yōu)勢，NCCN肺癌指南從2014年第3版開始，推薦使用NGS同時檢測ALK、ROS、RET融合。在檢測多基因的時候也需要注意考慮組織標(biāo)本的量。小活檢標(biāo)本應(yīng)優(yōu)化檢測流程，合理設(shè)計檢測項目和方法，避免二次活檢［32,33,34,35］。（3）RT-PCR：RT-PCR法檢測RET融合基因的特點在于快速、簡便易行、能同時明確RET已知的融合變體的類型，但因為RT-PCR只能檢測已知RET融合基因類型，所以存在假陰性可能，在臨床應(yīng)用中可能會低估RET融合發(fā)生率［36］。因涉及基于mRNA的PCR擴(kuò)增，其對于檢測環(huán)境和標(biāo)本質(zhì)量都有比較高的要求，因此開展基于PCR技術(shù)檢測RET融合變異的實驗室環(huán)境要求較高，應(yīng)強(qiáng)化內(nèi)、外部質(zhì)控，避免污染。對于Ct值在閾值范圍附近的患者，在進(jìn)行結(jié)果判讀時需要謹(jǐn)慎對待，需結(jié)合標(biāo)本質(zhì)量、腫瘤細(xì)胞含量、質(zhì)控情況等綜合分析。必要時使用其他技術(shù)平臺進(jìn)行進(jìn)一步復(fù)檢。該方法適用于中性甲醛溶液固定石蠟包埋的腫瘤組織標(biāo)本和各類新鮮組織或細(xì)胞學(xué)標(biāo)本［37］。（4）NanoString技術(shù)：數(shù)字化基因分析系統(tǒng)是最新的多重基因定量檢測技術(shù)。該技術(shù)可直接檢測條形碼探針標(biāo)記的單個mRNA轉(zhuǎn)錄子，并通過數(shù)字計數(shù)進(jìn)行定量。它僅需100ng的RNA即可對逾800個特異的mRNA轉(zhuǎn)錄子進(jìn)行準(zhǔn)確的定量。有文章報道NanoString和FISH檢測在檢測肺癌ALK、ROS、RET基因融合方面一致性可高達(dá)100%。技術(shù)準(zhǔn)確性層面NanoString應(yīng)用于臨床檢測具有可行性。NanoString技術(shù)平臺自動化程度非常高，通過機(jī)器就可以直接讀數(shù)，并且單次反應(yīng)能夠同時檢測800多條序列，高通量檢測可以大大節(jié)約臨床標(biāo)本，針對單個基因的檢測成本也大大降低。但是目前國內(nèi)由于設(shè)備未能普及，另外還有融合探針的合成、試劑性能驗證、NMPA批準(zhǔn)等因素，短期內(nèi)應(yīng)用于臨床尚不現(xiàn)實［38］。3.基于液體活檢標(biāo)本ctDNA的RET基因融合檢測：液體活檢標(biāo)本（包括血液、胸腹積液、腦脊液等）中存在游離DNA（cell-freeDNA，cfDNA），其中攜帶腫瘤特有變異信息的為ctDNA。目前ctDNA被NMPA推薦用于晚期NSCLC中血EGFR等多項基因檢測。由于ctDNA在腫瘤患者體內(nèi)的含量很低，約占整體cfDNA的1%，半衰期短，約為2h。因此需要靈敏度高的檢測技術(shù)，并且可能存在假陰性。多項研究證實使用ctDNA檢測RET融合可行［39］，但存在局限性。有報道認(rèn)為轉(zhuǎn)移性NSCLC在初始發(fā)病或疾病進(jìn)展時檢出率較高，RET融合在ctDNA中的含量隨腫瘤負(fù)荷和治療過程變化而變化；經(jīng)典KIF5B-RET、CCDC6-RET融合均可用NGS-DNA檢出，但在大多數(shù)情況下，RET融合探針的覆蓋度有限［40,41］，因此在用外周血檢測RET融合時，必須考慮到這些檢測的局限性，當(dāng)出現(xiàn)陰性結(jié)果時，應(yīng)在報告中注明假陰性的可能性。1.RET基因融合臨床檢測流程推薦：在臨床實踐中，多種檢測方式已應(yīng)用于檢測RET基因融合，但靈敏度和特異度不同，各具有優(yōu)缺點。檢測醫(yī)師應(yīng)根據(jù)送檢標(biāo)本的類型、數(shù)量及質(zhì)量、所檢基因變異類型和數(shù)量，以及實驗室條件等合理選擇檢測方式，必要時行多平臺檢測互補(bǔ)和