第六章芳酸類藥物的分析學習目標掌握水楊酸、苯甲酸類藥物化學結構與分析方法間的關系；鑒別與含量測定的方法；特殊雜質的檢驗方法與雜質限量計算；兩步滴定法和雙相測定法的原理。熟悉紫外分光光度法、高效液相色譜法在芳酸類藥物中的應用。了解其他芳酸類藥物的分析。第六章芳酸類藥物的分析本章目錄

概述第一節水楊酸類藥物分析第二節苯甲酸類藥物分析第六章芳酸類藥物的分析羧基直接與芳香環相連的化合物稱芳酸。芳酸及其酯類藥物的結構特點是：結構中有羧基、酯鍵和苯環；有些藥物有酚羥基、芳伯氨基

概述第六章芳酸類藥物的分析第一節水楊酸類藥物分析水楊酸類藥物結構理化性質鑒別檢查含量測定

第六章芳酸類藥物分析藥物結構理化性質與分析方法①在乙醇中易溶，在水中溶解度小，多以醇為溶劑分析；②具羧基，呈酸性；③含酯鍵，不穩定，易水解；④水解后生成游離的酚羥基，可與鐵離子發生呈色反應⑤有苯環，在紫外光區有吸收

②③④⑤阿司匹林結構與理化性質的關系

第六章芳酸類藥物分析酸性：用于定性、定量反應酚羥基：FeCl3呈色反應苯環：紫外吸收水楊酸

第六章芳酸類藥物分析芳酸堿金屬鹽：水溶性大，顯弱堿性酚羥基，有何性質？芳伯氨基：重氮化－偶合反應苯環有何性質?對氨基水楊酸鈉

第六章芳酸類藥物分析酯鍵：水解，可生成酚羥基和醋酸酯鍵：水解，可生成酚羥基和羧基酰胺鍵：水解，可生成芳伯氨基苯環苯環貝諾酯返回

第六章芳酸類藥物分析一、鑒別試驗1.三氯化鐵反應含酚羥基結構的藥物在中性或弱酸性條件下，可與Fe3＋反應，形成有色配位化合物。（1）水楊酸：加三氯化鐵試液1滴，即呈紫色。（2）阿司匹林：加入氫氧化鈉試液，煮沸水解后，放冷，加FeCl3試液1滴，呈紫堇色。（3）貝諾酯：加入氫氧化鈉試液，煮沸，放冷，濾液調成微酸性，加三氯化鐵試液2滴，呈紫堇色。

第六章芳酸類藥物分析反應式如下：貝諾酯和阿司匹林需水解，生成水楊酸，才能發生該反應

（紫堇色）

第六章芳酸類藥物分析2.重氮化－偶合反應

貝諾酯由阿司匹林和對乙酰氨基酚酯化而成。在酸性條件下加熱水解，生成對氨基酚，呈芳香第一胺反應。

供試品稀鹽酸，煮沸，放冷，濾過濾液猩紅色亞硝酸鈉、堿性β-萘酚

第六章芳酸類藥物分析

第六章芳酸類藥物分析3.紫外吸收光譜法貝諾酯溶液，在240nm的波長處有最大吸收，按干燥品計算，吸收系數（）為730～760。4.紅外吸收光譜法水楊酸、阿司匹林、貝諾酯、對氨基水楊酸鈉均采用紅外吸收光譜法，供試品的紅外光吸收圖譜應與對照的圖譜一致。對氨基水楊酸鈉水溶液還可呈鈉鹽鑒別反應。IR：阿司匹林-COOH-COOHPh-C鄰位取代PhN-HO-HN-HPh:C=C芳胺酚

第六章芳酸類藥物分析二、雜質檢查（一）阿司匹林的雜質檢查阿司匹林原料主要控制的特殊雜質有“溶液的澄清度”“水楊酸”“易炭化物”

