臨床分子診斷學緒論第一節：定義與歷史回顧通過研究核酸、蛋白生物大分子的結構、功能及其相互作用的規律，來闡明生命的分子基礎的科學。用分子生物學理論、技術和方法研究人體內源性或外源性生物大分子及其體系的存在與否，結構與表達調控的變化，為疾病的預防、預測、診斷、治療和轉歸提供信息和決策依據的學科。JamesDeweyWatson（1928～）

FrancisHarryComptonCrick（1916～）1953年，DNA雙螺旋結構模型被提出來了，兩位創立者是美國生物化學家沃森（JamesDeweyWatson，1928～）和英國生物物理學家克里克（FrancisHarryComptonCrick，1916～2004）。獲1962年的諾貝爾生理學醫學獎。

1953年，DNA雙螺旋結構模型被提出來了，兩位創立者是美國生物化學家沃森（JamesDeweyWatson，1928～）和英國生物物理學家克里克（FrancisHarryComptonCrick，1916～2004）。獲1962年的諾貝爾生理學醫學獎。

一.WatsonandCrick的DNA模板學說DNA是遺傳的物質基礎

DNA的構成脫氧核糖｛核.苷酸

A(腺嘌啉)T(胸腺嘧啶)G(鳥嘌啉)C(胞嘧啶)磷酸DNA的半保留復制YourDNAandMine!

Areviewofdeoxyribonucleicacid中心法則DNARNA蛋白質轉錄轉譯所謂基因是指DNA長鏈上的一個結構單位,是與合成某一肽鏈有關的一段DNA序列反轉錄二.MonodandJacob的操縱子學說操縱子學說:提出了基因調控和表達的概念三.基因工程的工具酶和載體工具酶｛DNA限制性內切酶DNA連接酶末端連接酶單鏈核酸酶反轉錄酶例:EcoRⅠ5?GAATTC33?CTTAAG55?GAATTC33?CTTAAG5↓↑和DNA體外重組基因工程技術的產生載體｛質粒噬菌體病毒特點:環狀DNA專一感染某一類細胞如:大腸桿菌具有某種選擇性標記(耐某種抗生素基因)有一些內切酶的酶切位點可隨染色體的復制而復制,隨細胞分裂而擴增①②③④⑤分子生物學臨床檢驗簡史分三個階段：準備建立發展1976年簡悅威首創a-地中海貧血與1978年鐮狀細胞貧血產前診斷DNA分子雜交1985年聚合酶鏈反應（polymerasechainreaction,PCR)技術創立始于20世紀90年代中期以生物芯片（biochip)技術為代表的高通量密集型技術日趨成熟的DNA測序技術

DNAPolymerasedNTPssingle-strandedtemplateprimerdNTPsDNApolymeraseprimer3’-GATCGATTCATC-5’Thenewstrandgrowsinthe5’to3’directionalways!TheoreticalRealLifeLogTargetDNAEfficiencyisnot100%EnzymegetstiredPrimerslosetheracetotemplateDNAPolymerasePrimerTargetDNATaqManprobehybridizesfirstPrimersannealnextPolymeraseencountersthehybridizationprobePolymerasechewsofftheendoftheprobe,separatingthefluoresceinandTAMRAThresholdCycle,Ct,ofthesame96replicatesshowsnearlyidenticalvalues第二節：臨床分子生物學檢驗的應用與發展感染性疾病的診斷與治療腫瘤的診斷、治療、預后以及復發與轉移遺傳病的診斷其它病毒性肝炎（HBV、HCV)的基因監測性病相關病原體基因人巨細胞病毒、單純皰疹病毒（HSV）、弓形蟲及風疹病毒基因突發傳染性引起重癥肺炎的SARS、禽流感病毒結核桿菌、肺炎支原體、EB病毒、傷寒桿菌與幽門螺旋桿菌HBVDNA檢測的臨床意義是HBV存在的直接依據是病毒復制的標志是患者具有傳染性的標志對兩對半起補充作用判斷治療反映最敏感的指標檢出隱匿性慢性乙型肝炎在HCV感染的診斷中具有十分重要的意義常見性傳播疾病病原體淋病雙球菌（NG）沙眼衣原體（CT）解脲支原體（UU）人類乳頭瘤病毒（HPV）人類免疫缺陷病毒（HIV）用于非典型肺炎的診斷直接檢出病原體，早、快與特異指導治療方案的制定流行病學調查檢測TBDNA的意義利福平結核桿菌RNA聚合酶

