目的要求1．掌握感染性疾病常用的實驗室檢測項目及其臨床意義和評價2．熟悉引起血流、中樞神經系統、呼吸系統、胃腸道、泌尿系統感染的常見病原體與常見疾病及病原學檢查3．了解當今感染病的特點、感染類型第一頁，共八十一頁。

第一節概述感染性疾?。翰≡w宿主疾病病原體（細菌、真菌、病毒、寄生蟲）第二頁，共八十一頁。一、當今感染病的特點1感染性病原體的種類不斷發生變遷2宿主的免疫防御能力下降3內源性感染與條件致病菌的感染增加第三頁，共八十一頁。二、感染類型（一）按病原體分類

1.傳統病原體感染細菌：病毒：真菌：寄生蟲2.新發病原體：

SARS冠狀病毒新甲型H1N1流感病毒高致病性禽流感病毒第四頁，共八十一頁。(二）按疾病特征分類1.病原體被清除2.隱性感染(covertinfection)，亦稱亞臨床感染一般占人群的90％或以上3.顯性感染(overtinfection)又稱為臨床感染發病快慢和病程長短：急性感染和慢性感染感染部位及性質：局部感染和全身感染全身感染：①菌血癥②敗血癥③毒血癥④膿毒血癥第五頁，共八十一頁。(三）按病原體來源外源性感染內源性感染第六頁，共八十一頁。三、感染性疾病的實驗診斷（一）一般實驗檢測

WBC常規檢查

C-反應蛋白（CRP）血清降鈣素原（PCT）器官功能改變的檢測第七頁，共八十一頁。（二）病原學實驗診斷

臨床病原體檢查目的

明確感染病原體指導治療，預防，判斷預后第八頁，共八十一頁。第二節感染性疾病的常用病原學檢測病原學檢測基本程序①正確、規范采集和運送標本②顯微鏡對標本或組織中的病原體的形態學檢查③病原體的分離培養和鑒定④用免疫學技術對病原體抗原或相應抗體的檢測⑤用分子生物學方法對病原體特異性基因的檢測第九頁，共八十一頁。一、臨床標本的采集與處理

（一）標本采集的一般原則

1.早期病程早期、急性期或癥狀典型時使用抗生素前

2.無菌采集應無污染，嚴格進行無菌操作采集的標本均應盛于無菌容器內

3.根據目的菌的特性用不同的方法采集

4.適量標本,不同病程采集不同部位標本

5.安全采集做好標記第十頁，共八十一頁。（二）標本的處理

原則：保持病原體活力，保持標本不被污染，也不污染環境1.盡快送檢對環境敏感的細菌應保溫立即送檢,其他所有采集后最好在2小時內送檢,不能及時送檢,應注意保存2.必須注意安全防護,切勿污染環境3.厭氧性標本應放在專門的運送瓶或試管內運送，有時可直接用抽取標本的注射器運送第十一頁，共八十一頁。

二、檢驗方法查病原體：形態與結構檢查分離培養和鑒定檢測病原體成分（抗原和核酸）檢測患者血清中特異性抗體代謝產物（生化試驗）毒素：外毒素、內毒素第十二頁，共八十一頁。（一）直接顯微鏡檢查（形態與結構檢查）

