·質(zhì)，是進(jìn)展微生物培育的物質(zhì)根底。·培育基依據(jù)物理性質(zhì)可分為和固體培育基。在液體培育基中參加凝固劑瓊脂〔是從紅藻中提取的一種多糖，在配制培育基中用作凝固劑〕后，制成瓊脂固體培育基。微生物在固體培育基外表生長，可以形成肉眼可見的菌液體培育基固體培育基半固體培育基則常用于觀看微生物的運(yùn)動及菌種保藏等?！ひ罁?jù)成分培育基可分為人工合成培育基和自然培育基。合成培育基是用成分自然培育基是用化學(xué)成分不明的自然物質(zhì)配制而成，常用于實(shí)際工業(yè)生產(chǎn)。·依據(jù)培育基的用途，可將培育基分為選擇培育基和鑒定培育基。選擇培育基是指在培育基中參加某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物生長，促進(jìn)所需要的微生物的生長。鑒別培育基是依據(jù)微生物的特點(diǎn)，在培育基中參加某種指示劑或化學(xué)藥品配制而成的，用以鑒別不同類別的微生物?！に疅o機(jī)鹽、碳源氮源、生長因子等?！O、NaHCO等無機(jī)碳源；糖類、2 3單質(zhì)碳不能作為碳源?！、NH、NO-、NH+〔無機(jī)氮源〕2 3 3 42023－9202320239蛋白質(zhì)、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨〔有機(jī)氮源〕只有固氮微生物才能利N。2·pH、特別養(yǎng)分物質(zhì)以及氧氣的要求。例如，培育乳維生素，培育霉菌pH調(diào)至酸性，培育細(xì)菌是需要將pH調(diào)至中性或微堿性，培育厭氧型微生物是則需要供給無氧的條件·無菌技術(shù)·獲得純潔培育物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵，要留意以下幾個方面：①對試驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)展清潔和消毒。②將用于微生物培育的器皿、接種用具和培育基等器具進(jìn)展滅菌。③為避開四周環(huán)境中微生物的污染，試驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰四周進(jìn)展。④試驗(yàn)操作時應(yīng)避開已經(jīng)滅菌處理的材料用具與四周的物品相接觸。無菌技術(shù)除了用來防止試驗(yàn)室的培育物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？答：無菌技術(shù)還能有效避開操作者自身被微生物感染?！は九c滅菌的區(qū)分消毒指使用較為溫存的物理或化學(xué)方法僅殺死物體外表或內(nèi)部一局部對人體有害的微生物〔不包括芽孢和孢子〕煮沸消毒法，巴氏消毒法〔對于一些不耐高溫的液體〕還有化學(xué)藥劑〔如酒精、氯氣、石炭酸等〕消毒、紫外線消毒。滅菌則是指使用猛烈的理化因素殺死物體內(nèi)外全部的微生物，包括芽孢和孢子。滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。滅菌方法：①接種環(huán)、接種針、試管口等使用灼燒滅菌法；比較理化因素的作消滅微生物的數(shù)芽孢和孢子能否項(xiàng)用強(qiáng)度量被消滅消毒較為溫存局部生活狀態(tài)的微生物不能滅菌猛烈全部微生物能制作牛肉膏蛋白胨固體培育基方法步驟：計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。倒平板操作的步驟：①將滅過菌的培育皿放在火焰旁的桌面上，右手拿裝有培育基的錐形瓶，左手拔出棉塞。②右手拿錐形瓶，將瓶口快速通過火焰。③用左手的拇指和食指將培育皿翻開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培育基〔10～20mL〕倒入培育皿，左手馬上蓋上培育皿的皿蓋。5～10min。然后，將平板倒過來放置，使培育皿蓋在下、皿底在上。·倒平板操作的爭辯50℃左右時，才能用來倒平板。你用什么方法來估量培育基的溫度？提示：可以用手觸摸盛有培育基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進(jìn)展倒平板了。為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培育基。平板冷凝后，為什么要將平板倒置？答：平板冷凝后，皿蓋上會分散水珠，凝固后的培育基外表的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培育基外表的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培育基，造成污染。在倒平板的過程中，假設(shè)不留神將培育基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培育微生物嗎？為什么？答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培育基上滋生，因此最好不要用這個平板培育微生物。純化大腸桿菌微生物接種的方法最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法。平板劃線法是通過接種環(huán)在瓊脂固體培育基外表連續(xù)劃線的操作。將聚攏的菌種逐步稀釋分散到培育基的外表。在數(shù)次劃線后培育，可以分別到由一個細(xì)胞生殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體，這就是菌落。稀釋涂布平板法是將菌液進(jìn)展一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分稀釋操作和涂布平板操作兩步。用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種的目的是：使聚攏在一起的微生物分散成單個細(xì)胞，從而能在培育基外表形成單個的菌落，以便于純化菌種。平板劃線法操作步驟：①將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅。