ICS6502001

B16..

中華人民共和國國家標準

GB/T31789—2015

冬生疫霉菌檢疫鑒定方法

DetectionandidentificationofPhytophthorahibernalisCarne

2015-07-03發(fā)布2015-11-27實施

中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局發(fā)布

中國國家標準化管理委員會

GB/T31789—2015

前言

本標準按照給出的規(guī)則起草

GB/T1.1—2009。

請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔識別這些專利的責任

。。

本標準由全國植物檢疫標準化技術(shù)委員會提出并歸口

(SAC/TC271)。

本標準起草單位中國檢驗檢疫科學研究院中華人民共和國廈門出入境檢驗檢疫局

:、。

本標準主要起草人杜洪忠吳品珊王宏毅嚴進張秋娥

:、、、、。

Ⅰ

GB/T31789—2015

冬生疫霉菌檢疫鑒定方法

1范圍

本標準規(guī)定了冬生疫霉菌的檢疫鑒定方法

。

本標準適用于針對冬生疫霉菌寄主的苗木枝條枝葉果實以及夾帶土壤和介質(zhì)中冬生疫霉菌的

、、、

鑒定

。

2儀器和用具

21儀器

.

生物顯微鏡超凈工作臺光照培養(yǎng)箱電子天平高壓滅菌鍋冰箱擴增儀熒光

、、、(1/1000g)、、、PCR、

擴增儀電泳儀凝膠成像儀高速冷凍離心機恒溫水浴鍋

PCR、、、、。

22用具

.

燒杯三角瓶量筒試管培養(yǎng)皿酒精燈鑷子剪刀解剖刀接種針載玻片蓋玻片塑料研杵

、、、、、、、、、、、、、

移液器移液器吸頭離心管液氮罐

、、、。

3試劑材料和培養(yǎng)基

、

31試劑

.

匹馬霉素氨芐青霉素鈉鹽利福平鈉鹽五氯硝基苯

(pimaricin),(ampicillin),(rifampicin),(penta-

碳酸鈣β谷甾醇β色氨酸硫氨

chloronitrobenzene),(CaCO3),-(-sitosterol),(tryptophan),(thiamine),

氯化鈣次氯酸鈉

(CaCl2·H2O),(NaClO)。

瓊脂糖乙二胺四乙酸四鈉鹽

,Tris-HCl,MgCl2,HCl,EDTA(),NaOH,NaOAc,KCl,Tris,CTAB

十六烷基三甲基溴化銨無水乙醇三氯甲烷異丙醇異

(),TAE,(Ethanol),(Chloroform),(Isopropanol),

戊醇核酸染料蛋白酶Taq聚合酶相對分子

(Isoamylalcohol),SYBRGreenI,K,DNA,dNTPs,DNA

質(zhì)量標準物引物和實時熒光引物和及探針

,PCRPHIB1PHIB2,PCRPH-FPH-RTaqMan-MGB

PH-Pr。

32材料

.

瓊脂粉汁雪松松針Cedrusdeodara柑橘葉片Citrus胡蘿卜玉米油

、V8、()、(spp.)、、。

33培養(yǎng)基

.

培養(yǎng)基胡蘿卜絲培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)基和卵孢子培養(yǎng)基具體配方參見附

V8、CPA、PARP-V8,

錄

B。

4檢疫鑒定方法

41癥狀檢查

.

重點觀察柑橘果實是否有褐色病變?nèi)~和小枝是否枯萎杜鵑屬植物