動物源性細菌病原生物學教研室布魯斯菌屬(Brucella)

簡稱布氏菌屬，是一類G-短小桿菌。本菌屬有4個生物種、13個血清型，對人致病的有牛布魯斯菌、羊布魯斯菌、豬布魯斯菌和犬布魯斯菌，在我國流行占絕對優勢的是羊布魯斯菌病，其次為牛布魯斯菌。

形態與染色

抗醇染色性對布魯斯菌有特殊鑒別意義：布魯斯菌呈蘭色，背景及非抗醇菌呈紅色。

生物學性狀培養特性

需氧菌，牛布魯斯菌在初次分離時需5%～10%CO2。

雙相肝浸液培養基----37℃，48h可長出微小、透明、無色的光滑菌落。生物學性狀生物學性狀生化反應

主要布魯斯菌的特性與鑒別菌種CO2需要脲酶試驗H2S產生含染料培養基中生長凝集試驗復紅（1：50000）硫堇（1：20000）抗A因子抗M因子牛布魯斯菌＋＋＋＋－＋－羊布魯斯菌－不定－＋＋－＋豬布魯斯菌－＋＋/－－＋＋＋生物學性狀抵抗力

本菌抵抗力較強。在土壤、皮毛、肉和乳制品及水中可生存數周至數月。但在濕熱60℃10min死亡；直射日光下10～20min死亡；3％來蘇兒中數分鐘死亡。對常用的抗生素也較敏感。

生物學性狀

抗原構造與分型

含有二種抗原物質：M(melitensis)抗原（羊布魯斯菌菌體抗原）；A(abortus)抗原（牛布魯斯菌菌體抗原）。羊布魯斯菌M：A是20：1；牛布魯斯菌M：A是1：20；豬布魯斯菌M：A是1：2。本菌還含有L表面抗原，與沙門菌Vi抗原相似。

致病物質

內毒素是主要致病物質。透明質酸酶、莢膜等也具有較強的侵襲力。布魯斯菌引起的遲發型超敏反應與致病性有關。

致病性與免疫性致病性與免疫性所致疾病牛、羊、豬是本菌的主要自然宿主，感染后可引起母畜流產。人類對布魯斯菌易感，細菌可通過消化道和呼吸道粘膜、皮膚及眼結膜等途徑傳染于人，引起布魯斯菌病。反復呈波浪式熱型，故臨床上稱為波浪熱。

致病性與免疫性免疫性

一般認為布魯斯菌感染后形成的免疫是有菌免疫。最終變為無菌免疫。病后產生的抗體主要是IgG和IgM，有調理作用。布魯斯菌以細胞免疫為主。感染后可引起Ⅲ、IV型超敏反應。病程中免疫保護和病理損害往往交織存在。病原菌分離

血清學診斷皮膚試驗即布魯菌素皮膚超敏反應試驗（brucellinskintest）。

皮試陽性可診斷慢性或曾患過布魯菌病。

微生物學檢查法微生物學檢查法血清學診斷

凝集反應

定量凝集反應：一般血清效價1：160～1：320為陽性診斷標準。抗人球蛋白試驗（即Coomb’stest）

一般用于血清凝集試驗陰性、卻有明顯布魯菌病癥狀的病例。比凝集反應更靈敏，陽性出現早，消失晚。CF：CF主要是測定IgG型抗體，出現較晚，一般以1：10為陽性。

預防措施主要是控制和消滅牲畜布魯菌病，切斷傳播途徑和對疫區人畜接種減毒活菌苗，有效期約一年。急性病人用抗生素治療，慢性患者可用特異性菌苗脫敏治療。

防治原則芽胞桿菌屬（Bacillus）芽胞桿菌屬是一大群具有芽胞的革蘭陽性桿菌，其共同特點是絕大多數菌種在有氧條件下形成不大于菌體橫徑的芽胞，多有周鞭毛，對營養要求不高，菌體呈長鏈狀排列，菌落為粗糙型。本菌屬包括：炭疽芽胞桿菌（B.anthracis）：類炭疽芽胞桿菌（B.anthracoid）：是實驗室常見的污染菌，包括蠟樣芽胞桿菌、枯草芽胞桿菌、多粘芽胞桿菌、嗜熱脂肪芽胞桿菌等。第一節炭疽芽胞桿菌

