基因工程的操作步驟第1頁，共17頁，2023年，2月20日，星期一

最常用的質粒是大腸桿菌的質粒，其中常含有抗藥基因，如四環素的標記基因。質粒的存在與否對宿主細胞生存沒有決定性作用，但復制只能在宿主細胞內成。

質粒是一種裸露的、結構簡單、獨立于細菌染色體（即擬核DNA）之外，并且具有自我復制能力的雙鏈環狀DNA分子。質粒是基因工程最常用的運載體。第2頁，共17頁，2023年，2月20日，星期一當限制酶從識別序列的中心軸線處切開時，產生的是平末端。當限制酶從識別序列的中心軸線兩側切開時，產生的是黏性末端。第3頁，共17頁，2023年，2月20日，星期一四、基因工程基本操作的四個步驟1、目的基因的獲取2、基因表達載體的構建3、將目的基因導入受體細胞4、目的基因的檢測與鑒定第4頁，共17頁，2023年，2月20日，星期一目的基因的獲取1、目的基因主要是指______________________編碼蛋白質的結構基因，是人們所需要轉移或改造的基因。如蘇云金芽孢桿菌的抗蟲基因，還有植物的抗病（抗病毒、抗細菌）基因、種子貯藏蛋白的基因，以及人的胰島素基因、干擾素基因等。2、獲取目的基因的常用方法有哪些?（1）從基因文庫中獲取（2）利用PCR技術擴增（3）人工合成請閱讀P9第一和二兩段第5頁，共17頁，2023年，2月20日，星期一（一）從基因文庫中獲取目的基因將含有某種生物不同基因的許多DNA片斷，導入到受體菌的群體中，各個受體菌分別含有這種生物的不同基因，稱為基因文庫基因文庫

基因組文庫部分基因文庫（如:cDNA文庫）①基因文庫第6頁，共17頁，2023年，2月20日，星期一①概念：PCR全稱為_______________，是一項在生物____復制___________的核酸合成技術③條件：_______________________、_______________、___________、___________.②原理：__________④方式：以_____方式擴增，即____（n為擴增循環的次數）⑤結果：聚合酶鏈式反應體外特定DNA片段DNA復制已知基因的核苷酸序列四種脫氧核苷酸一對引物DNA聚合酶指數2n使目的基因的片段在短時間內成百萬倍地擴增(二)利用PCR技術擴增目的基因第7頁，共17頁，2023年，2月20日，星期一

過程高溫變性（解旋為單鏈）低溫退火（引物與單鏈互補結合）適溫延伸（在Taq酶的作用下合成與模板互補的DNA雙鏈）重復循環第8頁，共17頁，2023年，2月20日，星期一思考：PCR技術與DNA復制有何異同？第9頁，共17頁，2023年，2月20日，星期一對DNA連接酶、DNA聚合酶等的理解名稱

作用

生理過程DNA連接酶

限制酶DNA聚合酶RNA聚合酶解旋酶連接兩個DNA片段基因工程切割某種特定的脫氧核苷酸序列基因工程將眾多游離的脫氧核苷酸聚合成脫氧核苷酸長鏈DNA復制逆轉錄轉錄RNA復制DNA復制轉錄使堿基間氫鍵斷裂形成脫氧核苷酸鏈將眾多游離的核糖核苷酸聚合成核糖核苷酸長鏈第10頁，共17頁，2023年，2月20日，星期一①②③④8.（2010廣州模擬）下圖為DNA分子在不同酶的作用下所發生的變化，圖中依次表示限制酶、DNA聚合酶、DNA連接酶、解旋酶作用的正確順序是（）A.①②③④B.①②④③

C.①④②③D.①④③②C第11頁，共17頁，2023年，2月20日，星期一第12頁，共17頁，2023年，2月20日，星期一基因組文庫與部分基因文庫的關系怎樣從基因文庫中得到我們所需的目的基因呢?第13頁，共17頁，2023年，2月20日，星期一基因文庫的構建方法鳥槍法：供體細胞中的DNA許多DNA片段運載體限制酶與載體連接載入受體細胞產生特定性狀導入外源DNA擴增目的基因分離(直接分離法)第14頁，共17頁，2023年，2月20日，星期一②反轉錄法：

以目的基因轉錄成的信使RNA為模板，反轉錄成互補的單鏈DNA，然后在酶的作用下合成雙鏈DNA，從而獲得所需的基因。目的基因的mRNA單鏈DNA反轉錄酶DNA聚合酶雙鏈DNA(目的基因)第15頁，共17頁，2023年，2月20日，星期一③根據已知的氨基酸序列合成DNA法：

根據已知蛋白質的氨基酸序列，推測出相應的信使RNA序列，然后按照堿基互補配對原則，推測出它的結構基因的核苷酸序列，再通過化學方法，以單核苷酸為原料合成目的基因。蛋白質的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列結構基因的核苷酸序列推測推測目的基因化學合成第16頁，共17頁，2023年，2月20日，星期一上述三種目的基因提取的方法有何優缺點？優點缺點鳥槍法反轉錄法根據已知氨基酸合成D