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文檔簡介
P/ACEMDQ型毛細管電泳
在相關領域的應用
一、簡介毛細管電泳(capillaryelectrophoresis,CE)又稱高效毛細管電泳(HPCE)。是以毛細管為分離通道,以高壓電場為驅動力的新型液相分離分析技術,在八十年代得以迅速發展。目前,在生命科學、藥物分析、以及從小分子、離子到單細胞分析的一系列領域得到了廣泛的應用。毛細管電泳的發展過程六十年代中期:瑞典科學家Hjerten首先提出了毛細管區帶電泳(CZE)的方法,被看作毛細管電泳的起點。1979年:Mikkers等用200μmID的聚四氟乙烯管為分離通道,獲得了很高的分離效率。1981年:Jorgenson和Lukacs用75μmID的熔融毛細管做CZE,在30KV電壓下產生了4×105片/m的效率,成為毛細管電泳發展史上的里程碑。1984年:Terabe運用含SDS膠束的緩沖液分離了中性分子,從而建立了膠束電動毛細管電泳。1987年,Hjerten建立了毛細管等電聚焦;Cohen和Karger提出了毛細管凝膠電泳。1988~89年:商品化的毛細管電泳儀推出,毛細管電泳法迅速發展起來。
CE分離原理示意圖
在電解質溶液中,帶電粒子在電場作用下以不同的速度定向遷移的現象叫電泳。單位電場下的電泳速度稱為淌度。CE所用的石英毛細管柱,在pH>3的情況下,其內表面帶負電,和溶液接觸時形成雙電層。在高電壓的作用下,雙電層中的水合陽離子引起流體整體向負極方向遷移的現象叫電滲。電滲是毛細管中的溶劑因軸向直流電場的作用而發生的定向流動。各種粒子在毛細管內電解質中的遷移速度等于電泳和電滲流(EOF)兩種速度的矢量和。正離子的運動方向和電滲流一致,故最先流出;中性粒子的電泳的電泳流速為零,故其遷移速度等于電滲流速度;負離子的運動方向和電滲流方向相反,但因電滲流速度一般都大于電泳速度,故它將在中性粒子之后流出。各種粒子因遷移速度不同而實現分離。三、毛細管電泳儀的構造
四:毛細管電泳的分離模式:
毛細管區帶電泳(CZE);毛細管膠束電動色譜(MEKC);毛細管凝膠電泳(CGE);毛細管等電聚焦(CIEF);毛細管等速電泳(CITP);
親和毛細管電泳(ACE);
毛細管電色譜(CEC);非水相毛細管電泳(NACE)。五:分離模式的選擇
CE可以分離離子到中性分子、從小分子到生物大分子的一系列物質。之所以能分離如此廣泛的物質,在于其靈活多樣的分離體系。對不同性質的物質,應選擇相應的分離體系:分離對象與模式的選擇MEKCCECCIEFMEKCCITPCGECGECGECGEMEKCCITPCZECZECZECZECZECZE病毒/細菌多肽/蛋白核酸糖類小分子離子毛細管電泳的高分離效率七、毛細管電泳的應用
蛋白質/多肽/氨基酸糖類/糖蛋白核酸/核苷酸天然產物合成藥物手性物質無機/有機離子病毒/細菌水溶液中的分子間相互作用不同分子量蛋白的分離4種堿性蛋白的分離4種堿性蛋白的電泳分離圖。A:涂層管;B:未涂層管。1:細胞色素,2:溶菌酶,3:胰蛋白酶原,4:α-胰凝乳蛋白酶原DNA、核酸的分離DNA片段電泳遷移時間圖單糖的分離藥材中的生物堿成分分析1苦參堿2槐定堿3槐果堿4lehmannine5sophoramine6氧化苦參堿7氧化槐果堿8金雀花堿9苦豆堿10蝙蝠葛堿11東莨菪堿藥材中黃酮化合物的分析對照品樣品OG:木蝴蝶素A-7-O-葡萄苷酸B:黃芩素WG:漢黃芩素-7-O-葡萄苷酸BG:黃芩苷W:漢黃
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