1.染色標本檢查法

染色標本：了解病原體的形態、染色性或觀察宿主細胞內包涵體臨床意義：

1.鏡檢可以了解有無病原體及大致的量

2.根據細菌形態、結構和染色性有助于對病原體的初步識別和分類

3.通過形態學檢查可得到初步診斷，對臨床早期診斷和治療疾病有一定的參考意義如CSF找到抗酸桿菌，應初步考慮結核分枝桿菌感染第十三頁，共八十一頁。

革蘭陽性

革蘭陰性

抗酸染色第十四頁，共八十一頁。

培養在McCoy細胞的沙眼衣原體吉姆薩染色的McCoy細胞，含大衣原體包涵體，使部分細胞核不清楚。（吉姆薩染色,放大1000倍）

狂犬病毒可于細胞漿中可形成嗜酸性包涵體第十五頁，共八十一頁。新生隱球菌假絲酵母菌（白色念珠菌）革蘭染色

墨汁負染

第十六頁，共八十一頁。2.不染色標本

1)檢查生活狀態下細菌的動力及運動狀況2）螺旋體由于不易著色并有形態特征

對某些病原菌作出初步鑒定，如霍亂弧菌

常用方法壓片法(壓滴法)或懸滴法暗視野顯微鏡或相差顯微鏡檢查第十七頁，共八十一頁。體癬皮屑可見關節孢子第十八頁，共八十一頁。HAVparticlesfoundinfecalextractsbyimmunoelectronmicroscopy

HAV形態電鏡圖

糞便標本負染X2000003.直接電鏡檢測EM

免疫電鏡技術IEM第十九頁，共八十一頁。（二）分離培養和鑒定

分離培養是微生物學診斷的金標準，是最可靠的傳統診斷技術臨床意義：1.明確感染病原體2.為臨床提供體外抗微生物藥物敏感試驗結果第二十頁，共八十一頁。藥物敏感試驗標本培養特征形態特征生化試驗血清學試驗毒力試驗普通瓊脂平板？血平板？選擇培養基？1.細菌的分離培養和鑒定第二十一頁，共八十一頁。培養特征第二十二頁，共八十一頁。細菌學診斷形態特征血清學鑒定第二十三頁，共八十一頁。大腸埃希菌對照-吲哚試驗枸椽酸鹽利用試驗大腸埃希菌甲基紅試驗VP試驗大腸埃希菌大腸埃希菌對照-對照+對照+生化試驗第二十四頁，共八十一頁。一）病毒分離培養

1．動物接種（二）病毒的分離與鑒定2．雞胚培養卵黃囊接種、絨毛尿囊膜接種尿囊接種及羊膜腔接種敏感動物合適部位第二十五頁，共八十一頁。3．組織細胞培養：

目前培養病毒應用最廣的方法

（1）原代和次代細胞培養

（2）二倍體細胞培養

（3）傳代細胞培養

第二十六頁，共八十一頁。

識別病毒在培養細胞中增殖

病毒在培養細胞中增殖的指標

1）細胞病變:細胞病變效應（CPE）、包涵體

2）紅細胞吸附（hemadsorption）

細胞病變效應（CPE）：

病毒感染細胞后引起的細胞病變，可出現細胞圓縮、裂解或細胞腫大、數個細胞融合成多核巨細胞等。二）病毒鑒定第二十七頁，共八十一頁。Cytopathiceffect(CPE)ofprimarysevereacuterespiratorysyndrome–associatedcoronavirusstrain48h

72h

36h

N

第二十八頁，共八十一頁。第二十九頁，共八十一頁。病毒學診斷

常用鑒定試驗：

中和實驗血凝抑制實驗第三十頁，共八十一頁。virus第三十一頁，共八十一頁。

紅細胞凝集抑制（HI）試驗原理：病毒病毒（特異性抗體）

++

紅細胞紅細胞凝集不凝集血凝現象血凝抑制現象第三十二頁，共八十一頁。ConfocalimageshowingamacrophageinthelungofamouseinfectedwithSARS-coronavirus.DoubleimmunofluorescencelabelsthemacrophageinredwithantibodiesagainstMac-2andviralproteiningreenwithantibodiesagainstspike.第三十三頁，共八十一頁。