第六章芳酸類藥物分析1.溶液的澄清度

本項目主要檢查碳酸鈉試液中不溶性雜質。這些雜質是未反應的酚類、或副反應產生的無游離羧基的醋酸苯酯、水楊酸苯酯和乙酰水楊酸苯酯等。阿司匹林有羧基，溶解于碳酸鈉試液。醋酸苯酯

水楊酸苯酯

乙酰水楊酸苯酯

第六章芳酸類藥物分析2.游離水楊酸水楊酸可由合成過程中乙酰化不完全或阿司匹林在貯藏過程中水解產生。水楊酸對人體有毒，并有刺激性，其進一步氧化產物使藥物變色，影響藥物的質量。故應嚴格控制阿司匹林中的水楊酸。中國藥典（2010）采用高效液相法測定。

第六章芳酸類藥物分析【實例分析】阿司匹林中游離水楊酸檢查游離水楊酸照高效液相色譜法（附錄ⅤD）測定。色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-四氫呋喃-冰醋酸-水（20：5：5：70）為流動相；檢測波長為303nm。理論板數按水楊酸峰計算不低于5000，阿司匹林主峰與水楊酸主峰分離度應符合要求。供試品溶液的制備取本品約100mg，精密稱定，置10ml量瓶中，加1%冰醋酸甲醇溶液適量，振搖使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得（臨用前新配）。對照品溶液的制備取水楊酸對照品約10mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加1%冰醋酸甲醇溶液適量使溶解，并稀釋至刻度，搖勻；精密量取5ml，置50ml量瓶中，用1%冰醋酸甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。測定法立即精密量取供試品溶液、對照品溶液各10μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖。供試品溶液色譜圖中如顯水楊酸色譜峰，按外標法以峰面積計算供試品中水楊酸含量，含水楊酸不得過0.1%。

第六章芳酸類藥物分析原則上，制劑不必重復檢查原料藥項下檢查的雜質，但在制劑制備或制劑貯存過程中，有可能再引入的雜質，應檢查控制。阿司匹林片在制備或貯存過程中，因酯鍵易水解，而生成水楊酸，故阿司匹林片劑、栓劑均要檢查水楊酸。

第六章芳酸類藥物分析3.易炭化物本項目檢查被硫酸碳化而呈色的低分子有機雜質

第六章芳酸類藥物分析(4)有關物質照高效液相色譜法（附錄ⅤD）測定。色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-四氫呋喃-冰醋酸-水（20：5：5：70）為流動相A，乙腈為流動相B，按下表進行線性梯度洗脫；檢測波長為276nm。阿司匹林峰的保留時間約為8分鐘，理論板數按阿司匹林峰計算不低于5000，阿司匹林峰與水楊酸峰分離度應符合要求。時間（分鐘）流動相A（%）流動相B（%）0.0100060.02080

第六章芳酸類藥物分析測定法取本品約0.1g，精密稱定，置10ml量瓶中，加1%冰醋酸甲醇溶液適量，振搖使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液；精密量取供試品溶液1ml，置200ml量瓶中，用1%冰醋酸甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得對照溶液；精密量取對照溶液10ml，置100ml量瓶中，用1%冰醋酸甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得靈敏度試驗溶液。分別精密量取供試品溶液、對照溶液、靈敏度試驗溶液及水楊酸檢查項下的水楊酸對照品溶液各10μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。供試品溶液色譜圖中如顯雜質峰，除小于靈敏度試驗溶液中阿司匹林主峰面積的單個雜質峰、溶劑峰及水楊酸峰不計外，其余各雜質峰面積的和不得大于對照溶液主峰峰面積（0.5%）。

第六章芳酸類藥物分析（二）對氨基水楊酸鈉中間氨基酚的檢查間氨基酚易被氧化，氧化產物導致藥物變色，并且對人體有毒性作用，應嚴格控制其限量間氨基酚引入的途徑有二：一是未反應完全的原料；二是對氨基水楊酸鈉遇熱或日光照射脫羧

