標準解讀

《LY/T 1772-2008 楊樹品種分子鑒定實驗方法 DNA擴增片段長度多態性法(AFLP)》是一項針對楊樹品種進行分子水平上鑒定的標準。該標準詳細規定了利用AFLP技術對不同楊樹品種進行遺傳多樣性分析的具體步驟和要求，以達到準確區分不同楊樹品種的目的。

AFLP（Amplified Fragment Length Polymorphism），即擴增片段長度多態性，是一種基于PCR的DNA指紋技術。它結合了RFLP（限制性片段長度多態性）與RAPD（隨機擴增多態性DNA）的優點，通過使用特定的限制性內切酶切割基因組DNA，并將得到的片段連接到接頭序列上，隨后選擇性地擴增這些片段來揭示個體間的遺傳差異。

根據此標準，整個實驗流程主要包括以下幾個關鍵環節：

  • 樣品準備：包括從新鮮或干燥的葉片中提取高質量的總DNA。
  • 酶切及接頭連接：采用兩種不同的限制性內切酶同時消化樣品DNA，并立即與特制的人工合成接頭相連接。
  • 預擴增：利用帶有一個堿基選擇性的引物對連接產物進行初步擴增。
  • 選擇性擴增：在預擴增的基礎上，使用具有更多選擇性堿基的引物進一步放大目標片段。
  • 電泳分離與檢測：通過聚丙烯酰胺凝膠電泳或毛細管電泳等手段分離擴增產物，并借助銀染或其他化學發光試劑顯色后觀察記錄。
  • 數據分析：基于獲得的帶型圖譜，運用適當的軟件工具進行比對分析，從而識別出不同樣本之間的相似性和差異性。

該標準還特別強調了實驗過程中需要注意的一些技術細節，如如何保證酶切效率、提高接頭連接率以及優化PCR反應條件等，旨在確保實驗結果的可靠性和重復性。此外，對于數據分析部分也給出了指導建議，幫助研究人員正確解讀AFLP譜帶信息，有效應用于楊樹種質資源的保護與利用研究當中。


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  • 現行
  • 正在執行有效
  • 2008-09-03 頒布
  • 2008-12-01 實施
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文檔簡介

犐犆犛６５．０２０

犅６１

中華人民共和國林業行業標準

犔犢／犜１７７２—２００８

楊樹品種分子鑒定實驗方法

犇犖犃擴增片段長度多態性法（犃犉犔犘）

犕狅犾犲犮狌犾犪狉犻犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀犿犲狋犺狅犱犳狅狉狏犪狉犻犲狋犻犲狊狅犳狆狅狆犾犪狉—

犃犿狆犾犻犳犻犲犱犳狉犪犵犿犲狀狋犾犲狀犵狋犺狆狅犾狔犿狅狉狆犺犻狊犿（犃犉犔犘）

２００８０９０３發布２００８１２０１實施

國家林業局發布

書

犔犢／犜１７７２—２００８

前言

本標準的附錄Ａ為資料性附錄。

本標準由國家林業局提出。

本標準由全國林木種子標準化技術委員會歸口。

本標準起草單位：中國林業科學研究院林業研究所、中國科學院遺傳與發育生物學研究所和國家林

業局北方林木種子檢驗中心。

本標準主要起草人：李金花、張綺紋、王斌、宋紅竹、周春江、盧孟柱、李慶梅、牛正田。

Ⅰ

書

犔犢／犜１７７２—２００８

楊樹品種分子鑒定實驗方法

犇犖犃擴增片段長度多態性法（犃犉犔犘）

１范圍

本標準規定了以楊樹新鮮組織（葉片、芽等）為材料，利用擴增片段長度多態性ＤＮＡ法（Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ

ＦｒａｇｍｅｎｔＬｅｎｇｔｈＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，簡稱ＡＦＬＰ）對楊樹品種進行分子鑒定的實驗方法。

本標準適用于楊樹品種的分子鑒定。

２原理

楊樹基因組ＤＮＡ經限制性內切酶雙酶切后，形成分子量大小不等的隨機片段，將針對犈犮狅ＲＩ和

犕狊犲Ｉ的特定接頭連接在這些ＤＮＡ片段的兩端，形成帶特異接頭的ＤＮＡ片段，隨后利用一對與接頭和

鄰接酶切位點相匹配的引物進行擴增，最終通過變性聚丙烯酰胺凝膠電泳將這些特異性片段分離開來，

通過比較待測品種和對照品種間ＤＮＡ指紋譜帶數據的差異，來判定待測品種與對照品種是否為相同

品種。

３儀器和設備

３．１通用實驗室儀器設備。

３．２梯度ＰＣＲ擴增儀。

３．３瓊脂糖膠電泳系統。

３．４變性聚丙烯酰胺凝膠電泳系統。

３．５紫外透射儀。

３．６凝膠成像系統或照相系統。

３．７重蒸餾水儀。

４試劑與溶液

除非另有說明，在分析中使用分析純試劑。配制好的溶液經高壓滅菌后使用。實驗中所使用的水

均為無菌超純水。

４．１犇犖犃限制性內切酶犈犮狅犚犐和犕狊犲犐（１０犝／μ犔）及其１０×反應緩沖液

－２０℃保存。

４．２犜犪狇犇犖犃聚合酶（１犝／μ犔）及其１０×犘犆犚反應緩沖液

１０×ＰＣＲ反應緩沖液含２００ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓＨＣｌ（ｐＨ８．４）、１５ｍｍｏｌ／Ｌ氯化鎂（ＭｇＣｌ２）和

５００ｍｍｏｌ／Ｌ氯化鉀（ＫＣｌ），－２０℃保存。

４．３犜４犇犖犃連接酶（１犝／μ犔）及其１０×連接反應緩沖液

１０×反應緩沖液含３５０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓＨＣｌ（ｐＨ７．６）、５０ｍｍｏｌ／ＬＭｇＣｌ２和５００ｍｍｏｌ／ＬＫＣｌ和

５ｍｍｏｌ／Ｌβ巰基乙醇；－２０℃保存。

４．４四種脫氧核糖核苷酸（犱犃犜犘，犱犆犜犘，犱犌犜犘，犱犜犜犘）混合溶液（各１０犿犿狅

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