現(xiàn)在是1頁\一共有37頁\編輯于星期四植物細胞A植物細胞B去掉細胞壁去掉細胞壁原生質(zhì)體A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體融合雜合的原生質(zhì)體再生出細胞壁雜種細胞細胞分裂分化發(fā)育愈傷組織雜種植株溫故知新:植物體細胞雜交過程現(xiàn)在是2頁\一共有37頁\編輯于星期四材料1:1970年，有兩位科學家做了一個人—鼠細胞融合的實驗，以證明細胞膜的流動性。那么，如何實現(xiàn)人—鼠細胞的融合，動物細胞融合后還有什么用途呢？人-鼠(想像圖)現(xiàn)在是3頁\一共有37頁\編輯于星期四A細胞B細胞人工誘導1.1動物細胞融合的概念雜交細胞動物細胞融合（也稱細胞雜交）：是指兩個或多個細胞融合形成一個單核細胞的過程。一、動物細胞融合現(xiàn)在是4頁\一共有37頁\編輯于星期四細胞膜的流動性滅活病毒、PEG、電激等融合后的細胞進行有絲分裂，形成完整的雜交細胞誘導的手段？融合后細胞的類型？AB雜種細胞遺傳物質(zhì)有什么特點？三種AA、AB、BB（A、B）含兩種生物的遺傳物質(zhì)1.2動物細胞融合過程原理？現(xiàn)在是5頁\一共有37頁\編輯于星期四1.2動物細胞融合過程為什么滅活的病毒滅活病毒誘導細胞融合的原理：能作誘導劑？滅活喪失感染性保留融合活性現(xiàn)在是6頁\一共有37頁\編輯于星期四滅活病毒誘導細胞融合的原理：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細胞互相凝聚，細胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合。滅活是指用物理或化學手段使病毒或細菌失去感染能力，但并不破壞這些病原體的抗原結(jié)構(gòu)。P52生物技術(shù)資料卡現(xiàn)在是7頁\一共有37頁\編輯于星期四1.3動物細胞融合技術(shù)的意義和應(yīng)用現(xiàn)在是8頁\一共有37頁\編輯于星期四植物細胞雜交與動物細胞融合的比較比較項目植物體細胞雜交動物細胞融合原理融合前處理使用的酶誘導方法主要用途細胞膜的流動性細胞的全能性細胞膜的流動性纖維素酶、果膠酶胰蛋白酶或膠原蛋白酶物理方法（離心、振蕩、電激）化學方法（PEG）物理、化學方法（PEG）滅活的病毒獲得雜種植株制備單克隆抗體去除細胞壁后誘導原生質(zhì)體融合使細胞分散后誘導細胞融合現(xiàn)在是9頁\一共有37頁\編輯于星期四有夢想，才會有創(chuàng)造！已成功的動物細胞融合實例有很多，如人—小鼠、人—兔、人—雞、鼠—兔、雞—鼠等上百種融合細胞。甚至已成功完成了酵母菌—雞、人—胡蘿卜等細胞的融合。生物種間雜交想像圖現(xiàn)在是10頁\一共有37頁\編輯于星期四【例1】能使動物細胞融合的特有的誘導因子是（）A.離心B.滅活的病毒C.電刺激D.振動【例2】融合后的雜交細胞的遺傳物質(zhì)有何特點（）具有原來兩個或多個細胞的遺傳信息B.能無限增殖C.可形成新個體D.培養(yǎng)過程會貼壁【例3】動物細胞融合的作用中最重要的是（）A.克服遠源雜交不親和B.制備單克隆抗體C.培育新物種D.生產(chǎn)雜種細胞

BB初試牛刀A現(xiàn)在是11頁\一共有37頁\編輯于星期四強調(diào)：效應(yīng)B淋巴細胞是能夠產(chǎn)生抗體的B淋巴細胞，下文將其簡稱為B淋巴細胞抗體：能夠與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的免疫球蛋白。能產(chǎn)生抗體的細胞是漿細胞（即效應(yīng)B細胞）。溫故知新二、單克隆抗體B淋巴細胞效應(yīng)B淋巴細胞記憶B淋巴細胞分化現(xiàn)在是12頁\一共有37頁\編輯于星期四抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法抗原反復注射動物從動物的血清中分離抗體該法制備抗體的缺點：產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。如何解決這個問題呢？單克隆抗體！現(xiàn)在是13頁\一共有37頁\編輯于星期四讀下面一段資料，找出單克隆抗體的概念