（三）真菌的分離培養

－常用培養基沙保（Sabourud）培養基真菌的菌落有兩種：酵母型菌落和絲狀菌落酵母型菌落絲狀菌落第三十四頁，共八十一頁。新生隱球菌假絲酵母菌（白色念珠菌）第三十五頁，共八十一頁。（三）鑒定1.糖(醇)類發酵試驗37℃孵育，觀察糖發酵情況。2.同化碳源試驗含菌生理鹽水與已融化的固體同化碳源培養基(45℃)混合，然后在培養基上分別加糖，置25℃孵育觀察結果。若24h后無變化可重復加糖。如能同化周圍有生長圈，否則無生長。

3.同化氮源試驗同化碳源試驗相同，但需用無氮源的培養基，不要加糖類，而加入硝酸鉀。第三十六頁，共八十一頁。

檢測程序第三十七頁，共八十一頁。（三）病原體抗原與抗體的檢測病原體抗原成分的檢測：早期診斷現癥感染特異性IgM：早期診斷現癥感染特異性IgG：雙份血清的滴度呈4倍或4倍以上升高，考慮病原體現癥感染*排除交叉反應的影響第三十八頁，共八十一頁。夾心ELISA(檢測抗原）第三十九頁，共八十一頁。間接ELISA(檢測抗體）第四十頁，共八十一頁。（四）病原體核酸檢測

1．核酸雜交技術通過已知序列的探針與病原體的核苷酸雜交，用以了解病原體的有無。

Southern印跡雜交（Southernblot）

Northern印跡雜交（Northernblot）斑點雜交（dotblot）原位雜交（insituhybridization,ISH）

2．PCR擴增病原體微生物特異的DNA或RNA片段

常用于檢測不能在體外培養或目前的培養技術不敏感、費用高昂或耗時長的病原體第四十一頁，共八十一頁。核酸分子雜交(nucleicacidmoleculahybridization)genomeprobe32P35S3H125I生物素地高辛酶genomegenomegenomeprobeprobeprobe檢測方法：放射自顯影底物顯色化學發光第四十二頁，共八十一頁。2．PCR

第四十三頁，共八十一頁。3.生物芯片技術

第四十四頁，共八十一頁。

核酸檢測結果評價檢測病原體微生物最靈敏的方法早期診斷現癥感染假陽性與假陰性第四十五頁，共八十一頁。

（五）細菌毒素的檢測

1.內毒素的測定

常用方法：鱟試驗（limulustests）

內毒素與鱟試劑接觸時，可激活凝固酶原，使可溶

性的凝固蛋白原變成凝膠狀態的凝固蛋白

內毒素(鱟試劑)

凝固酶原凝固酶凝固蛋白原凝固蛋白(凝膠)第四十六頁，共八十一頁。2.外毒素的測定（1）體內毒力試驗

細菌外毒素對機體的毒性作用，可被相應抗毒素中和，若先給動物注射抗毒素，然后再注射外毒素，則動物不產生中毒癥狀。第四十七頁，共八十一頁。

（2）體外毒力試驗

以細菌外毒素的特異性免疫血清為抗體與被檢細菌外毒素(抗原)進行抗原抗體反應，來檢測外毒素，從而鑒定細菌是否產生該種毒素。白喉棒狀桿菌的Elek平板毒力測定（３)免疫學方法：如ELISA法

葡萄球菌腸毒素、腸產毒型大腸埃希菌LT及ST等的測定

（4）分子技術第四十八頁，共八十一頁。Elek平板試驗ElekTest沉淀線(陽性)含白喉抗毒素濾紙片白喉桿菌菌苔標準產毒株第四十九頁，共八十一頁。(六）體外抗菌藥物敏感試驗常用方法紙片擴散法（Kirby-Bauertest）稀釋法（dilutiontest）E試驗法（Etest）殺菌試驗體外聯合藥物敏感試驗

