第十四章維生素類藥物的分析概述維生素：是維持人體正常代謝機能所必需的微量營養物資。人體不能合成維生素。VitA、D2、D3、E、K1等

脂溶性水溶性VitB族(B1、B2、B6、B12)VitC、葉酸、煙酸、泛酸等。分類按溶解度分本章僅對維生素(A、B1、C、E)進行學習討論-H維生素A醇-COCH3維生素A醋酸酯-COC15H31維生素A棕櫚酸酯R:第一節維生素A為一個具有共軛多烯醇側鏈的環己烯（一）結構與性質一、

具有UV吸收存在多種立體異構化合物天然維生素A主要是反式易發生脫氫生成去氫維生素A2

易脫水生成去水維生素A3

易聚合反應生成無活性維生素A△或有金屬離子存在時更易氧化共軛多烯側鏈易被氧化（二）環氧化物VitA醛VitA酸（三）、與三氯化銻發生呈色反應（四）、溶解性不溶于水易溶于有機溶劑和植物油等CHCl3三氯化銻反應（一）條件無水無醇CHCl3鑒別試驗二、藍色紫紅300-400nm掃描λmax為326nm一個吸收峰UV法（二）300-400nm掃描384、367、389nm三個吸收峰去水VitA（VitA3）↓VitABP對照品法顯色劑三氯化銻TLC法（三）三、含量測定

目前各國藥典均采用紫外分光光度法替代三氯化銻比色法（一）、紫外分光光度法利用維生素A醇和其醋酸酯分子中具多烯共軛體系結構，在325～328nm處有選擇性吸收峰，故可進行含量測定。立體異構體氧化產物及光照產物合成中間體去氫維生素A（VitA2）去水維生素A（VitA3）均對測定有干擾，故采用三點校正法1：測定原理，三個波長的吸收度，公式計算校正吸收度，再計算含量。故得名。該法的依據：①雜質的吸收在310~340nm波長范圍內呈一條直線，且隨波長的增大吸收度減?。虎谖镔|對光的吸收具有加和性。2波長的選擇：最大吸收波長，及兩側各選一波長①第一法（等波長差法）1=328nm，

2

=316nm，3=340nm，△=12nmVitA的max（328nm）

Ch.P用于測定維生素A醋酸酯

第二法（等吸收比法）分別在1的兩側各選一點

A2=A3=6/7A1

1=325nm，2=310nm，3=334nm

Ch.P用于測定維生素A醇

3.雜質的吸收對V.A有影響的雜質主要有以下幾種：(1)V.A2和V.A3(2)維生素A的氧化產物(3)維生素A在光照下產生的無活性的聚合物(4)維生素A的異構體等。以上這些雜質在310nm-340nm的波長范圍內有吸收，干擾維生素A的測定。4.測定方法（1）第一法（直接測定法，適用于純度高的維生素A醋酸酯環己烷溶解）1）方法在300、316、328、340、360nm測吸收度2）計算a.吸光系數E1%1cm

b.求效價（IU/g）：效價指每g供試品所含維生素的A的國際單位數。IU/g=c.求維生素A醋酸酯占標示量的百分含量

3）換算因子：4）A值的選擇：a.計算吸收度比值：與中國藥典的吸收度比值相比較，判斷每個差值的絕對值是否超過0.02。b.判斷法最大吸收波長在326-329nm之間，且5個波長下的絕對值差值均不超過0.02時，可直接用328nm波長處的測得的吸收度值求得吸收系數。

最大吸收波長在326-329nm之間，計算5個波長下的絕對差值，如果有一個或幾個超過0.02，應按以下的方法進行判斷：若（A328校正-A328）*100%/A328

