實驗一顯微鏡的使用

一、目的要求:學習與掌握油鏡的使用技術二、原理及說明微生物是個體微小、結構簡單、肉眼無法看到的微小生命體。因此，我們要借助顯微鏡來進行觀察。顯微鏡的種類很多，但基本構造可分為兩大部分：一是機械裝置，而是光學系統。（下面以普通光學顯微鏡為例）。1、機械裝置由鏡座、鏡臂、鏡筒與物鏡轉移器、載物臺、移動器粗細調節器組成。2光學系統由目鏡、物鏡、聚光鏡、反光鏡、光圈組成。（1）目鏡：裝在鏡筒的上端，一般各有8x、10x、15x、16x等種不同的放大倍數的目鏡。目鏡只能把物鏡成的像再次放大，沒有辨析能力。（2）物鏡：顯微鏡的物鏡是由一組特殊的透鏡組成。一般有低倍鏡（10x）、高倍鏡（40x）和油鏡（100x），它們各有一定的放大率，不僅可以放大標本，而且有辨析能力。低倍鏡：它的視野的實際范圍最大，易于發現目標，但不易看清微生物個體的形態。高倍鏡：搞倍鏡視野的實際范圍較低倍鏡小些。可以看清個體較大的微生物個體或菌絲體形態，但個體較小的微生物以及其內含物和特殊結構也無法辨清。油鏡：一般在鏡頭上有黑圈或紅圈表示的為油鏡物鏡，也有的以“OI”或“HI”字樣表示，油鏡的鏡面很小，工作距離很近。使用時，在載玻片和油鏡物鏡之間加上一低油（常用香柏油）（而使用低倍、高倍鏡時，是隔以空氣）。當光線通過載波片時，由于玻璃與香柏油的折射率相近，可直接通過香柏油進入物鏡而不發生折射，這樣就可以增加照明度，是鏡檢物清晰（參見表1）。R=0.5波長/N.AN.A=n.sina/2三、材料儀器1、顯微鏡、香柏油、二甲苯、擦鏡紙2、枯草桿菌（Bacillussubtillis）菌株3、載波片、無菌水四、操作步驟：1、置顯微鏡于平穩的實驗臺上，鏡座距實驗臺過沿約為一寸左右，鏡檢者姿勢要端正。一般用左眼觀察，右眼便與繪圖或記錄，兩眼必須同時睜開，以減少疲勞。2、調光：一般采用散射光，如果光線弱時可用日光燈。（1）低倍鏡旋到鏡筒下方，旋轉粗調節器。是鏡頭與載物臺相距0.5cm。（2）打開聚光器，使之與載物臺同樣高度。（3）左眼看目鏡，觀察光源強弱，使全視野內均勻明亮。凡檢查染色體標本時，光線就強，檢查為染色標本時，光線不以太強。可通過擴大或縮小光圈、升降聚光器，旋轉反光鏡調節光線。3、低倍鏡觀察待見標本必須先用低倍鏡觀察，因為低倍鏡視野較大，已發現目標和確定檢查位置將待檢標本置鏡臺上，用標本夾夾住，移動推動器，使觀察標本處于接物鏡正下方。眼由左側水平測視顯微鏡平臺，轉動粗落選，使接物鏡下降之距標本約0.5cm處由接目鏡觀察。然后慢慢地提升鏡筒，直到視野內出現物像后，改用細調節器，小心將此玻片進入顯微鏡平臺。3）小心下降鏡筒：以粗調下降鏡頭，此時從側面注視油鏡慢慢浸在香柏油中，幾乎與標本相碰，特別注意：不能將油鏡頭壓在標本上，更不能用力過猛，否則不僅壓碎玻片，也會損壞鏡頭。4）從目鏡觀察，進一步調節光線，使視野達到最高程度（全開虹彩光圈）。5）用粗調節器將鏡筒徐徐上升（此時不準下降鏡筒）。直到視野出現模糊物像為止，然后再用細調節器校正焦距。如果油鏡頭已離開澤面而仍未見物像，用粗調節器將油鏡升高距平臺約2cm后，必須在從側面觀察，將油鏡下降重復，上述操作到物像看清為止。6）用同樣的方法觀察各個待檢染色體標本。并繪出形態圖。7)觀察完畢，上旋鏡筒，取出標本片之后，先用擦鏡紙擦去鏡頭上的油，然后沾取少許二甲苯。擦去鏡頭上殘留油跡，最后再用擦鏡紙擦去殘留的二甲苯。勿用手或其他紙擦鏡頭，以免損壞鏡頭。用綢布擦鏡顯微鏡的機械部分8）將各部分還原，反光鏡垂直于鏡座、將物鏡轉成八字形在向下旋，同時把聚光鏡降下，才可以鏡入鏡箱內。注意事項：1)取顯微鏡時，必須一手拿鏡臂，另一手托住鏡座，并保持鏡身上下垂至切不可一只手提起，以免墜落和甩出反光鏡及目鏡。2）使用油鏡之前須如上述順序，先用低倍鏡找到被檢物，然后轉換成高被鏡，將被檢物觀察的部位移至視野中心，然后轉換油鏡觀察3)由于油鏡工作距離很短，因此用粗條路螺旋下降鏡筒時，一定要從側面注視油鏡頭移動情況，在進行觀察時，只能在油鏡頭提升過程找物像，而絕不能用粗調螺旋或細調螺旋將鏡頭下降，以防鏡頭與標本相碰撞。