色譜法及色譜儀檢定的方法與裝置什么是色譜儀？色譜儀就是用物理方法把混合物分離開來的一種儀器。下面本文將就色譜儀檢定的特點、色譜理論、色譜儀檢定的方法幾個方面進行介紹。一、色譜儀檢定的特點檢定時間長檢定一臺色譜儀一般需要3-5個小時，時間較長。色譜儀在運行前首先要進行1-2小時的預熱，否則儀器的基線難以穩定。另外在在檢定過程中，基線和重復性的檢定也都需要較長的時間。儀器型號繁多、操作復雜色譜儀在運行前，需要更換色譜柱、流動相，啟動泵和檢測器，并對衰減、流速、紙速等進行設置，所以操作比較復雜。另外，色譜儀的型號比較多，各種型號色譜儀的操作界面都不盡相同，尤其是計算機工作站的引入，使得各種型號色譜儀的操作差別更大。維修困難色譜儀的內部電路非常復雜，而且零部件的更換必須使用相應廠家生產的配套產品，因而維修比較困難。標準物質是主要的計量裝置不論是氣相色譜儀，還是液相色譜儀，基線噪聲、基線漂移、最小檢測濃度都是三個最重要的指標，而對它們的檢定只需使用標準物質即可進行分布不均衡二、色譜法(色譜理論)色譜分析方法簡稱色譜法或層析法(CHROMATOGRAPHY)，是一種物理或物理化學分離分析方法。從本世紀初起，特別是在近50年中，由于氣相色譜法、高效液相色譜法及薄層色譜法掃描法的飛速發展，而形成一門專門的科學—色譜學。色譜法已廣泛用于各個領域，成為多組分混合物的最重要分析方法，在各學科中起過和起著重要作用。色譜法創始于20世紀初，1906年俄國植物學家TSWEET將碳酸鈣放在豎立的玻璃管中，從頂端倒入植物色素的石油醚浸取液，并用石油醚沖洗。在管的不同部位形成色帶，因而命名為色譜。管內填充物稱為固定相(STATIONARYPHASE)，沖洗劑稱為流動相(MOBILEPHASE)。隨著其不斷發展，色譜法不僅用于有色物質的分離，而且大量用于無色物質的分離。雖然“色”已失去意義，但色譜法名稱仍沿用至今。30、40年代相繼出現了薄層色譜法和紙色譜法。50年代氣相色譜法興起，把色譜法提高到分離與“在線”分析的新水平，奠定了現代色譜法的基礎，1956年GOLAY提出了開管柱色譜理論，次年誕生了毛細管色譜分析法。60年代推出了氣相色譜-質譜聯用技術(GC-MS)，有效地彌補了色譜法定性特征差的弱點。70年代高效液相色譜法(HPLC)的崛起，為難揮發、熱不穩定及高分子樣品的分析提供了有力手段。擴大了色譜法的應用范圍，把色譜法又推進到一個新里程碑。80年代初出現了超臨界流體色譜法(SFC)。兼有GC與HPLC的特點。80年代末飛速發展起來的高效毛細管電泳法(HPCE)更令人矚目，其柱效高，理論塔板數可達107M-1。該法對于生物大分子的分離具有獨特優點。色譜法簡單分類如下：色譜法的分離原理主要是利用物質在流動相與固定相之間的分配系數差異而實現分離。混合物中，若兩個組分的分配系數(DISTRIBUTIONCOEFFICIENT)不等，則被流動相攜帶移動的速度不等—差速遷移，而被分離。分離過程如左圖所示。把含有A、B兩組分的樣品加到色譜柱的頂端，A、B均被吸附在固定相上。然后用適當的流動相沖洗，當流動相流過時，已被吸附在固定相上的兩種組分又溶解于流動相中而被解吸，并隨著流動相向前移行，已解吸的組分遇到新的吸附劑顆粒，又再次被吸附，如此，在吸附柱上不斷地發生吸附、解吸、再吸附、再解吸……的過程。若兩種組分的理化性質存在著微小的差異，則在吸附劑表面的吸附能力也存在著微小的差異，經過反復多次的重復，使微小的差異積累起來就變成了大的差異，其結果就使吸附能力弱的三、色譜儀檢定的方法1、液相色譜儀實驗室液相色譜儀是由輸液系統、進樣器、色譜柱、檢測器和數據記錄處理裝置等幾部分組成的分析儀器。圖3是典型的液相色譜儀組成方框圖。它利用樣品中各組分在色譜柱中固定相和流動相間分配系數或吸附系數的差異，將各組分分離后進行檢測，并根據各組分的保留時間和響應值進行定性、定量分析。主要檢定項目：泵流量設定值誤差SS、流量穩定性誤差SR檢定輸液系統，<5%<3%定性、定量重復性<1.5%(3%)XI分別為保留時間和峰面積最小檢測濃度(CL=2*HN*C/H)、基線噪聲、基線漂移關于最小檢測濃度的檢定，規程規定“在靜態條件下，用注射器注入標準物質”然后用最小檢測限公式計算，得出結論(所謂靜態條件，即在不開泵的情況下，把樣品直接注入樣品池)。但由于近年來液相色譜儀結構設計有了較大的改變，尤其是計算機工作站的引入，使它的超作方式更為簡化。因而，原來規程所規定的檢測方法已不在適用。對于它的檢定應在動態條件下(即正常的開機進樣情況)，注入20ML標準物質，然后用最小檢測限公式進行計算。若儀器的進樣筏小于20ML應把測得的峰高換算成20ML時的峰高(20ML/進樣筏容量*所測峰高)。以上測量方法與即將出版的液相色譜儀新檢定規程上的方法是相同的。至于基線噪聲和基線漂移按照規程所規定的條件對儀器進行設定后，使儀器空走半小時即可在色譜圖中讀出。單位AU是一個紫外吸收的單位，一般它與單位MV是相對應的，如果儀器色譜圖上顯示的單位是MV,可以通過查找儀器說明書找到換算關系。檢定原理：依據JJG705-90《實驗室液相色譜儀計量檢定規程》。檢定周期：兩年2、氣相色譜儀氣相色譜儀是根據試樣中各組分在氣固或氣液兩相間的吸附或分配系數的不同隨載氣移動而進行分離的儀器。分離后的組分按保留時間的先后順序進入檢測器，并自動記錄檢測信號，依據組分的保留時間和響應值進行定性、定量分析。氣相色