項目主要結 字體說 參考文 項目主要結果Intens.Intens.0

11m/zm/z（質荷比Intens（峰度I1.1符號名 符號說 小四字 五號字 正字 1蛋白分子量測定工作流程蛋白分子量測定原理基質輔助激光解析電離飛行時間質譜(MALDI-TOF-MS)是一種新型的軟電離生物質譜，尤其適用于蛋白質等生物大分子的分子量測定。其分子量測定原理如圖2.1所示。圖 基質輔助激光解析電離飛行時間質譜測定蛋白分子量原基質輔助激光解析電離飛行時間質譜儀器主要由兩部分組成：基質附助激光解析電離離子源（MALDI）和飛行時間質量分析器（TOF。MALDI的原理是用激光照射樣品與基質形成的共結晶薄膜，基質從激光中吸收能量傳遞給蛋白分子，而電離過程中將質子轉移到蛋白分子或從蛋白分子得到質子，而使蛋白分子電離的過程。因此它是一種軟電離技術，適用于混合物及生物大分子的測定。TOF的原理是離子在電場作用2下加速飛過飛行管道，根據到達檢測器的飛行時間不同而被檢測，即測定離子的質荷比（M/Z）與離子的飛行時間成正比，從而可以檢測離子，測定其分子量。現階段MLD-O-S測定蛋白分子量有其獨特的優勢（1對樣品的消耗很少，特別適合于貴重蛋白的分子量測定；（2）對樣品的保護作用好，基質可以保護樣品的化合物不被破壞；（3）隨著質量分析器的不斷改進、新的基質的不斷發現和應用以及延遲萃取技術的使用，使得MAD-TO-S的最高分辨率不斷提高，現已達到5000；（）MALD-TO-S檢測到的單電荷峰占主要部分，碎片峰少，非常有利于對復雜混合物的分析，并且能忍受較高濃度的鹽、緩沖劑和其他難揮發成分，降低了對樣品預處理的要求（5MALDI-TOMS質譜對分子量的測定范圍是所有測試技術中最廣的。數處理過2.2該圖顯示蛋白質分子測定的實驗基本流程：第一步，對客戶所提供的樣品（一般為已經提激光解析飛行時間質譜（ultrafleXtremeMALDITOF/TOF）性模式下對1K~20KD、20K~200KD、200K~1000KD三個區間進行質譜掃描（只提供掃到信號峰的區間譜圖。3生物信息分析流Raw數Raw處理過件，應用Flexysis分析軟件對數據進行處理，通過峰識別，得到峰列表，分析判斷得到相應蛋白質的4標準生物信息分析結果單一蛋白樣品進行分子量測定，也可對多種蛋白的混合樣中各蛋白分子量進定。所用軟件：exyss3.3版。質譜下機數據經該軟件處理后得到質譜峰圖，圖中橫坐標為帶電荷蛋白樣質荷比（m/z，縱坐標為峰強度（Intense，單位為[a.u]埃單位。對軟件的信噪比和峰寬進行設置，一般情況下，軟件默認的信噪比參數為6寬沒有特定值，視所測蛋白具體情況自行設置，如設置為10，則表明10以下為噪聲，將被篩選掉，軟件的默認峰寬參數為0.75m/z。軟件自動標注選取得到峰單一蛋白樣品分子量測定ultrafleXtr（Bruker50000，質量準確度為25ppm，蛋白樣品的基本信息如表3.1所示：3.1 5000000Intens. 3.13.2

m/z（質荷比Intens（峰度綜合圖表分析，該樣品中質譜檢測到三種不同質荷比的離子峰：33162.1，66135.6，132788.2。飛行時間質譜儀中出現最多的一般為單電荷，由此可以判斷分子量為66135.6，多種蛋白樣品分子量測定基質輔助激光解析電離飛行時間質譜可以對多種蛋白樣品的混合樣進定，得到各蛋白的分子量，測定中所使用ultrafleXtre（Bruker）質譜儀，分辨率50000，質量準確度為25ppm，蛋白樣品的基本信息如表3.3所示：3.3樣品名 樣品編 靶點編 6Intens.Intens.3.23.4m/z（質荷比Intens（峰強度 7[1]譚和平,王彧婕,等.蛋白質分子量測試方法概述[J].中國測試[2],