第五十頁，共八十一頁。

第三節常見感染性疾病的實驗診斷第五十一頁，共八十一頁。

一、血流感染（一）引起血流感染常見微生物與常見疾病常見微生物革蘭陽性球菌：葡萄球菌、鏈球菌、腸球菌革蘭陰性桿菌：大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、肺炎克雷伯菌、沙門菌真菌：病毒：HBV、HCV血流感染常見疾病細菌：菌血癥、敗血癥、膿毒血癥真菌：真菌血癥病毒：病毒血癥第五十二頁，共八十一頁。(二)血流感染的病原學檢查1.血液標本采集與運送采血時間：寒戰或體溫高峰到來之前0.5~1hr24小時內采集2~3次采血量：成人5~10ml，嬰兒和兒童為1~2ml運送：血液置于含抗凝集聚茴香腦磺酸鈉無菌瓶中送檢第五十三頁，共八十一頁。血液標本的采集方法第五十四頁，共八十一頁。2、細菌學檢驗（1）檢驗程序bloodaerobiccultureanaerobiccultureBacteriagrowthBacteriagrowthProcedureforbacterialdetectioninbloodDirectmicroscopicexaminationCulture(BA)colonycharacteristicsstainofsmearandmicroscopicexaminationBiochemicaltestSerologicalindentificationantibioticsusceptibilitytestDirectmicroscopicexaminationCulture(BA)anaerobicculturereportFirstreportEndotoxindetection第五十五頁，共八十一頁。（2）臨床意義陽性—確診血流感染陰性：培養7天，未見細菌生長注意區分致病菌和污染菌第五十六頁，共八十一頁。2、真菌學檢驗（1）檢驗程序bloodaerobiccultureBacteriagrowthProcedureforfungaldetectioninbloodDirectmicroscopicexaminationCulture(SabouraudagarorCHROMagar)colonycharacteristicsstainofsmearandmicroscopicexaminationBiochemicaltestSerologicalindentificationantibioticsusceptibilitytestPNA-FISHPCRreportFirstreportSerologicaldetection第五十七頁，共八十一頁。（2）臨床意義初報：增菌培養——真菌孢子終報：分離培養鑒定——菌株協助診斷：β-D-1,3葡聚糖（BDG）半乳甘露聚糖（GM）第五十八頁，共八十一頁。二、中樞神經系統感染（一）引起中樞神經系統感染常見微生物與常見疾病常見微生物腦膜炎奈瑟菌、結核分枝桿菌、金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、大腸埃希菌新生隱球菌、假絲酵母菌乙型腦炎病毒，單純皰疹病毒中樞神經系統感染常見疾病腦膜炎、腦炎、腦膿腫第五十九頁，共八十一頁。（二）中樞神經系統感染的病原學檢查

1.標本的采集與運送腦脊液臨床醫生采用腰椎穿刺，抽取2-3ml，置于無菌容器中腦脊液應立即保溫送檢或床邊接種，不能暫時保存于冰箱中第六十頁，共八十一頁。2.細菌學、真菌學檢驗（1）檢驗程序CSFBacteriacultureProcedureforbacterialandfungaldetectioninCSFGramstainSabouraudagarcolonycharacteristicsstainofsmearandmicroscopicexaminationBiochemicaltestantibioticsusceptibilitytestreportFirstreportMakesmears(centrifuge)Acid-faststainInkstainfungalcultureBA,CA,MAC,L-J第六十一頁，共八十一頁。（2）臨床意義正常腦脊液：無菌直接涂片檢查：初報

G染色、抗酸染色、墨汁負染色分離培養鑒定：（+）確診第六十二頁，共八十一頁。協助診斷3、病毒學檢查：

抗原抗體核酸第六十三頁，共八十一頁。三、呼吸系統感染（一）引起呼吸系統感染常見微生物與常見疾病

上呼吸道感染：病毒性感染（主）:鼻病毒、冠狀病毒、腺病毒、流感和副流感病毒、呼吸道合胞病毒、埃可病毒、柯薩奇病毒細菌性感染（20％）：白喉棒狀桿菌、百日咳鮑特菌乙型溶血性鏈球菌、流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌、葡萄球菌肺部感染：肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌、結核分枝桿菌、假絲酵母菌、肺炎衣原體、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒第六十四頁，共八十一頁。（二）呼吸系統感染的病原學檢查