人們發(fā)現(xiàn)，在動物發(fā)生免疫反應(yīng)的過程中，體內(nèi)的B細胞可以產(chǎn)生多達百萬種以上的特異性抗體，但是每個B細胞只分泌一種化學性質(zhì)單一、特異性強的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個B細胞進行無性繁殖，即克隆。2.1單克隆抗體的概念單克隆抗體：單個B細胞克隆產(chǎn)生的化學性質(zhì)單一、特異性強的抗體現(xiàn)在是14頁\一共有37頁\編輯于星期四提示1：對B細胞進行細胞培養(yǎng)可行嗎？提示2：我們所學的哪種細胞是可以無限增殖的？問題：如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？請嘗試設(shè)計一個方案。2.2單克隆抗體的制備

現(xiàn)在是15頁\一共有37頁\編輯于星期四一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體骨髓瘤細胞能無限增殖雜交瘤細胞動物細胞培養(yǎng)技術(shù)設(shè)計方案：動物細胞融合技術(shù)單克隆抗體既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量增殖的細胞1975年英國科學家米爾斯坦和柯勒的實驗現(xiàn)在是16頁\一共有37頁\編輯于星期四①為什么給小鼠注射特定的抗原蛋白？②會有幾種融合方式？③雜交瘤細胞是如何篩選出來的？有何特點？④是否所有的雜交瘤細胞都能產(chǎn)生專一性抗體？⑤如何大規(guī)模進行培養(yǎng)得到大量的單克隆抗體？現(xiàn)在是17頁\一共有37頁\編輯于星期四BB

、B瘤、瘤瘤（B、瘤）（第一次篩選）選擇性培養(yǎng)基：只有雜交瘤細胞才能存活獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗體的B細胞（第二次篩二選）：選能產(chǎn)生所需專一抗體的雜交瘤細胞√體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)雜交瘤細胞特點：既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量增殖。現(xiàn)在是18頁\一共有37頁\編輯于星期四整個制備過程為何要經(jīng)過兩次篩選?第一次篩選：用特定的選擇培養(yǎng)基篩選出多種雜交瘤細胞第二次篩選（克隆化培養(yǎng)和抗體檢測）：篩選出能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細胞。現(xiàn)在是19頁\一共有37頁\編輯于星期四39.篩選出的雜交瘤細胞產(chǎn)生的是同一種抗體嗎？否，由于與骨髓瘤細胞融合的B淋巴細胞有許多種，因此從這些種雜交瘤細胞中提取抗體的仍然是多種抗體的混合物。

抗原

抗原針對同種抗原的多種抗體40.怎樣從眾多雜交瘤細胞中篩選到能產(chǎn)生我們需要的產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細胞？通常采用有限稀釋克隆細胞的方法獲得單細胞克隆，再利用抗原抗體雜交法檢測，篩選出分泌產(chǎn)生所需特異抗體的雜交細胞株，然后進行擴大培養(yǎng)。現(xiàn)在是20頁\一共有37頁\編輯于星期四多孔動物細胞培養(yǎng)板將含有雜交瘤細胞的培養(yǎng)液按比例稀釋，分別加入多孔細胞培養(yǎng)板的小孔中，稀釋度保證每個小孔中的細胞數(shù)不多于1個，進行細胞培養(yǎng)。抗原抗體雜交法檢驗呈陽性利用抗原抗體雜交法檢測雜交瘤細胞產(chǎn)生的特異性抗體現(xiàn)在是21頁\一共有37頁\編輯于星期四陽性孔方法——抗原-抗體雜交法

在單克隆抗體制備過程中，兩次篩選的原理和方法是不相同的。第一次篩選第二次篩選現(xiàn)在是22頁\一共有37頁\編輯于星期四41.如何得到大量的單一抗體？培養(yǎng)特異的雜交瘤細胞，從中提取出單一抗體，即單克隆抗體。體外培養(yǎng)或體內(nèi)培養(yǎng)42.如何培養(yǎng)雜交瘤細胞？現(xiàn)在是23頁\一共有37頁\編輯于星期四單抗制備過程分哪幾步？請用箭頭把以下代表單克隆抗體制備過程步驟的圖解的字母按正確順序連接起來。順序是？