②在火焰旁冷卻接種環(huán)，并翻開棉塞。③將試管口通過火焰。④將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中蘸取一環(huán)菌液。接種環(huán)快速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。留意不要劃破培育皿。⑦灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的末端開頭往其次區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。留意不要將最終一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連。⑧將平板倒置放入培育箱中培育?！て桨鍎澗€操作的爭辯為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作完畢時，仍舊需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避開接種環(huán)上可能存在的微生物污染培育物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線完畢后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目漸漸削減，以便得到菌落。劃線完畢后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避開細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)展劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。在作其次次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開頭劃線？答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開頭，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步削減，最終能得到由單個細(xì)菌生殖而來的菌落。涂布平板操作的步驟：①將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中。②取少量菌液，滴加到培育基外表。③將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻8～10s。④用涂布器將菌液均勻地涂布在培育基外表。涂布平板操作的爭辯涂布平板的全部操作都應(yīng)在火焰四周進(jìn)展。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操2步應(yīng)如何進(jìn)展無菌操作？提示：應(yīng)從操作的各個細(xì)節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培育皿的距離要適宜、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰四周；等等。菌種的保存對于頻繁使用的菌種，可以承受臨時保藏的方法。①臨時保藏方法將菌種接種到試管的固體斜面培育基上，在適宜的溫度下培育。當(dāng)菌落長成后，4℃3～6個月，都要重將菌種從舊的培育基上轉(zhuǎn)移到穎的培育基上。②缺點(diǎn)：這種方法保存的時間不長，菌種簡潔被污染或產(chǎn)生變異。對于需要長期保存的菌種，可以承受甘油管藏的方法。3mL1mL1mL培育的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在－20℃的冷凍箱中保存。疑難解答生物的養(yǎng)分養(yǎng)分是指生物攝取、利用養(yǎng)分物質(zhì)的過程。養(yǎng)分物質(zhì)是指維持機(jī)體生命活動，保證發(fā)育、生殖所需的外源物質(zhì)。人及動物的養(yǎng)分物質(zhì)：水、無機(jī)鹽、糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、維生素六類。植物的養(yǎng)分物質(zhì)：礦質(zhì)元素、水、二氧化碳等三類。微生物的養(yǎng)分物質(zhì)：水、無機(jī)鹽、碳源、氮源及特別養(yǎng)分物質(zhì)五類。確定培育基制作是否合格的方法1～2天，無菌落生長，說明培育基的制備是成功的，否則需要重制備。尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥，尿素并不能直接被農(nóng)作物吸取。只有當(dāng)土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氨之后，才能被植物利用。土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是由于他們能合成脲酶。尿素最初是從人的尿液中覺察的篩選菌株試驗(yàn)室中微生物的篩選應(yīng)用的原理人為供給有利于目的菌株生長的條件〔包括養(yǎng)分、溫度、pH等〕，同時抑制或阻擋其他微生物生長。選擇性培育基在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻擋其他種類微生物生長的培育基，稱作選擇培育基。配制選擇培育基的依據(jù)依據(jù)選擇培育的菌種的生理代謝特點(diǎn)參加某種物質(zhì)以到達(dá)選擇的目的。例如，培育基中不參加有機(jī)物可以選擇培育自養(yǎng)微生物；培育基中不參加氮元素，可以選擇培育能固氮的微生物；參加高濃度的食鹽可選擇培育金黃色葡萄球菌等。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目測定微生物數(shù)量的常用方法有稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計(jì)數(shù)。稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目的原理當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培育基外表生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推想出樣品中大約含有多少活細(xì)菌。為3～530～300的平板進(jìn)展計(jì)數(shù)，并取平均值。統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，因此，統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)來表示。止菌落集中，影響計(jì)數(shù)，可在培育基中參加TTC3.本法僅限于形成菌落的微生物設(shè)置比照設(shè)置比照的主要目的是排解試驗(yàn)組中非測試因素對試驗(yàn)結(jié)果的影響，提高試驗(yàn)結(jié)果的可信度。比照試驗(yàn)是指除了被測試的條件以外，其他條件都一樣的試驗(yàn)，其作用是比照試驗(yàn)組，排解任何其他可能緣由的干擾，證明確實(shí)是所測試的條件引起相應(yīng)的結(jié)果。試驗(yàn)設(shè)計(jì)試驗(yàn)設(shè)計(jì)包括試驗(yàn)方案，所需儀器、材料、用具和藥品，具體的實(shí)施步驟以準(zhǔn)時間安排等的綜合考慮和安排。土壤取樣：同其他生物環(huán)境相比，土壤中的微生物，數(shù)量最大，種類最多。在pH≈7的土壤3～8cm的土壤層取樣。適于計(jì)數(shù)的平板。104105106測定放線菌的數(shù)量，一般選用適于計(jì)數(shù)的平板。104105106測定放線菌的數(shù)量，一般選用103 104105測定真菌的數(shù)量，一般選用102 103104微生物的培育與觀看不同種類的微生物，往往需要不同的培育溫度和培育時間。細(xì)菌30~37℃1~2天25~28℃5~725~28℃3~4天每隔24小時統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果，這樣可〔一樣的培育基、唯獨(dú)及培育時間〕，同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征。外形、大小、隆起程度、顏色。疑難解答〔1〕如何從平板上的菌落數(shù)推想出每克樣品中的菌落數(shù)？統(tǒng)計(jì)某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計(jì)3個平板，計(jì)算出平板菌落數(shù)的平均值落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積〔ml〕，M代表稀釋倍數(shù)纖維素，一種由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，是地球上含量最豐富的多糖類物質(zhì)。纖維素與纖維素酶纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即C酶、C酶和葡萄1 X糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。纖維素最終被水解成葡萄糖，為微生物的生長供給養(yǎng)分。纖維素分解菌的篩選篩選方法：剛果紅染色法。能夠通過顏色反響直接對微生物進(jìn)展篩選。剛果紅染色法篩選纖維素分解菌的原理剛果紅是一種染料，它可以與像纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物，但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反響。當(dāng)我們在含有纖維素的培育基中參加剛果紅時，剛果紅能與培育基中的纖維素形成紅色復(fù)合物。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅－纖維素的復(fù)合物就無法形成，培育基中會消滅以纖維素分解菌為中心的透亮圈。這樣，我們就可以通過是否產(chǎn)生透亮圈來篩選纖維素分解菌。分別分解纖維素的微生物的試驗(yàn)流程土壤取樣→〔〕→梯度稀釋→將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培育基上→選擇產(chǎn)生透亮圈的菌落土壤采集選擇富含纖維素的環(huán)境。剛果紅染色法分別纖維素分解菌的步驟 倒平板操作、制備菌懸液、涂布平板剛果紅染色法種類一種是先培育微生物，再參加剛果紅進(jìn)展顏色反響，另一種是在倒平板時就參加剛果紅。課題延長對分解纖維素的微生物進(jìn)展了初步的篩選后，只是分別純化的第一步，為確定得到的是纖維素分解菌，還需要進(jìn)展發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的試驗(yàn)，纖維素酶的發(fā)酵方法有液體發(fā)酵和固體發(fā)酵兩種。纖維素酶的測定方法，一般是對纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖進(jìn)展定量的測定。疑難解答為什么要在富含纖維素的環(huán)境中查找纖維素分解菌？由于生物與環(huán)境的相互依存關(guān)系，在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌的含量相對提高，因此從這種土樣中獲得目的微生物的幾率要高于一般環(huán)境。將濾紙埋在土壤中有什么作用？你認(rèn)為濾紙應(yīng)當(dāng)埋進(jìn)土壤多深？將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對聚攏，實(shí)際上是人工設(shè)置纖維素分解菌10cm左右腐殖土壤中。兩種剛果紅染色法的比較其優(yōu)點(diǎn)是這樣顯示出的顏色反響根本上是纖維素分解菌的作用。方法二的優(yōu)點(diǎn)是操作簡便，不存在菌落混雜問題，缺點(diǎn)是由