形態與染色

生物學性狀炭疽桿菌芽孢（復紅、美藍染色×400）炭疽芽孢桿菌×1000（莢膜串珠反應培養特性

需氧菌。普通瓊脂平板：形成大而扁平、灰白色的粗糙型菌落，低倍鏡下可見卷發狀邊緣。碳酸氫鈉瓊脂平板：有毒株在5%CO2環境中孵育48h，由于產生莢膜而形成粘液型菌落，用接種環挑取時可見拉絲狀。

生物學性狀抵抗力

芽胞對外界因素的抵抗力強：在室溫干燥環境中能存活20余年，在皮革中能生存數年。牧場一旦被污染，傳染性可維持20～30年。煮沸10min，干熱140℃3h才能破壞芽胞。芽胞對化學消毒劑的抵抗力也很強；對碘較敏感，1：2500碘液經10min即可破壞芽胞。本菌對青霉素、紅霉素、氯霉素均敏感。

生物學性狀抗原結構1．莢膜抗原具有抗吞噬作用，與毒力有關。無種屬特異性。2．菌體抗原為多糖抗原，由于耐熱，此抗原在病畜皮毛或腐敗臟器中雖經長時煮沸仍可與相應抗體發生沉淀反應，稱為Ascoli熱沉淀反應。與其他芽胞桿菌、14型肺炎球菌多糖抗原、人類A血型物質有共同成分，能發生交叉反應。3．芽胞抗原由芽胞的外膜、皮質等組成的芽胞特異性抗原，具有免疫原性和血清學診斷價值。4．炭疽毒素由保護性抗原（PA）、致死因子（LF）和水腫因子（EF）三種蛋白質組成的復合物。炭疽毒素具有抗吞噬作用和免疫原性。其相應抗體對宿主有一定的保護作用。

生物學性狀致病物質

莢膜具有抗吞噬作用，有利于細菌在機體組織內繁殖與擴散。炭疽毒素保護性抗原（PA）

致死因子（LF）

水腫因子（EF）致病性與免疫性毒性作用主要是直接損傷微血管的內皮細胞，使血管通透性增加，有效循環血量不足，微循環灌注量明顯減少，血液呈高凝狀態，易形成感染性休克和彌散性血管內凝血（DIC）所致疾病

主要通過接觸病畜及其皮毛等：皮膚炭疽：細菌由手、頸、顏面部小傷口侵入，最多見。經12～36h局部出現水泡、膿皰，最后壞死潰瘍，形成特有的黑色焦痂，故名炭疽，輕者2～3周治愈，重者死于敗血癥；腸炭疽：食入未煮熟的病畜肉類、病畜奶或污染食物引起。出現連續性嘔吐、腸麻痹及血便，以全身中毒為主，2～3d死于毒血癥；肺炭疽：吸入含有大量病菌芽胞的塵埃可發生，又稱羊毛工人病。表現呼吸道癥狀，很快出現全身中毒癥狀。致病性與免疫性免疫性

感染炭疽（包括隱性感染和顯性感染）或接種疫苗后，均可獲得持久的免疫力。免疫作用主要與抗毒素及吞噬細胞的吞噬作用增強有關。

致病性與免疫性直接涂片鏡檢：見到有莢膜的典型竹節狀G+大桿菌，結合臨床癥狀可作出初步診斷。分離培養血瓊脂平板和碳酸氫鈉瓊脂平板標本觀察菌落特征，并做青霉素串珠試驗、動物試驗、噬菌體裂解試驗等鑒定。Ascoli試驗

免疫熒光法檢查病人的莢膜抗體，用ELISA檢查保護性抗體。微生物學檢查法性狀炭疽芽胞桿菌其他需氧芽胞桿菌

莢膜

+-動力-+溶血不溶血或微溶血多為迅速而明顯溶血肉湯生長絮狀沉淀，上層清晰沉淀，均勻渾濁，有菌膜青霉素串珠試驗

+-噬菌體裂解試驗

+-NaHCO2瓊脂平板粘液型菌落粗糙型菌落動物致病力試驗+-炭疽芽胞桿菌與其他需氧芽胞桿菌的鑒別

預防人類炭疽病的關鍵是加強家畜的管理及其炭疽病的防治，對易感家畜進行預防接種。病畜應嚴格隔離或處死深埋。死畜嚴禁剝皮或煮食，必須焚毀或深埋于2m以下并加大量石灰。對可疑污染的動物皮毛、用具等必須徹底消毒處理。對易感者，主要是牧民、屠宰牲畜人員、獸醫、制革工人等應進行特異性預防，用炭疽減毒活疫苗或炭疽純化菌苗，皮上劃痕、皮下注射或氣溶膠吸入接種，一般接種后半月產生免疫力，可維持1年。治療炭疽病以青霉素為首選，四環素、氯霉素、強力霉素、磺胺藥物等也有效。也可采用抗生素、磺胺藥物及抗炭疽血清的綜合療法。