你學會了嗎？現(xiàn)在是24頁\一共有37頁\編輯于星期四單克隆抗體篩選二雜交細胞雜交瘤細胞體外或體內(nèi)培養(yǎng)篩選一骨髓瘤細胞

誘導融合分泌特異抗體的雜交瘤細胞雜交瘤細胞群提取已免疫的B淋巴細胞動物細胞融合技術(shù)動物細胞培養(yǎng)技術(shù)單克隆抗體的制備既能大量繁殖又能產(chǎn)生專一抗體特異性強靈敏度高可大量制備課堂小結(jié)注射抗原現(xiàn)在是25頁\一共有37頁\編輯于星期四2.3單克隆抗體的應(yīng)用診斷試劑——最廣泛應(yīng)用準確、高效、簡易、快速單克隆抗體最主要的優(yōu)點：特異性強，靈敏度高，并能大量制備。現(xiàn)在是26頁\一共有37頁\編輯于星期四“生物導彈”＝單克隆抗體＋藥物單抗導向，藥物為彈頭治療疾病和運載藥物主要用于治療癌癥治療，單克隆抗體作為載體，運載抗癌藥物，形成“生物導彈”，準確殺傷癌變細胞。現(xiàn)在是27頁\一共有37頁\編輯于星期四謝謝現(xiàn)在是28頁\一共有37頁\編輯于星期四【例1】科學家用小鼠骨髓瘤細胞與某種細胞融合，得到雜交細胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細胞融合的是（）A.經(jīng)過免疫的B淋巴細胞C.經(jīng)過免疫的T淋巴細胞B.不經(jīng)過免疫的T淋巴細胞D.不經(jīng)過免疫的B淋巴細胞【例2】單克隆抗體是由下列哪種細胞產(chǎn)生的（）B淋巴細胞B．T淋巴細胞C．骨髓瘤細胞D．雜交瘤細胞A初試牛刀D現(xiàn)在是29頁\一共有37頁\編輯于星期四(1)若A細胞是小鼠骨髓瘤細胞，則B細胞是取自小鼠體內(nèi)的

細胞，從小鼠體內(nèi)提取分離該細胞之前，應(yīng)給小鼠注射_____________類物質(zhì)。（2）d過程是一個_____________過程，該過程的進行常用_____________或_____________的誘導。(3)假設(shè)僅考慮某兩個細胞的融合，則可形成

種類型的C細胞，因此需用__________培養(yǎng)基篩選出D細胞用于培養(yǎng)，D細胞的名稱是

，其特點是_________________________________________。效應(yīng)B

抗原

細胞融合

聚乙二醇滅活的病毒

選擇性3既能無限增殖又能產(chǎn)生特異性抗體

雜交瘤細胞現(xiàn)在是30頁\一共有37頁\編輯于星期四(4)在培養(yǎng)時通過________分裂方式大量繁殖。D細胞體外培養(yǎng)需要注意的條件是（要求答5項）__________________________________。（5）單克隆抗體在疾病的診斷、治療和預防方面，與常規(guī)抗體相比，其特點是_________________。特異性強、靈敏度高

有絲無菌、無毒的環(huán)境；充足的營養(yǎng)；適宜的溫度和pH；適宜的氣體環(huán)境

現(xiàn)在是31頁\一共有37頁\編輯于星期四15、（1）單克隆抗體是指

。（2）制備單克隆抗體的步驟：①將__________注入小鼠體內(nèi)，從小鼠脾臟中獲得淋巴細胞，其中至少1個淋巴細胞帶有抗該抗原的抗體。②將步驟①獲得的B淋巴細胞與步驟②培養(yǎng)的骨髓瘤細胞在_________________的誘導下融合。③將誘導后產(chǎn)生的多種細胞，放在_______培養(yǎng)基的多孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)，篩選。④這樣獲得的雜交瘤細胞既具有B淋巴細胞_____________的能力，又具有________________的本領(lǐng)。⑤檢測和分離帶有抗X抗體的陽性細胞，培養(yǎng)板中每孔放一個細胞進行培養(yǎng)。⑥將陽性細胞進行增殖，從而制備出大量抗該抗原的單克隆抗體。化學性質(zhì)單一，特異性強的抗體

抗原

聚乙二醇選擇性

無限增殖

產(chǎn)生專一抗體現(xiàn)在是32頁\一共有37頁\編輯于星期四（3）大量制備單克隆抗體的方法主要有兩種：①體外培養(yǎng)法，可獲得10μg/mL的抗體；②動物體內(nèi)誘生法可獲得5~20mg/mL的抗體。你選擇的方法及原因是

。（4）用本法制備出的單克隆抗體仍具有局限性，因為它是用小鼠的_______細胞制備的，其化學本質(zhì)是___________，應(yīng)用于人體，會作為

產(chǎn)生

，解決這個問題的方法是_____________________________。大量生產(chǎn)選①，小規(guī)模生產(chǎn)選②效應(yīng)B蛋白質(zhì)異物免疫反應(yīng)采用人的效應(yīng)B細胞制備現(xiàn)在是33頁\一共有37頁\編輯于星期四15、右圖為某同學根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計的生產(chǎn)破傷風桿菌抗體的實驗方案。據(jù)圖回答：

（1）該方案能達到預期效果嗎？

。原因是

______________________________________________。

（2）圖中②為

過程，常用

作為誘導劑。該細胞繼承了________