實驗2特殊顯微鏡及其使用暗視野顯微鏡相差顯微鏡一、實驗目的1.學習暗視野顯微鏡的原理、了解其構造2.練習暗視野顯微鏡的使用二暗視野顯微鏡的原理及構造根據丁達爾效應原理設計的一種在黑色背景條件下觀察被檢物體的顯微鏡觀察到明場看不到的極其微小的物體最高分辨率可達0.004微米暗視野顯微鏡原理2.3成像特點及優缺點在暗視野中所觀察到的是被檢物體的衍射光圖像，并非物體本身，所以只能看到物體的存在和運動，不能辨清物體的細微結構。但被檢物體為非均質時，并大于1／2波長，則各級衍射光線同時進入物鏡，在某種程度上可觀察物體的構造。一般暗視野顯微鏡雖看不清物體的細微結構，但卻可分辨0.004um以上的微粒的存在和運動，這是普通顯微鏡(最大的分辨力為0.2um)所不具有的特性，可用以觀察活細胞的結構和細胞內微粒的運動等。2.4應用：微小粒子、細菌形態、細菌記數，透明標本觀察等。2.5暗場顯微鏡的要求要求載玻片和蓋玻片必須無疵痕和灰塵物鏡前透鏡必須清潔無塵載玻片和蓋玻片厚度必須絕對符合要求自己動手制作暗視野顯微鏡

暗視野光擋(左：金屬片或厚卡紙制成;右：透明濾色鏡貼黑紙制成)三、實驗用品1.材料：口腔黏膜上皮細胞、洋蔥內表皮細胞2.試劑：生理鹽水、蒸餾水3.器材和儀器：載玻片、蓋玻片、顯微鏡、擦鏡紙等四、實驗內容1、口腔黏膜上皮細胞和洋蔥內表皮細胞裝片制作2、用暗視野顯微鏡觀察樣品（二）相差顯微鏡

相差顯微鏡（phasecontrastmicroscope）由荷蘭物理學家澤爾尼克(FritsZernike,1898-1966),于1932年發明，并因此獲1953年諾貝爾物理獎。

一、實驗目的1.學習相差顯微鏡的原理、了解其構造2.練習相差顯微鏡的使用二實驗原理

光波有振幅（亮度）、波長（顏色）及相位(指在某一時間上光的波動所能達到的位置)的不同。當光通過物體時，如波長和振幅發生變化，人們的眼睛才能觀察到，這就是普通顯微鏡下能夠觀察到染色標本的道理。而活細胞和未經染色的生物標本，因細胞各部微細結構的折射率和厚度略有不同，光波通過時，波長和振幅并不發生變化，僅相位有變化(相應發生的差異即相位差)，而這種微小的變化，人眼是無法加以鑒別的，故在普通顯微鏡下難以觀察到。相差顯微鏡的特殊構造與光路相差顯微鏡的特殊構造與光路相差顯微鏡的光路相位板安裝在物鏡的后焦面處，相板裝有吸收光線的吸收膜和推遲相位的相位膜。它除能推遲直射光線或衍射光的相位以外，還有吸收光使亮度發生變化的作用。調軸望遠鏡是用來進行合鈾調節的。相差顯微鏡在使用時，聚光鏡下面環狀光闌的中心與物鏡光軸要完全在一直線上，必需調節光闌的亮環和相板的環狀圈重合（共軛重合），才能發揮相差顯微鏡的效能。否則直射光或衍射光的光路紊亂，應被吸收的光不能吸收，該推遲相位的光波不能推遲，就失去了相差顯微鏡的作用。（3）合鈾調整拔出目鏡，插入合鈾望遠鏡，一邊從望遠鏡向內觀察，并用左手固定其外筒；一邊用右手轉動望遠鏡內筒使其上升，當對準焦點就能看到環狀光闌的亮環和相板的暗環，此時可將望遠鏡固定住。再升降集光器并調節其下的螺旋使亮環的大小與暗環一致，然后左右前后調節環狀光闌聚光器上的調節鈕，使兩環完全重合。（4）觀察換回目鏡，按常規要領進行觀察。在更換不同倍率的相差物鏡時，每一次都要使用相匹配的環狀光闌。用途用于觀察組織培養中活細胞形態結構。活細胞無色透明，一般光鏡下不易分辨細胞輪廓及其結構，組織培養研究常用的是倒置相差顯微鏡。三、實驗用品1.材料：口腔黏膜上皮細胞、洋蔥內表皮細胞2.試劑：生理鹽水、蒸餾