實驗大腸桿菌的培養和分離第一頁，共三十八頁，2022年，8月28日什么是微生物？乳酸桿菌黑曲霉微生物：結構簡單、形體微小的單細胞、多細胞或沒有細胞結構的低等生物。第二頁，共三十八頁，2022年，8月28日什么是培養基？三角瓶培養皿試管液體培養基：擴大培養，工業生產。固體培養基：分離純化，鑒定菌種，計數，保藏。凝固劑：瓊脂第三頁，共三十八頁，2022年，8月28日培養基的配制營養成分功能和來源碳源氮源生長因子水無機鹽提供碳元素：主要是糖類提供氮元素：蛋白胨、牛肉膏、尿素維生素、氨基酸和含氮堿基H2O，良好的溶劑NaCl：維持一定的滲透壓第四頁，共三十八頁，2022年，8月28日LB培養基的配制LB固體培養基：蛋白胨0.5g，酵母提取物0.25g，氯化鈉0.5g，加水50mL，瓊脂1g。調節pH至7.6。封口膜第五頁，共三十八頁，2022年，8月28日菌落：單細菌的克隆菌落：在固體培養基上，由單個細菌繁殖而來的一個肉眼可見的具有特定形狀的子細胞群體。霉菌大腸桿菌第六頁，共三十八頁，2022年，8月28日菌落的作用：鑒定菌種的重要依據菌落特征：菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色等。第七頁，共三十八頁，2022年，8月28日大腸桿菌大腸桿菌：革蘭氏陰性、兼性厭氧的腸道桿菌。第八頁，共三十八頁，2022年，8月28日怎樣無菌操作？高壓蒸汽滅菌：培養皿、試管、三角瓶、槍頭、玻璃三角刮刀、接種環、鑷子。在121℃下滅菌15min。高壓蒸汽滅菌鍋第九頁，共三十八頁，2022年，8月28日培養皿三角瓶玻璃三角刮刀接種環微量移液器槍頭第十頁，共三十八頁，2022年，8月28日棉花塞、封口膜、牛皮紙或舊報紙、橡皮筋不能用脫脂棉：易吸水，容易引起污染。第十一頁，共三十八頁，2022年，8月28日酒精燈和酒精棉球滅菌：殺死所有微生物。消毒：殺死部分微生物（不包括芽孢和孢子）。第十二頁，共三十八頁，2022年，8月28日超凈工作臺①打開紫外燈和過濾風，滅菌30min。②點燃酒精燈→酒精棉擦拭桌面→酒精棉球擦手。酒精燈火焰附近旁進行灼燒滅菌防止雜菌污染第十三頁，共三十八頁，2022年，8月28日用細菌過濾器除菌：尿素加熱會分解，用G6玻璃砂漏斗過濾。第十四頁，共三十八頁，2022年，8月28日什么是倒平板？將滅菌后的固體培養基倒入已滅菌的培養皿中，冷卻凝固后制成的培養基。第十五頁，共三十八頁，2022年，8月28日Step1：培養基的配制和滅菌①將50mLLB液體培養基、50mLLB固體培養基和培養皿進行高壓蒸汽滅菌。無菌水培養皿用牛皮紙包扎第十六頁，共三十八頁，2022年，8月28日Step2：倒平板②在酒精燈火焰旁將三角瓶中的固體培養基（冷卻到60℃）倒入滅菌的培養皿中，置于水平放置上，并輕輕晃動，待凝固后形成平面。超凈臺第十七頁，共三十八頁，2022年，8月28日Step3：接種后擴大培養③將斜面上培養的大腸桿菌菌種接種到滅菌后的液體培養基中，使其在37℃搖床培養12h