說明：α-地貧是由于α珠蛋白基因的缺陷或缺失導致α珠蛋白鏈合成障礙所引起的溶血性貧血。本次檢測共擴增1管，1800bp、2000bp、1600bp和1300bp的條帶分別是α-珠蛋白正常基因擴增產物、α-珠蛋白基因-α3.7缺失型、-α4.2缺失型和-SEA缺失型的擴增產物。

M123M143M：分子量marker1、2：-SEA雜合子DNA擴增產物3：正常人DNA擴增對照4：-α3.7缺失型雜合子擴增產物2000bp1584bp1375bpα-地中海貧血PCR檢測

M

123M：分子量Marker1：168bp陽性對照2：93bp陽性對照3：正常人對照說明：90%以上的慢性粒細胞性白血病（CML）患者具有Ph染色體，成為慢粒的細胞學遺傳標志。該染色體是由位于9q34的原癌基因C-ABL和22q11的BCR基因融合形成的特異染色體易位。由于融合位點存在差異，陽性標本經巢式RT-PCR擴增，可擴增出長168bp或93bp的融合基因片段。501bp331bp242bp190bp147bp110bp巢式RT-PCR檢測BCR-ABL融合基因FISH檢測BCR-ABL融合基因圖1圖2為BCR/ABL陽性細胞，圖3為正常細胞說明：探針為BCR/ABL雙色雙融合探針，紅色熒光信號為9q34ABL，綠色熒光信號為22q11BCR，黃色熒光信號為融合位點。非小細胞肺癌靶向治療敏感性基因檢測Exon19

MseI

Exon21

MscIwildGATGTTGCTTCTCTTAATTCCTTGATATTTTGGGCTGGCCAAACT

Sau96ImutantCGGAGATGTTTTGATAGCGACGTTTTGGGCGGGCCAAACT技術原理肺癌患者外周血游離核酸EGFR基因突變體酶切富集巢式PCR檢測靶向治療腫瘤種類靶向藥物檢測基因檢測方法非小細胞肺癌易瑞沙（吉非替尼）特羅凱（厄洛替尼）EGFRK-RASBRAFALK基因測序突變大腸癌西妥昔單抗/愛必妥K-RASBRAF基因測序突變乳腺癌曲妥珠單抗/赫賽汀HER2FISH檢測基因含量黑色素瘤PLX4032

BRAF（v600e)基因測序突變胃間質瘤伊馬替尼/格列衛c-kit基因測序突變以及基因檢測表達基因表達與用藥K-RAS、BRAF基因突變檢測不能應用靶向藥物EGFR檢測突變無突變突變應用靶向藥物Eml4-ALK基因檢測無突變陰性陽性靶向ALK分子治療化療藥物治療指導用藥

藥物靶基因檢測方法臨床意義鉑類ERCC1核苷酸修復相關基因熒光定量PCR檢測基因表達低表達使腫瘤對藥物敏感抗微管類藥物紫杉醇,長春新堿TUBB33型微管蛋白熒光定量PCR檢測基因表達低表達使腫瘤對藥物敏感吉西他濱RRM1核酸核苷還原酶熒光定量PCR檢測基因表達低表達使腫瘤對藥物敏感抗代謝藥物TYMS胸腺苷合成酶熒光定量PCR檢測基因表達低表達使腫瘤對藥物敏感伊利替康UGT1A1尿苷葡萄糖醛酸轉移酶基因測序檢測突變判定伊立替康用藥的毒性依托泊苷TOP2ADNA解旋酶熒光定量PCR檢測基因表達低表達使腫瘤對藥物敏感芳香化酶抑