PAGEPAGE4課時訓練13多聚酶鏈式反響擴增DNA片段根底夯實1.聚合酶鏈式反響(PCR技術)是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法,由高溫變性、低溫退火及適溫延伸等幾步反響組成一個周期,循環進行,使目的DNA得以迅速擴增,其簡要過程如下圖。以下關于PCR技術表達不正確的選項是()A.PCR技術是在實驗室中以少量DNA制備大量DNA的技術B.反響中新合成的DNA又可以作為下一輪反響的模板C.PCR技術中以核糖核苷酸為原料,以指數方式擴增D.應用PCR技術與探針雜交技術可以檢測基因突變答案：C2.PCR過程中的復性是指()A.在90℃B.在50℃C.在90℃D.在50℃答案：D3.當引物與DNA母鏈通過堿基互補配對結合后,DNA聚合酶就能開始延伸DNA子鏈,那么正確的選項是()A.從5'端延伸DNA子鏈B.DNA的合成方向總是從子鏈的5'端向3'端延伸C.子鏈延伸的方向是5'→3'或3'→5'D.DNA的合成方向總是從子鏈的3'端向5'端延伸答案：B4.引物長度通常為20~30個核苷酸的一段()A.DNAB.RNAC.DNA或RNA D.雙鏈DNA答案：C5.在PCR實驗操作中,以下說法錯誤的選項是()A.在向微量離心管中添加各種試劑時,只需一個槍頭B.離心管的蓋子一定要蓋嚴,防止液體外溢C.用手指輕彈離心管側壁的目的是使反響液充分混合D.離心的目的是使反響液集中在離心管的底部,提高反響效果答案：A6.以下有關PCR過程的表達,不正確的選項是()A.變性過程中破壞的是DNA分子內堿基對之間的氫鍵,也可利用解旋酶實現B.復性過程中引物與DNA模板鏈的結合是依靠堿基互補配對原那么完成的C.延伸過程中需要DNA聚合酶、ATP、四種核糖核苷酸D.PCR與細胞內DNA復制相比,其所需要酶的最適溫度較高答案：C7.DNA檢測技術可應用于親子鑒定、遺傳病檢測等領域。DNA檢測離不開對樣品DNA的PCR擴增。不同樣品DNA的擴增過程或條件不同的是()A.引物 B.DNA聚合酶C.四種脫氧核苷酸 D.預變性的溫度答案：A8.小鼠雜交瘤細胞表達的單克隆抗體用于人體試驗時易引起過敏反響,為了克服這個缺陷,可選擇性擴增抗體的可變區基因(目的基因)后再重組表達。以下相關表達正確的選項是()A.設計擴增目的基因的引物時不必考慮表達載體的序列B.用PCR方法擴增目的基因時必須知道基因的全部序列C.PCR體系中一定要添加從受體細胞中提取的DNA聚合酶D.一定要根據目的基因編碼產物的特性選擇適宜的受體細胞答案：D9.在PCR擴增的實驗中,參加一種提取物(一種模板DNA片段),但實驗得到的產物卻有兩種DNA。其原因可能是()A.基因突變 B.TaqDNA聚合酶發生變異C.基因污染 D.溫度過高答案：C能力提升10.PCR技術(多聚酶鏈式反響)是一項在生物體外復制特定的DNA片段的核酸合成技術,如圖表示合成過程。以下說法錯誤的選項是()A.A過程高溫使DNA變性解旋,該過程不需要解旋酶的作用B.C過程要用到的酶在高溫下失活,因此在PCR擴增時需要再添加C.如果把模板DNA的兩條鏈用15N標記,游離的脫氧核苷酸不標記,控制“94℃~55℃~72℃D.PCR中由堿基錯配引起的變異屬于基因突變答案：B11.一個有15N標記的DNA分子,放在沒有15N標記的環境中培養,利用PCR循環5次后15N標記的DNA分子占總數的()A.1/10 B.1/5C.1/16 D.1/25答案：C12.在PCR擴增DNA的實驗中,預計一個DNA分子經過30次循環后,應該得到230個DNA分子,但是結果只有約210個DNA分子,那么出現該現象的原因不可能是()A.TaqDNA聚合酶的活力不夠,或活性受到抑制B.系統設計欠妥C.循環次數不夠D.引物不能與親鏈結合答案：D13.近10年來,PCR技術(多聚酶鏈式反響)成為分子生物學實驗室的一種常規手段,其原理是利用DNA半保存復制,在試管中進行DNA的人工復制(如以下圖所示)。 (導學號52260064)(1)加熱使DNA雙鏈翻開,這一步是翻開鍵,稱為,在細胞中是在酶的作用下進行的。

