載稱解釋細胞培養(動物細胞培養)：動物細胞培養是指將動物活體體內取出的組織用機械或消化的方法分散成單細胞在類似于體內生存環境的體外環境中，進行孵育培養，使其生存、生長并維持其結構與功能的方組織培養：從生物體內取出活的組織(多只組織塊)在體外進行培養的方法。有時泛指所有的體外培養。器官培養：是將活體內的器官(一般是胚胎器官)、器官的一部分或器官原基在體外進行培養的方法。無血清培養基：由基礎培養基和替代血清的補充因子(生長因子和激素、結合蛋白等)組成。體外培養的細胞在貼附底物上連接成片、相互接觸后失去運動的現象。去分化(脫分化)：細胞在體外不可逆地失去原有特性。注意：去分化不意味分化能力完全喪失！在適當調節表現出分化特性。但分化能力會隨培養時間延長而逐漸喪失。：各種分化細胞，在體外培養時逐漸失去各自的形態與功能特征，表現出某種趨同性。原因：培養條件分化發生阻抑細胞分裂指數(MI)：是指細胞群中每1000個細胞中的分裂相數量原代細胞從培養瓶中取出，配制成細胞懸浮液，分裝到兩個或兩個以上的培養瓶中繼續培養，稱1)體外培養細胞，其生長方式主要有貼壁生長和懸浮生長兩種，分別稱為貼壁細胞和懸浮細胞。2)一般可將貼壁細胞生長的體外培養細胞大體分為成纖維細胞型、上皮細胞型、游走細胞型、多行細胞型四種3)體外培養細胞的主要生長特點：①貼附生長②接觸抑制③密度依賴性培養細胞分化狀態的變化：①去分化(脫分化)②不適應要求：1)培養前準備2)操作間消毒3)洗手和著裝4)火焰消毒用液的類型、配制和無菌處理方法：1)操作程序規范2)試劑設備專人負責3)培養用品定點存放2、平衡鹽溶液(BBS)：(1)成分：無機鹽和葡萄糖，少量酚紅。(2)作用：維持滲透壓、緩沖和調節酸堿酶消化液主要作用是水解細胞之間的蛋白質，使細胞相互分離。要作用是通過結合(螯合)細胞間質中的二價陽離子從而破壞細胞之間的細胞連接。達到分散細胞的目的。載液：膠原酶是從細胞中提取的一種酶，對膠原組織和細胞間質有較強的消化作用，而對培養細胞一般2)合成培養基：根據細胞生存所需物質的種類和數量，用人工方法模擬合成的，配方恒定的培養基。3)完全培養基;定義：在合成培養基里添加血清后的培養基。細胞生長培養基:常用培養基，血清含量高,10-4)無血清培養基：定義：由基礎培養基和替代血清的補充因子(生長因子和激素、結合蛋白等)組成。合成培養基(基礎培養基)的成分只能維持細胞生存素：防止污染不同。可分為潛伏期、指數生長期、停滯期(平頂期)1.潛伏期特點：1)細胞適應新環境的恢復期(包括懸浮期、貼壁期、潛伏期三個時期)2)可有運動活動，基細胞分裂指數和細胞群體倍增時間表示。6、動物細胞培養具有一系列優點：刪胞培養技術研究細胞的生命活動規律，可以很方便地采用各種實驗技術和方法來、檢測和記錄。極其廣泛。好的細胞群，降低實驗成本。載2、動物細胞培養的缺點：③體外培養的細胞與體內生長的細胞存在或多或少的差異。(形態和功能的差異)理想的培養實驗室可分為：準備室、緩沖室(與培養室相連的消毒房間，作為隔離培養室與外面非消毒房間的緩沖地帶)、培養室(一間或幾間)，普通實驗室、辦公室。培養細胞生命期：指細胞在培養中持續增殖和生長的時間。包括三個階段：原代培養期、傳代培養期、衰退期。1.原代培養期(也稱初代培養，即從體內取出組織接種培養到第一次傳代階段，一般持續1一4周)2.傳代培養期(定義：原代細胞接種到兩個或以上的器皿繼續進行培養標志進入傳代培養期)亡。驟 (2)在遺傳學上的應用染色體分析，雜交育種。 (3)在胚胎學上的應用通過體外培養卵母細胞，進行體外受精、胚胎分割和移植。 (4)在病毒學上的應用培養細胞為病毒的增殖提供場所。 (5)在藥理學領域的應用藥品、食品添加劑等對機體的毒性及其產生不良影響的安全性調查。(許多致畸、胞會發生染色體結構和數目的變異。) (1)用于遺傳疾病和先天畸型的產前診斷用羊膜穿刺技術獲得胎兒細胞，培養后進行染色體分析，診斷胎兒是否患有遺傳性疾病或先天畸型。 (2)用于癌癥的早期診斷和預防通過培養淋巴細胞，對其染色體進行對比分析檢測出易患癌癥的病人，進及早的預防和治療。 (3)用于臨床治療目前已有將正常骨髓細胞經大量培養后植入患造血障礙癥患者體內進行治療的報道。 新品種的培育可大大縮短育種進程，且更加經濟有效。胚胎干細胞的研究成果和克隆羊多莉的4.在生物制品生產上的應用細胞可生產的生物制品有各類疫苗、干擾素、激素、酶、生長因子、病毒殺蟲劑、單克隆抗體等。載染。牛血清和小牛血清，它們的區別清是從母牛剖腹取出的胎牛中分離出來的血清，對許多細胞系均有促進生長作用，主要用于細胞株的保化法傳代步驟 (1)吸出或倒掉瓶內的舊培養液。 (5)計數，接種到新的培養瓶。