簡單染色：一、目的要求：1、掌握細菌的普通染色法和革蘭氏染色法。2、了解芽孢染色法，細菌莢膜染色法。二、原理及說明細菌除了體積小，而且是無色透明或半透明的。要觀察它們形態以及特殊結構，除了借助于顯微鏡以外，常常還需借助染色法，染色法是使細胞著色，與背景形成鮮明的對比，這樣易于在顯微鏡下進行觀察。染色可分為簡單染色和特殊染色前者只用一種染料，適于菌體一般形態的觀察；后者采用兩種以上的染料，用于研究細胞的構造。三、材料、儀器：1、菌種：枯草桿菌2、染色液：石炭酸復紅染色液四、方法與步驟：涂片干燥固定染色洗滌干燥鏡檢涂片：洗滌干燥:注意事項：（1）涂片不宜過厚，否則難以干燥。（2）涂片時滴加無菌水不宜多，否則難以干燥。（3）固定時，通過火焰速度宜適度，過快達不到固定目的，過慢易使菌體變形，絕不能在火焰上烤，招致原形毀壞。（4）標本必須干燥，才能置于油鏡下觀察。p$mYiVeRbN7K4G0D>z`v-s&o!kXhTdQaM6J2F:B<y=u)q%nZjWfScP8L5H1E.A~w+t*p$lYiVeRbN7K3G0C>z@v-r&o!kXhTdQ9M6I2F;B<x=u)q%nZjWfScO8L4H1D.A`w+t*p$lYiUeRaN7J3G:C>z@v-r&o#kXgTdP9M5I2F;B<x=u(q%mZjVfSbO8L4H1D.A`w+s*p!lYhUeQaN7J3G:C>y@v)r&n#kWgTdP9M5I2E;B~x=t(q$mZjVfSbO8K4H0D.z`w-s*p!lYhUeQaN6J3F:C<y@u)r&n#kWgTcP9L5I1E;A~x=t(q$mZiVfRbO7K4G0D.z`w-s*o!lXhUdQaM6J3F:C<y@u)r%n#jWgScP8L5I1E;A~x+t(p$mYiVeRbO7K4G0D>z`v-s&o!kXhUdQaM6J2F:B<y=u)q%n#jWgScP8L5H1E.A~w+t(p$mYiVeRbN7K3G0C>z@v-s&o!kXhTdQ9M6I2F;B<y=u)q%nZjWfScO8L4H1E.A~w+t*p$lYiUeRaN7K3G0C>z@v-r&o#kXgTdP9M6I2F;B<x=u(q%mZjVfScO8L4H1D.A`w+s*p!lYiUeRaN7J3G:C>y@v)r&o#kXgTdP9M5I2E;B~x=t(q%mZjVfSbO8K4H0D.z`w+s*p!lYhUeQaN6J3F:C>y@v)r&n#kWgTcP9L5I2E;B~x=t(q$mZiVfRbO7K4H0D.z`w-s*o!lXhUdQaN6J3F:C<y@u)r%n#jWgTcP9L5I1E;A~x+t(p$mZiVfRbO7K4G0D>z`v-s&o!lXhUdQaM6J2F:B<y=u)r%n#jWgScP8L5H1E.A~x+t(p$mYiVeRbN7K3G0D>z`v-s&o!kXhTdQ9M6I2F:B<y=u)q%nZjWfScO8L5H1E.A~w+t*p$lYiUeRbN7K3G0C>z@v-r&o#kXhTdQ9M6I2F;B<x=u(q%mZjWfScO8L4H1D.A`w+s*p$lYiUeRaN7J3G:C>y@v-r&o#kXgTdP9M5I2E;B<x=u(q%mZjVfSbO8K4H0D.A`w+s*p!lYhUeQaN6J3G:C>y@v)r&n#kWgTcP9M5I2E;B~x=t(q$mZiVfSJ3G:C>y@v-r&o#kXgTdP9M5I2E;B<x=u(q%mZjVfSbO8K4H1D.A`w+s*p!lYhUeQaN6J3G:C>y@v)r&n#kWgTcP9M5I2E;B~x=t(q$mZiVfSbO8K4H0D.z`w-s*o!lYhUeQaN6J3F:C<y@u)r%n#kWgTcP9L5I1E;A~x+t(q$mZiVfRbO7K4G