第六章芳酸類藥物分析

【檢查】有關物質避光操作。取本品適量，精密稱定，加流動相溶解并稀釋制成每1ml中含0.7mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取供試品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液A。另取間氨基酚對照品適量，精密稱定，加流動相稀釋制成每1ml中含1.2μg的溶液，作為對照品溶液B。照含量測定項下的色譜條件，檢測波長為280nm測定，理論板數按對氨基水楊酸鈉峰計算應不低于3000，對氨基水楊酸鈉峰與雜質峰之間的分離度應符合要求。取對照溶液A20μl，注入液相色譜儀，調節檢測靈敏度，使對氨基水楊酸鈉色譜峰的峰高為滿量程的20％～25％。另精密量取供試品溶液、對照溶液A與對照品溶液B各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的3.5倍。供試品溶液的色譜圖中如有與間氨基酚峰保留時間一致的峰，按外標法以峰面積計算，其含量不得過0.25%，其他單個雜質峰面積不得大于對照溶液A主峰面積的1/10（0.1%），其他各雜質峰面積的和不得大于對照溶液A主峰面積（1.0%）。第四節含量測定一、酸堿滴定法(Acid-basetitrationmethod)苯甲酸pKa4.20水楊酸pKa2.98酸性較強羧酸鄰位-OH，吸電子基團，使酸性增加；分子內氫鍵，更增加了其極性直接滴定Aspirin、丙磺舒(Ch.P.BP.JP等)苯甲酸(Ch.P等)均可采用本法1.直接滴定法乙醇作用：溶解ASA；防止ASA在水溶液中滴定過程易水解中性乙醇：對指示劑(酚酞)而言為中性，可消除滴定誤差

pKa3~6

的藥物溶于中性醇,可直接用NaOH滴定

pKa6~9

的藥物要用非水溶液滴定法若SA不合格，不宜采用本法2.水解后剩余滴定法(Residualtitrationafterhydrolysis)取本品約1.5g，精密稱定，準確加NaOH液(0.5mol/L)50.0ml，緩緩煮沸10min，放冷，以酚酞為指示劑，用H2SO4液(0.25mol/L)滴定剩余的NaOH，并將滴定結果用空白試驗校正。每1ml的NaOH液(0.5ml/L)相當于45.04mg的C9H9O4USP32-NF27滴定度滴定度濃度待測物反應系數滴定液物反應系數滴定液物摩而質量空白反應體積樣品測定消耗體積樣品稱重量3.兩步滴定法(Two-steptitration)Aspirin片枸櫞酸Citricacid酒石酸Trataricacid水解產物水楊酸SAHAc第一步：NaOH滴定所有的酸：ASA，CA，TA，SA，HAc

第二步：水解后剩余滴定取本品10片，精密稱定，研細，精密稱取適量(約相當于阿司匹林0.3g)，置錐形瓶中，加中性乙醇(對酚酞指示劑顯中性)20ml，振搖使ASA溶解，加酚酞指示液3滴，滴加NaOH液(0.1mol/L)至顯粉紅色，再精密加NaOH液(0.1mol/L)40ml，置水浴上加熱15min，并時時振搖，迅速放冷至室溫，用H2SO4液(0.05mol/L)滴定，并將滴定的結果用空白試驗校正。每1ml的NaOH液(0.1mol/L)相當于18.02mg的C9H8O4空白消耗樣測消耗校正因數滴定度片劑規格二、非水溶液滴定法吡羅昔康四、UV1.直接UV法2.離子交換-UV法氯貝丁酯在226nm的波長處有最大吸收，但對氯酚等有關物質亦有吸收，干擾UV法的測定。根據氯貝丁酯為酯結構，不能發生電離，而有關物質可發生酸性解離的性質差異，采用陰離子交換色譜分離后，采用UV法測定。3.CPC-UV法(ColumnPartitionChromatography)利用固定相酸堿性的不同進行分離利用藥物和固定相起化學反應而進行分離利用生成離子對進行層析分離單純靠選擇流動相進行分離200~300mm60mm4mm22mm層析柱玻棉壓榨棒350mm21mm擔體：硅藻土(Celite545)固定相：一定pH的緩沖水溶液流動相：與水不相混溶的有機溶劑(洗脫前必須先用水飽和)b.ASA測定供試液制備洗脫5,25mlCHCl3相繼洗脫，棄去CHCl3洗脫10ml冰HAc-CHCl3(1→50)**；85ml冰HAc-CHCl3(1→100)，并稀釋至100ml測定：280nm空白：CHCl3①NaHCO3使ASA和SA成鹽保留于柱上用CHCl3洗脫的目的：去除中性或堿性雜質②冰HAc酸化的目的：使ASA游離，易被CHCl3洗脫供試品吸光度對照品吸光度對照品濃度例子五、HPLC對照品濃度供試品濃度對照品濃度