防治原則第二節蠟樣芽胞桿菌

蠟樣芽胞桿菌廣泛分布于土壤、污水、塵埃中，對人類是條件致病菌，常因污染水、淀粉制品、奶制品等食物而引起食物中毒。只有食物中含菌量達到106/g時才能致病。致病物質主要是腸毒素。本菌對紅霉素、氯霉素和慶大霉素敏感，對青霉素、磺胺類耐藥。

耶爾森菌屬（Yersinia）

屬于腸桿菌科，有11個菌種，該屬細菌通常引起嚙齒動物、家畜和鳥類等動物感染，人類通過接觸動物、被節肢動物叮咬或食入被污染食物等途徑感染。

鼠疫耶氏菌----鼠疫小腸結腸炎耶氏菌----人類嚴重小腸結腸炎。

假結核耶氏菌----食用患病動物污染的食物而感染,多為胃腸炎、腸系膜淋巴結肉芽腫、回腸末端炎等。鼠疫耶爾森菌（Y.pestis）

俗稱鼠疫桿菌，是鼠疫的病原菌。鼠疫是在野生嚙齒類動物間傳播的一種烈性傳染病，歷史上曾發生過三次世界性大流行。通過鼠蚤叮咬而傳染人，引起嚴重疾病，死亡率極高。

形態與染色

生物學性狀培養特性

營養要求不高：固體培養基：形成無色透明、中央厚而致密、周圍菲薄而不整齊邊緣的細小菌落。肉湯培養基：“鐘乳石”狀發育，此特征具有鑒別意義。

生物學性狀抗原構造

1．F1抗原莢膜抗原，具有抗吞噬作用；

刺激機體產生抗體（保護性抗體）2．V和W抗原同一質粒編碼。與毒力有關，能抑制吞噬細胞的吞噬作用。3．外膜蛋白與V-W基因在同一質粒上；這些蛋白能使細菌突破機體的防御機制。4.鼠毒素是一種外毒素，為蛋白質，具有抗原性。1μg即可使鼠致死，可引起局部壞死和毒血癥。但對人的損傷作用不清楚。

生物學性狀抵抗力

對理化因素抵抗力較弱。濕熱70～80℃10min或100℃1min可殺死該菌。在干燥痰中可存活3～7d，在蚤糞和土壤中能存活半年至1年以上。5%來蘇、0.1%0.2%升汞在20min內可將痰液中病菌殺死。

致病物質

毒力強，幾個細菌即可使人致病，其致病作用與F1抗原、V抗原的抗吞噬作用以及鼠毒素和內毒素的毒性作用有關。致病性與免疫性所致疾病

鼠疫是自然疫源性傳染病。

傳播方式：鼠鼠蚤鼠。

臨床類型：腺鼠疫：劇烈的出血壞死性淋巴結炎，多在腹股溝。肺鼠疫：吸入染菌塵埃，易暴發流行，死亡率高。敗血癥型鼠疫：（原發性/繼發性）最嚴重，死亡率可高達100%。

死者皮膚常呈黑紫色，故有“黑死病”之稱。致病性與免疫性人人呼吸道/人蚤致病性與免疫性

免疫性

鼠疫病后能獲得持久免疫力，很少再感染。體液免疫：針對F1抗原、V-W抗原的抗體，具有調理吞噬、凝集細菌和殺菌作用；細胞免疫：由于鼠疫耶爾森菌主要在吞噬細胞內繁殖，因此抗感染能力依賴于細胞免疫和吞噬細胞對病菌的消滅。

直接涂片鏡檢：革蘭染色、美藍染色，觀察形態和染色特性。

分離培養血瓊脂平板可疑菌落標本作涂片染色、噬菌體裂解試驗、血清凝集