采用離心法傳代細胞連同培養液一并轉移到離心管內，800-1000rpm離心5min,然后取出上清，加入新的培養液到離心管內，1)培養液觀察培養液的顏色和透明度的變化。pH2)細胞生長狀況倒置顯微鏡觀察。4、微生物污染：培養液渾濁、漂浮菌絲。長減緩、胞質顆粒增多、培養液不變混。“去分化”不可逆(染色體變化)。“不適應”可重新誘導(培養條件變化)載去分化需要注意：①去分化并不意味著完全返回胚胎時期的原始細胞狀態。如:高度分化的神經細胞和心肌經喪失的增生活性不可能恢復，但已經具備的生物電活動特性不會完全失去。作用：在細胞代謝中有重要作用，是細胞合成核酸和蛋白質必需氨基酸，(在缺少時，細胞生長不良死亡)。二章細胞凍存的原則：慢凍快融2)加冷凍保護劑(常用：甘油或二甲基亞砜(DMSO))冷凍保護劑作用機理：1)冷凍保護劑易同溶液中水分子結合，從而降低冰點，減少冰晶的形成；易受損的-5~0度，這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內即①將恒溫水浴箱的溫度調至37~40℃。②從液氮中取出凍存小管，立即投入37~40℃溫水中快速晃動，直至凍存液完全融解。要在1~2min內完成、細胞活性檢查、苯胺黑等。2.四唑鹽(MTT)比色法：活細胞可沉淀四唑鹽并形成藍紫色結晶，再用DMSO溶解結晶物，溶液顏色的深淺三章：組織塊培養是即將組織剪切成小塊后，接種于培養瓶培養的方法。基本方法：將剪成的小組織團塊接種于培養瓶(或皿)中，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶載。離法消化細胞、鏡檢；②發現組織已分散成細胞團或單個細胞，終止消化，篩網過濾，大塊繼材的基本要求 (3)及時培養：可培養液4℃暫存。 (5)營養豐富：添加10%血清。 (6)采用易培養組織：組織類型、分化程度、年齡等。 (7)作好記錄：來源等信息及標本要保留。2)組織材料的分離方法可采用機械分散法(物理裂解)和消化分離法。。有的優點1，可以免受機體內部因素的影響，從而便于研究理化和生物等因素對腫瘤細胞生命的影響2、便與研究腫瘤細4、可用抗癌藥物的快速篩選瘤性。四章培養技術：指在人工條件下，在細胞生物反應器中高密度大量培養動物細胞用于生產生物制品微載體：微載體指直徑在60~250微米，能適用于細胞貼壁培養的微珠，一般由葡聚糖或各種合成聚合物組成。模培養方法微囊化培養是指在無菌條件下將擬培養的細胞、生物活性物質以及生長介質共同包裹在薄的半透膜中形成微囊， (一)貼壁培養載 (二)固定化培養于貼壁依賴性細胞，又適用于非貼壁依賴性細胞的包埋培養，細胞密度高，抗剪切力和抗污染力法：吸附法、包埋法、微囊法 (三)懸浮培養①微載體表面性質與細胞有良好的相容性，適用細胞附著、伸展和增殖；收獲；④粒徑在60~250μm(溶脹后)之間，均一，差異不大于20μm。有利于細胞均勻分布在各微載體表面；120℃高溫，便于采用高壓蒸汽滅菌；①培養初期階段；②粘附貼壁階段；③維持培養階段；④細胞收獲階段；階段模培養技術的應用載1)溫和、快速、不損傷細胞，盡量在液體和生理條件下操作2)所用試劑和膜材料對細胞無毒害3)膜的孔徑可控制，必須使營養物和代謝物自由通過4)膜應有足夠機械強度抵抗培養中的攪拌。介紹的幾種生物反應器各自優缺點①能提供充足氧氣；②良好的傳質傳熱及密閉性能；③制備材料對細胞無毒；④有自動檢測調控系統；高，3、中空纖維細胞培養反應器優點1)培養器體積小，細胞高細胞損害小；2)濃縮產品；3)易于分離產物，不易清洗維護，價格高五章起機體產生抗體的分子結構，叫做抗原決定簇。B。理化性狀高度均一、生物活性單一、與抗原結合的特異性強，便于人為處理和質量控制位改變時，單抗不能發揮其作用應用：1)用于疾病的診斷和治療：2)作為載體制備導向藥物。幾個問題是什么1)細胞比例2)反應時間3)反應溫度4)PEG的選擇交瘤技術制備單克隆抗體的基本原理1)要制備單克隆抗體需先獲得能合成專一性抗體的單克隆B淋巴細胞，但B淋巴細胞不能在體外生長。載 2)而骨髓瘤細胞可在體外生長繁殖，應用細胞雜交技術使骨髓瘤細胞與免疫的淋巴細胞融合，得到雜種骨髓瘤 3)雜種細胞既具有B淋巴細胞合成專一抗體的特性，也有骨髓瘤細胞能在體外培養增殖永存的特性，用這種來徑合成DNA。這時正常細胞可以通過“補救合成途徑”,由胸腺嘧啶激酶(HK)和次黃嘌呤磷酸核糖轉移酶 (HGPRT)利用T和H合成核酸而繁殖。6、酶聯免疫吸附法(ELISA)原理第六章外植體：用于植物組織(細胞)培養的器官或組織(的切段)。離的懸浮細胞(單個細胞)，通過繼代培養使細胞增殖來獲得大量細胞群體的方法。。載2、外植體的預處理： (3)深層滅菌：氯化汞、次氯酸鈉等。 4.從愈傷組織分離得到細胞。素濃度很重要配合一定濃度的細胞分裂素；添加附加物。