0D>z`w-s*o!lXhUdQaM6J2F:C<y@u)r%n#jWgScP8L5H1E;A~x+t(p$mYiVeRbN7K4G0D>z`v-s&o!kXhTdQaM6J2F:B<y=u)q%nZjWgScP8L5H1E.A~w+t*p$lYiVeRbN7K3G0C>z@v-r&o!kXhTdQ9M6I2F;B<x=u)q%nZjWfScO8L4H1D.A~w+t*p$lYiUeRaN7J3G:C>z@v-r&o#kXgTdP9M5I2F;B<x=u(q%mZjVfSbO8L4H1D.A`w+s*p!lYhUeRaN7J3G:C>y@v)r&n#kWgTdP9M5I2E;B~x=t(q$mZjVfSbO8K4H0D.z`w-s*p!lYhUeQaN6J3F:C<y@v)r&n#kWgTcP9L5I1E;A~x=t(q$mZiVfRbO7K4G0D.z`w-s*o!lXhUdQaM6J3F:C<y@u)r%n#jWgScP9L5I1E;A~x+t(p$mYiVeRbO7K4G0D>z`v-s&o!kXhUdQaM6J2F:B<y=u)q%n#jWgScP8L5H1E.A~w+t(p$mYiVeRbN7K3G0C>z@v-s&o!kXhTdQ9M6I2F;B<y=u)q%nZjWfScO8L4H1E.A~w+t*p$lYiUeRaN7K3G0C>z@v-r&o#kXgTdP9M6I2F;B<x=u(q%mZjVfScO8L4H1D.A`w+s*p!lYiUeRaN7J3G:C>y@v)r&o#kXgTdP9M5I2E;B~x=t(q%mZjVfSbO8K4H0D.z`w+s*p!lYhUeQaN6J3F:C>y@v)r&n#kWgTcP9L5I2E;B~x=t(q$mZiVfRbO7K4H0D.z`w-s*o!lXhUdQaN6J3F:C<y@u)r%n#jWgTcP9L5I1E;A~x+t(p$mZiVfRbO7K4G0D>z`v-s&o!lXhUdQaM6J2F:B<y=u)r%n#jWbO8K4H0D.z`w-s*o!lXhUeQaN6J3F:C<y@u)r%n#jWgTcP9L5I1E;A~x+t(p$mZiVfRbO7K4G0D>z`v-s*o!lXhUdQaM6J2F:B<y@u)r%n#jWgScP8L5H1E.A~x+t(p$mYiVeRbN7K3G0D>z`v-s&o!kXhTdQ9M6J2F:B<y=u)q%nZjWfScP8L5H1E.A~w+t*p$lYiUeRbN7K3G0C>z@v-r&o#kXhTdQ9M6I2F;B<x=u(q%nZjWfScO8L4H1D.A`w+t*p$lYiUeRaN7J3G:C>y@v-r&o#kXgTdP9M5I2E;B<x=u(q%mZjVfSbO8K4H1D.A`w+s*p!lYhUeQaN7J3G:C>y@v)r&n#kWgTcP9M5I2E;B~x=t(q$mZiVfSbO8K4H0D.z`w-s*o!lYhUeQaN6J3F:C<y@u)r&n#kWgTcP9L5I1E;A~x+t(q$mZiVfRbO7K4G0D>z`w-s*o!lXhUdQaM6J2F:C<y@u)r%n#jWgScP8L5I1E;A~x+t(p$mYiVeRbN7K4G0D>z`v-s&o!kXhTdQaM6J2F:B<y=u)q%nZjWgScP8L5H1E.A~w+t*p$mYiVeRbN7K3G0C>z@v-r&o!kXhTdQ9M6I2F;B<x=u)q%nZjWfScO8L4H1D.A~w+t*p$lYiUeRaN7J3G0C>z@v-r&o#kXgTdP9M5I2F;B<x=u(q%mZjVfSbO8L4H1D.A`w+s*p!lYhUeRaN7J3G:C>y@v)r&n#kXgTdP9M5I2E;B~x=t(q$mZjVfSbO8K4H0D.z`w-s*p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