。恒溫搖床第十八頁，共三十八頁，2022年，8月28日Step4：平板劃線分離④用接種環在培養大腸桿菌的三角瓶中蘸取菌液一次，在固體培養基的平板上連續劃線。將培養皿倒置，放在37℃恒溫箱中培養12～24h。第十九頁，共三十八頁，2022年，8月28日怎樣在平板上劃線？1次2次3次4次連續劃線法分區劃線法第二十頁，共三十八頁，2022年，8月28日原因：隨著劃線次數的增加，菌數越來越少，最終在劃線的末端出現由一個細菌繁殖而來的單個菌落。為什么通過劃線分離可得到單菌落？第二十一頁，共三十八頁，2022年，8月28日原因：既可以使培養基表面的水分更好地揮發，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養基中造成污染。恒溫培養時培養皿倒置培養皿倒置皿蓋皿底恒溫培養箱第二十二頁，共三十八頁，2022年，8月28日Step5：菌種的斜面保存⑤將接種環將單菌落取出，用劃線法接種在斜面培養基上，37℃培養24h后，置于4℃冰箱中保存。斜面培養基第二十三頁，共三十八頁，2022年，8月28日試管斜面培養基的制作方法：將未凝固的含有瓊脂的培養基加入試管中，滅菌后將試管斜放，令其冷卻，固體培養基即成為斜面。第二十四頁，共三十八頁，2022年，8月28日平板劃線分離法①灼燒接種環外焰先灼燒后冷卻：以免接種環溫度太高，殺死菌種。第二十五頁，共三十八頁，2022年，8月28日②接種環冷卻后，蘸取帶菌培養物第二十六頁，共三十八頁，2022年，8月28日③在近火焰處，讓帶菌接種環在固體培養

基上劃線第二十七頁，共三十八頁，2022年，8月28日④恒溫培養箱中倒置培養分區劃線法每次劃線之前都要灼燒接種環?？偸菑纳弦淮蝿澗€的末端開始劃線。第二十八頁，共三十八頁，2022年，8月28日稀釋涂布分離法①用無菌吸管吸取1mL細菌培養液加入另一個盛有9mL無菌水的試管中，混合均勻，以此制成10-1倍的稀釋液。①梯度稀釋菌液：10-5~10-7倍第二十九頁，共三十八頁，2022年，8月28日②滴加菌液②用無菌吸管取0.1mL稀釋度不同的菌液，加在培養皿的固體培養基上。第三十頁，共三十八頁，2022年，8月28日③用玻璃刮刀涂布玻璃涂棒第三十一頁，共三十八頁，2022年，8月28日③將玻璃刮刀放在酒精燈火焰上灼燒，待玻璃刮刀冷卻后，在酒精燈旁打開培養皿，將菌液涂布到整個培養基表面。第三十二頁，共三十八頁，2022年，8月28日④將培養皿倒置，在37℃恒溫箱中培養24~48h。④恒溫培養箱中培養恒溫培養箱第三十三頁，共三十八頁，2022年，8月28日結果：以每個培養皿中有20個以內的單菌落最為合適。10-110-210-310-410-5第三十四頁，共三十八頁，2022年，8月28日第三十五頁，共三十八頁，2022年，8月28日倒平板平板劃線分離練一練，識一識稀釋涂布分離接種環玻璃刮刀第三十六頁，共三十八頁，2022年，8月28日例題：要獲得遺傳特性單一的大腸桿菌菌種，一般必須對原有的大腸桿菌菌種進行擴大培養，并利用純化技術得到單菌落的菌種。請回答下列有關大腸桿菌的培養和分離實驗的相關問題：（1）對買回來的大腸桿菌菌種進行擴大培養，一般用LB培養基，在培養基中為微生物提供碳源、氮源和能源的物質主要是

，為調節滲透壓，要加入一定量的

。為進行大腸桿菌的分離，還要加入

配制成固體培養基，并進行倒平板的操作。蛋白胨和酵母提取物氯化鈉瓊脂第三十七頁，共三十八頁，2022年，8月28日（2）獲得純凈微生物培養物的關鍵是

，為此，必須對培養器皿、接種用具和培養基進行嚴格滅菌。培養器皿和培養基一般采用

法滅菌，接種環采用灼燒法滅菌。同時在接種或倒平板操作時，除了在超凈臺上進行操作并對實驗者的衣著、手和實驗空間進行嚴格清潔和消毒外，還必須

以防止空氣中的雜菌污染。（3）大腸桿菌菌種的擴大培養一般采用液體培養基，接種后將培養基置于37℃搖床振蕩條件下培養12h。菌種的分離一般在固體培養基上采用

法，并