1.標本的采集與運送呼吸道標本類型：鼻咽拭子、痰和經氣管采集的標本上呼吸道存在正常菌群，在采集標本與結果分析時應予考慮第六十五頁，共八十一頁。2.細菌學、真菌學檢驗（1）檢驗程序Sputum,bronchallavage,transtrachealaspirateSpecimenprocessingProcedureforbacterialandfungaldetectioninsputum,bronchallavage,transtrachealaspiratecolonycharacteristicsstainofsmearandmicroscopicexaminationBiochemicaltestSerologicalindentificationantibioticsusceptibilitytestreportFirstreportEyeobservationBA,CA,MAC,L-J,Sabouraudagarstainofsmearandmicroscopicexamination第六十六頁，共八十一頁。（2）臨床意義肉眼觀察痰性狀：鐵銹色痰-肺炎鏈球菌直接涂片鏡檢：抗酸桿菌-結核分離培養鑒定：確診第六十七頁，共八十一頁。3、病毒學檢驗：分離培養免疫學檢測分子技術第六十八頁，共八十一頁。

四、胃腸道感染

（一）引起胃腸道感染常見微生物與常見疾病

胃腸炎、腸炎、結腸炎：

霍亂、傷寒、菌痢

侵襲性：沙門菌、志賀菌、彎曲菌、致病大腸埃希菌、

耶爾森菌、副溶血弧菌

毒素性：霍亂弧菌、致病大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、

產氣莢膜梭菌、艱難芽胞梭菌

病毒：輪狀病毒

真菌：白色假絲酵母菌、曲霉菌第六十九頁，共八十一頁。二）胃腸道感染的病原學檢查

1.標本的采集與運送糞便標本自然排便，挑取膿、血或粘液部分于清潔容器中送檢；液體糞便則取絮狀物，一般取1～3ml排便困難者，采用直腸拭子采集傳染性腹瀉應連續送檢3次第七十頁，共八十一頁。2、細菌學檢驗（1）檢驗程序Stool,rectalswab,foodandwateranaerobicculturemicroaerobiccultureEnrichmentbroths,SFbroth,GNbrothProcedureforbacterialdetectioninstool,rectalswab,foodandwaterWetmountsDirectmicroscopicexaminationcolonycharacteristicsstainofsmearandmicroscopicexaminationBiochemicaltestSerologicalindentificationantibioticsusceptibilitytestreportFirstreportIsolationcultureSelectivemedium(MAC,SS,TCBS)第七十一頁，共八十一頁。（2）臨床意義直接涂片：一般不做除外：疑為霍亂弧菌、彎曲菌感染以及腸結核、偽膜性腸炎胃粘膜活檢標本：幽門螺桿菌分離培養鑒定：直接涂片革蘭染色菌群調查：抗生素相關腹瀉細菌毒素檢測病毒學檢查：第七十二頁，共八十一頁。五、泌尿系統感染（一）引起泌尿系統感染常見微生物與常見疾病上尿路感染（輸尿管炎、腎盂腎炎）下尿路感染（膀胱炎、尿道炎）大腸埃希菌、變形桿菌、腸球菌、凝固酶陰性葡萄球菌、銅綠假單胞菌、結核分枝桿菌、假絲酵母菌第七十三頁，共八十一頁。二）泌尿系統感染的病原學檢查

1.標本的采集與運送應注意無菌操作取清潔中段尿，排尿困難者可導尿厭氧培養采用膀胱穿刺法、無菌厭氧小瓶運送第七十四頁，共八十一頁。2、細菌、真菌學檢驗（1）檢驗程序Clean-catchmidstreamurinestainofsmearandmicroscopicexaminationIsolationbacterialcultureEIAFIAIsolationfungalcultureProcedureforbacterialdetectioni