基因工程框架復習基因工程框架復習第1頁考情分析命題重點：基因工程工具與操作程序

基因工程原理和應用考查頻度：高考高頻考點,5年19考

如年全國1卷和3卷考查方向：多以最新基因工程結果為載體，結合其它工程技術進行綜合考查基因工程框架復習第2頁基因工程復習目標一、基因工程操作工具和詳細步驟（熟悉掌握）二、明確解題思緒基因工程框架復習第3頁基因工程操作工具基因工程框架復習第4頁以下關于限制性核酸內切酶敘述，錯誤是(

)A限制性核酸內切酶可從原核生物中提取B同一個限制酶切割不一樣DNA分子產生末端能夠進行堿基互補配對C限制酶能任意切割DNA分子，從而產生大量DNA片段D每一個限制性核酸內切酶只能識別特定核苷酸序列基因工程框架復習第5頁限制性核酸內切酶1.起源：原核細胞2.簡稱限制酶（沒有其它簡稱）3.是酶就含有酶特征（受溫度、PH影響）4.能識別雙鏈DNA分子某種特定核苷酸序列（不能識別RNA序列）5.作用部位：磷酸二酯鍵6.DNA切割結果：產生黏性末端或平末端7.相同限制酶切出末端一定相同，不同限制酶切出末端也可能相同基因工程框架復習第6頁已知限制酶I識別序列和切點是—G↓GATCC—

限制酶Ⅱ識別序列和切點是—↓GATC—。

請問這兩種酶切出黏性末端能否相連？基因工程框架復習第7頁DNA連接酶作用部位：磷酸二酯鍵E.coliDNA連接酶只能連黏性末端T4DNA連接酶既能連黏性末端也能連平末端比較：限制酶ECOR1切出是黏性末端Sma1切出是平末端基因工程框架復習第8頁運載體作為運載體必備條件1.在受體細胞中能復制并穩定保留（讓目標基因能一起復制2.有一個至多個限制酶切割位點(供外源基因插入)3.含有標識基因(判別受體細胞中是否含有目標基因)---最常見載體質粒（大腸桿菌Ti質粒含T-DNA）λ噬菌體衍生物動植物病毒基因工程框架復習第9頁基因工程基礎操作程序1、目標基因獲取2、基因表示載體構建3、將目標基因導入受體細胞4、目標基因檢測與判定基因工程框架復習第10頁步驟一獲取目標基因1、人工合成2、從基因文庫中獲取3、利用PCR技術擴增(基因比較小，序列已知)基因文庫基因組文庫個別基因文庫－－如：cDNA文庫原理:雙鏈DNA分子復制條件：模板、引物熱穩定DNA聚合酶四種脫氧核苷酸能量基因工程框架復習第11頁組成個別復制原點（復制起點）開啟子（RNA聚合酶識別和結合部位）目標基因（位于開啟子和終止子之間）終止子（終止轉錄）標識基因（如抗生素抗性基因或熒光基因。構建時最少有一個）第二步：基因表示載體構建(關鍵)基因工程框架復習第12頁第三步：將目標基因導入受體細胞

將目標基因導入植物細胞農桿菌轉化法、基因槍法，花粉管通道法將目標基因導入動物細胞顯微注射法將目標基因導入微生物細胞感受態細胞法（Ca2+處理）------轉化過程基因工程框架復習第13頁步驟四目標基因檢測和判定接種試驗抗原－抗體雜交法分子雜交法DNA分子雜交法受體是否含有轉基因特征個體水平目標基因是否翻譯目標基因是否轉錄目標基因是否導入受體細胞分子水平方法檢測對象基因工程框架復習第14頁當轉基因技術和其它技術綜合考查時解題思緒：一.明確目標，要取得什么？是基因產品、轉基因植物還是轉基因動物找到目標基因和受體細胞二.細化過程基因工程框架復習第15頁1.取得基因產品：取得含目標基因微生物細胞(普通)---培養微生物---取得產品2.取得轉基因植物：將目標基因導入植物細胞---進行植物組織培養---取得轉基因植物3.取得轉基因動物：將目標基因導入動物受精卵（或經過核移植取得）---早期胚胎培養---胚胎移植---獲取轉基因動物基因工程框架復習第16頁重度呼吸綜合征是有一種新型冠狀病毒（MERS-CoV）引發病毒性呼吸道疾病，科學家利用大腸桿菌大量生產病毒蛋白，以探究其作為MERS疫苗可能性，結合所學知識回答以下相關問題：（1）研究早期，科學家首先分離出病毒RNA分子，在___________酶作用下，以_____________為原料，取得DNA分子。（2）在構建表示載體過程所使用限制酶普通來自_______生物體內，構建好表示載體包含________、_________、開啟子和終止子。其中開啟子是________酶結合位點（3）基因工程取得細胞產品時候經常采取大腸桿