(2)當溫度降低時,引物與模板末端結合,在DNA聚合酶的作用下,引物沿模板延伸,最終合成兩條DNA分子,此過程中原料是,遵循。

(3)PCR技術的必需條件,除了模板、原料、酶以外,至少還有三個條件,即:液體環境、適宜的和。

(4)通過PCR技術使DNA分子大量復制,假設將一個用15N標記的DNA分子放入試管中,以含有14N的脫氧核苷酸為原料,連續復制4次之后,那么15N標記的DNA分子占全部DNA總數的比例為。

(5)現有一段DNA序列:5'CAAGGATCC3'

3' G T T C C T A G G 5'。如果它的引物1為5'GGA—OH,那么引物2為。

解析：DNA兩條鏈之間的堿基通過氫鍵形成堿基對,從而將兩條鏈連接起來。因而,要想翻開DNA雙鏈,必須翻開氫鍵,這一過程在細胞內是在解旋酶作用下完成的,在細胞外(PCR)那么是通過高溫實現的。合成DNA時,所用的原料是4種游離的脫氧核苷酸,復制過程遵循堿基互補配對原那么。PCR技術的條件除了模板、原料、酶以外,還要有適宜的溫度和酸堿度以及液體環境;用含15N標記的DNA分子作為模板,以含有14N的脫氧核苷酸為原料,連續復制4次,共得到DNA分子數為24=16個,其中含有15N標記的有兩個,占全部DNA分子總數的1/8。答案：(1)氫解旋解旋(2)4種脫氧核苷酸堿基互補配對原那么(3)TaqDNA聚合溫度pH(4)1/8(5)5'CAA—OH14.多聚酶鏈式反響(PCR)是一種體外迅速擴增DNA片段的技術。請答復以下有關PCR技術的根本原理及應用問題。 (導學號52260065)(1)DNA的兩條鏈是反向平行的,通常將的末端稱為5'端,當引物與DNA母鏈通過堿基互補配對結合后,DNA聚合酶就能從引物的開始延伸DNA鏈。

(2)PCR利用DNA的熱變性原理解決了翻開DNA雙鏈的問題,但又導致了DNA聚合酶失活的新問題。到20世紀80年代,科學家從一種Taq細菌中別離到,它的發現和應用解決了上述問題。要將Taq細菌從其他普通的微生物中別離出來,所用的培養基叫。

(3)PCR的每次循環可以分為三步。假設在PCR反響中,只有一個DNA片段作為模板,請計算在5次循環后,反響物中大約有個這樣的DNA片段。

(4)請用簡圖表示出一個DNA片段PCR反響中第二輪的產物。(5)簡述PCR技術的主要應用。解析：(1)DNA聚合酶只能把新的核苷酸加到已經存在的核酸的3'-羥基上,與DNA母鏈結合的RNA引物就提供這個羥基。(2)因PCR利用了DNA的熱變性原理解決了翻開DNA雙鏈的問題,所以用于催化DNA復制過程的DNA聚合酶要具有耐高溫的特性。用選擇培養基可將Taq細菌從其他普通的微生物中別離出來。(3)DNA復制兩條鏈均作為模板,進行半保存復制,所以復制5次后得到的子代DNA分子數為25=32個。(4)新合成的DNA鏈帶有引物,而含最初的模板鏈的