高中生物微生物的培養與應用第一頁，共二十六頁，2022年，8月28日1.概念：是一切肉眼看不見或看不清楚的微小生物的總稱。2.分類細胞結構核結構

微生物類群無細胞結構無核病毒、亞病毒（擬病毒、類病毒、朊病毒）有細胞結構原核古細菌、真細菌、放線菌、藍細菌真核酵母菌、霉菌、藻類、原生動物知識點一：微生物簡介第二頁，共二十六頁，2022年，8月28日圖1-1常見的三種細菌典型形態A.球菌B.桿菌C.弧菌細菌第三頁，共二十六頁，2022年，8月28日真菌酵母菌青霉毛霉蘑菇靈芝木耳第四頁，共二十六頁，2022年，8月28日芽孢：

有些細菌在一定的條件下，細胞里形成一個橢圓形的休眠體，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環境有很強的抵抗力。例如，有的細菌的芽孢，煮沸3小時以后才死亡。芽孢又小又輕，可以隨風飄散。當環境適宜（如溫度、水分適宜）的時候，芽孢又可以萌發，形成一個細菌.第五頁，共二十六頁，2022年，8月28日菌落：單個或少數細菌在固體培養基上大量繁殖時，就會形成一個肉眼可見的，具有一定形態結構的子細胞群體，叫做菌落。菌落是鑒定菌種的重要依據。第六頁，共二十六頁，2022年，8月28日1．培養基的類型及作用劃分標準培養基種類特點用途物理性質液體培養基不加凝固劑工業生產半固體培養基加凝固劑，如瓊脂觀察微生物的運動、分類鑒定固體培養基微生物的分離、鑒定、活菌計數、保藏菌種化學成分天然培養基含化學成分不明確的天然物質工業生產合成培養基培養基成分明確(用化學成分已知的化學物質配成)分類、鑒別用途選擇培養基允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他微生物生長培養、分離出特定微生物，如培養酵母菌和霉菌，可在培養基中加入青霉素；培養金黃色葡萄球菌，可在培養基中加入高濃度食鹽

鑒別培養基根據微生物的代謝特點，在培養基中加入某種指示劑或化學藥品鑒別不同種類的微生物，如用伊紅—美藍培養基鑒別飲用水或乳制品中是否有大腸桿菌(若有，菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤)知識點二：培養基第七頁，共二十六頁，2022年，8月28日pH要適宜：

細菌pH為6.5–7.5;放線菌pH為7.5–8.5;真菌;pH5.0–6.0培養基的營養物質

不管哪種培養基，一般都含有水、碳源、和氮源、無機鹽等營養物質，另外還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養物質,例如:生長因子(即細菌生長必需，而自身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等的要求。

第八頁，共二十六頁，2022年，8月28日營養物質作用舉例碳源提供碳元素（有機碳源還能提供能量）無機碳源：CO2、NaHCO3

有機碳源：糖類、脂肪酸、花生粉餅、石油氮源提供氮元素，主要用于合成蛋白質、核酸以及含氮的代謝產物分子態氮、氨、銨鹽、硝酸鹽、尿素、牛肉膏、蛋白胨等生長因子微生物生長不可缺少的微量有機物，一般是酶和核酸的組成成分。主要包括維生素、氨基酸和堿基等無機鹽細胞內的組成成分，生理調節物質，某些化能自養菌的能源，酶的激活劑,包括大量元素和微量元素水在生物體內含量很高，在低等生物內含量更高培養基的營養物質及作用第九頁，共二十六頁，2022年，8月28日1.無菌技術的概念

無菌操作泛指在培養微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。（成功的關鍵）

知識點三：無菌技術第十頁，共二十六頁，2022年，8月28日2.消毒與滅菌第十一頁，共二十六頁，2022年，8月28日第十二頁，共二十六頁，2022年，8月28日第十三頁，共二十六頁，2022年，8月28日1.無菌技術除了用來防止實驗室的培養物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？2.請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1）培養細菌用的培養基與培養皿（2）玻棒、試管、燒瓶和吸管（3）實驗操作者的雙手無菌技術還能有效避免操作者自身被微生物感染。（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。思考：第十四頁，共二十六頁，2022年，8月28日

高濃度酒精能將細菌表面的蛋白質凝固，并形成一層保護膜，阻止酒精進入細菌體內，因而不能將細菌徹底殺死。酒精濃度低于70%，雖可進入細菌體內，但不能將細菌徹底殺死。只有70%-75%的酒精即能順利地進入到細菌體內，又能有效地將細菌體內的蛋白質凝固，因而可徹底殺死細菌。3.利用酒精消毒時，酒精濃度是不是越高越好？第十五頁，共二十六頁，2022年，8月28日知識點四：制備牛肉膏蛋白胨固體培養基第十六頁，共二十六頁，2022年，8月28日

配制牛肉膏蛋白胨固體培養基的步驟及注意事項:(1)步驟：計算―→稱量―→溶化―→滅菌―→倒平板(2)注意事項:①倒平板的溫度一般在50℃左右適宜，溫度過高會燙手，過低培養基又會凝固。②平板需倒置，這樣既可使培養基表面的水分更好地揮發，又可防止皿蓋上的水珠落入培養基，造成污染。第十七頁，共二十六頁，2022年，8月28日1.培養基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養基的溫度？問題討論

答：可以用手觸摸盛有培養基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進行倒平板了。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？

答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養基。第十八頁，共二十六頁，2022年，8月28日3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養微生物嗎？為什么？

答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結水珠，凝固后的培養基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養基表面的水分更好地揮發，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養基，造成污染。

答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養基上滋生，因此最好不要用這個平板培養微生物。第十九頁，共二十六頁，2022年，8月28日微生物的接種技術：接種：將有菌的材料或純粹的菌種轉移到另一無菌的培養基上的過程。平板劃線接種：主要用于分離、純化培養稀釋涂布接種：主要用于分離菌種并計數知識點五：大腸桿菌的純化第二十頁，共二十六頁，2022年，8月28日

純化大腸桿菌的操作過程及注意事項：(1)原理：在培養基上將細菌稀釋或分散成單個細胞，使其長成單個的菌落，這個菌落就是一個純化的細菌菌落。(2)方法：平板劃線法、稀釋涂布平板法。①平板劃線法：平板劃線法中細菌的分離和稀釋過程發生在接種環在固體平板表面上的移動劃線過程中。在線的開始部分，微生物往往連在一起生長，隨著線的延伸，菌數逐漸減少，最后可能形成純種的單個菌落。(如下圖)第二十一頁，共二十六頁，2022年，8月28日問題討論

1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環？在劃線操作結束時，仍然需要灼燒接種環嗎？為什么？

答：操作的第一步灼燒接種環是為了避免接種環上可能存在的微生物污染培養物；每次劃線前灼燒接種環是為了殺死上次劃線結束后，接種環上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數的增加，使每次劃線時菌種的數目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結束后灼燒接種環，能及時殺死接種環上殘留的菌種，避免細菌污染環境和感染操作者。第二十二頁，共二十六頁，2022年，8月28日2.在灼燒接種環之后，為什么要等其冷卻后再進行劃線？答：以免接種環溫度太高，殺死菌種。3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？

答