第六章芳酸類藥物分析【實例分析】阿司匹林原料的含量測定取本品約0.4g，精密稱定，加中性乙醇（對酚酞指示液顯中性）20ml溶解后，加酚酞指示液3滴，用氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)相當于18.02mg的C9H8O4。阿司匹林的百分含量％＝式中V:氫氧化鈉滴定液消耗的體積，ml；T：滴定度（18.02mg）；F:滴定液濃度校正系數；W：供試品取樣量。

第六章芳酸類藥物分析注意事項：（1）中性乙醇：阿司匹林在乙醇中溶解度大，不易水解；乙醇中有微量乙酸等物質，故應制成中性（對酚酞指示液顯中性）；（2）為防止阿司匹林在滴定過程中水解，一要快速滴定，二要劇烈振搖，防止局部堿過濃；（4）滴定終點后，因乙酰水楊酸鈉逐漸水解，會使粉紅色褪去，所以要注意判斷終點第六章芳酸及其酯類藥物的分析第二節苯甲酸類藥物的分析

苯甲酸及其鈉鹽結構理化性質鑒別檢查含量測定第六章芳酸藥物的分析藥物結構理化性質與分析方法

2.羧基4.苯環3.芳酸1.在乙醇、氯仿或乙醚中易溶，在水中微溶，在沸水中溶解；其鈉鹽在水中易溶，乙醇中略溶2.酸性，用于定量3.三氯化鐵呈色反應4.共軛雙鍵，紫外吸收

1.溶解性一、苯甲酸及其鈉鹽的結構、主要理化性質與分析方法返回

第六章芳酸藥物的分析二、苯甲酸及其鈉鹽分析（一）鑒別試驗1.三氯化鐵反應在堿性溶液和苯甲酸鈉在中性溶液，苯甲酸與三氯化鐵試液生成沉淀。第六章芳酸藥物的分析2.分解產物的反應苯甲酸鈉升華試驗：苯甲酸鈉固體，加硫酸，加熱，可見白色苯甲酸凝結在試管內壁。此反應收載于中國藥典（2005年版）附錄“一般鑒別試驗”中。3.紅外光譜法供試品紅外光吸收圖譜與對照的圖譜比較應一致。第六章芳酸藥物的分析(二)含量測定1.苯甲酸直接酸堿滴定法

基本原理：苯甲酸酸性較強，水中溶解度小，而其鈉鹽在水中溶解度大，故以中性稀乙醇為溶劑,可用氫氧化鈉滴定液直接滴定。終點產物為苯甲酸鈉，偏堿性，以酚酞為指示劑。第六章芳酸藥物的分析【實例分析】苯甲酸的含量測定取苯甲酸約0.25g,精密稱定，得0.2478g。加中性稀乙醇（對酚酞指示液顯中性）25ml溶解后，加酚酞指示液3滴，用氫氧化鈉滴定液(0.1033mol/L)滴定，消耗滴定液19.72ml，每1ml氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)相當于12.21mg的C7H6O2。第六章芳酸藥物的分析分析：

苯甲酸的百分含量％＝F＝

苯甲酸的百分含量％＝