本文格式為Word版，下載可任意編輯——光學顯微成像光學顯微攝影的用光方法與技巧攝影用光技巧攝影用光技巧大揭秘

光學顯微攝影即顯微攝影電子顯微攝影而用的術語。由物鏡(倍率2-100倍)和目鏡(5-15倍)的組合，若用35毫米照相機，可在膠片上拍成5-800倍。若為六寸片，能拍出20-3000倍的照片，但光學顯微鏡倍率限度約為1200倍。若超出此限度舉行擴印，無法獲得明顯的像。光學顯微攝影務必要有亮堂、平勻、無反光的照明，同時要留神光源的調理和色溫的變化。另外，由于樣品的性能差異，還要選用不同的照明方法。下面是我為您整理的關于光學顯微攝影的用光方法與技巧，夢想對您有所扶助!

光學顯微攝影的用光方法與技巧一、光學顯微攝影的用光

光學顯微攝影的照明，會對物鏡解像力產生明顯影響，一般要求光源的輸出能夠集中到很小面積上，光強高、熱量小，幾何尺寸不大。

在一般明視場照明顯微攝影時，通常采用6伏或者12伏螺口形白熾鎢絲燈泡做照明光源，色溫為2700～3200K，其亮度的調整由變壓器實現，這種照明盡管看上去很亮，色溫并不高，所以，應盡量用最高電壓，使燈光亮度、色溫提高，并使用RAW格式拍攝，以便后期校正色溫。

但是，白熾鎢絲燈泡長期使用，其鎢絲蒸發后所產生的沉物會積聚在玻璃罩內壁，這樣會降低亮度與色溫。所以，12伏100瓦的鹵素鎢絲燈光便成了光學顯微攝影的優質光源。(這種鹵素鎢絲燈在燈管內充鹵素氣體，在燈絲點燃后，蒸發出來的鎢會與鹵素氣體形成鹵化鎢，附著在燈管內壁，而關閉電源冷卻時，鹵化鎢又會分解，屆時鎢又回到燈絲上去，這樣便延長了燈泡的使用壽命，改善了光源照明，縮小了燈泡的幾何尺寸，提高了光源強度)。

用于光學顯微攝影的光源還有氙燈、鋯燈、電子閃光燈、汞蒸氣燈等，可以根據不同的目的，選用適當的光源。如氙燈不僅可以發出連續的可見光，還包含長波紫外線和紅外光譜片面;汞蒸氣是優質的單色光源，更加適于單色黑白顯微攝影。

拍攝顯微照片，要求有亮堂、平勻、無反光的照明條件，其照明方法可分為兩類，即透射照明和反射照明(落射光照明)

透射光照明是指從光源射出的光線從標本的下面透過標本進入物鏡。而落射照明是指光線從正面投射到標本的正面，物鏡采納的光是從標本反射來的光。

落射光照明主要用于拍攝不通明的標本，如皮膚、小生物、植物果實外觀等。拍出的像有立體感。落射光與物鏡之間的角度越小越好，現代顯微攝影裝置的落射光大多與物鏡合軸。在沒有專業設備的處境下可以用斜射照明，在對應面加反光屏，或用另一只燈做輔佐光，也可以使用環形閃光燈。

光學顯微攝影的用光方法與技巧二、光學顯微攝影的曝光操縱

雖然現在的相機均有自動測光或自動曝光功能，但是假設一個視野中亮處面積超過二分之一，那么易展現曝光缺乏的現象，所以假設標本主體小，又處在亮背景中，就要適當增加曝光時間。

在操縱曝光時，要留神以下因素：

1.光源強度的影響：由于電壓的變化，光源亮度可能產生5-10倍的變化。

2.光源的距離及對標本的照射面積。

3.光源的波長及色溫。光源的波長長、色溫低，色光偏紅時，曝光時間要長些。光波短，色溫高，色光偏青時，曝光時間要短些。

4.電壓的波動會引起曝光量的變更，所以攝制過程中要保持電壓的相對穩定。

5.聚光器的位置經過測驗固定后不宜改動。

6.使用濾色鏡、乳白玻璃、偏振鏡等都要按其曝光指數增加曝光時間(手動曝光)。

7.目鏡的放大倍率。以5倍的目鏡作曝光基準1時，10倍目鏡要4倍的曝光量，15倍目鏡要增至9倍的曝光。

8.物鏡的倍率和NA值：假設把10倍的目鏡作為1時，40倍目鏡要2.5倍的曝光，100倍的物鏡要4倍的曝光。

9.從目鏡出射點到感光片的距離

10.標本的染色也會對曝光產生影響

11.標本與目鏡間的介質折射率大、曝光時間短，反之，曝光時間長。曝光時間與折射率成反比。

12.聚光鏡的光闌孔徑變化能使曝光產生2～20倍的變化。

光學顯微攝影的用光方法與技巧三、光學顯微攝影中濾色鏡的應用

濾色片幾乎在拍攝什么樣的標本都有用場。例如：

1.用濾色片校正反差突出重點光學顯微攝影往往要突出重點，這就要使用適當的濾色鏡加強反差，強調需要突出的重點布局，而減弱其非重點片面。使用標本染色補色的濾色鏡可以鞏固標本反差，譬如蘇木精染出的色標本中用綠濾色鏡，就可鞏固反差。

2.兩種顏色的布局表達：假設想使標本中兩種以上的顏色都領會地呈現在畫面上，如紅、藍兩種顏色，可以采取兩次曝光的方法，先用紅濾色鏡，再用藍濾色鏡各曝一次光，就可以領會地表達兩種顏色的布局。

3.短波光濾色鏡可以提高對標本的辨識率。短波光濾色鏡(如UV鏡)可以辨識出在可見光下肉眼看不見的組織布局。用紫外線濾色片合作