所得的數值在±3.0%，則仍不用校正公式計算吸收度?？芍苯佑肁328代入E=A/C.L若（A328校正-A328）*100%/A328

所得的數值在-15.0%到-3.0%，則應用A328校正代入E=A/C.L若（A328校正-A328）*100%/A328

所得的數值在小于-15%或大于+3%，則不能用本法測定，應使用第二法。

如果最大吸收波長不在326-329nm之間，也不能用本法測定。采用第二法第一法的校正公式為：

A328校正=3.52（2A328–A316-A340）（2）第二法（皂化法，適用于維生素A醇）1）方法精密稱取一定量的供試品，加KOH乙醇溶液后煮沸回流，得到的皂化液再經過提取、洗滌、濾過、濃縮和干燥等處理，最后用異丙醇溶解殘渣并稀釋成每1ml中含維生素A為9-15個國際單位數的溶液，在300、310、325、334nm波長處測定吸收度，并確定最大吸收波長（應為325nm）。2）計算同第一法。見書p250-2513）A值的選擇如果最大吸收波長在323-327nm之間，且A300/A325比值≤0.73，按下法判斷：a.若（A325校正-A325）*100%/A325

所得的數值的絕對值在3%，可直接用A325

代入E=A/C.Lb.若（A325校正-A325）*100%/A325

所得的數值的絕對值超過3%，則用應用A325校正代入E=A/C.L如果最大吸收波長不在323-327nm之間，或A300/A325比值>0.73，表示供試品中雜質含量太高，應采用色譜法將未皂化部分純化再進行測定。

第二法的校正公式：A325校正=6.815A325–2.555A310-4.260A3346.討論1）.吸收度校正方法：維生素A醋酸酯：直線方程法（代數法）維生素A醇：相似三角形法（幾何法或6/7定位法）2）.在應用三點校正法時，除其中一點是在最大

吸收波長處測定外，其余兩點均在最大吸收峰的兩側進行測定。如果儀器波長精度不準確時，會產生較大誤差。因此，在測定之前務必要校正波長，并可用全反式維生素A進行測定，比較測定結果和比值是否與對照品相符合，以進一步核對波長是否準確。測定的樣品不得少于兩份。7.應用示例維生素A膠丸、維生素AD膠丸和維生素AD滴劑等均可采用本法測定。第一法第二法測定對象維生素A醋酸酯維生素A醇方法直接取樣，測定皂化提取，測定溶劑環己烷異丙醇max

328nm325nm測定波長5個4個換算因數19001830第一法與第二法的區別三氯化銻比色法（二）優點簡便快速λmax618nm～620nm標準曲線法缺點呈色不穩定（5~10s內）水分干擾與標準曲線溫差≤1℃專屬性差三氯化銻有腐蝕性（二）藍色+3SbClVitA（三）高效液相色譜法RP-HPLC同時測定人血清中VitA和VitE的含量1、儀器與分析條件：HPLC-UV、C18(300×3.9mm）、甲醇－水（96：4）、流速：1.2ml/min、檢測波長：0～8min(330nm),8min后(292nm）內標：維生素A醋酸酯維生素B1廣泛分布于米糠、麥麩和酵母中，具有維持糖代謝及神經傳導與消化的正常功能。主要用于治療維生素B1缺乏癥、多發性神經炎及胃腸疾病。第二節維生素B1氨基嘧啶環－CH2－噻唑環(季銨堿)HClCl-嘧啶環的氨基、噻唑環的季銨

為兩個堿性集團

（一）溶解性1、易溶于水，乙醇微溶，乙醚不溶2、水溶液呈酸性（二）UV共軛雙鍵λmax=246nm結構與性質一、（三）硫色素反應與生物堿沉淀劑（碘化汞鉀等）↓（四）生物堿沉淀反應嘧啶環——噻唑環——（五）氯化物特性本品為鹽酸鹽，呈氯化物的反應。ChP鑒別試驗二、（一）硫色素反應硫色素＋2HVitB1H+H+H+H+（二）沉淀反應（三）氯化物反應（五）紅外分光光度法（四）硫元素反應三、含量測定喹那啶紅－亞甲藍（紫紅→天藍）（一）非水溶液滴定法反應摩爾比為1：2UV法（二）片劑、注射劑=421（每片）相當于標示量的%=A=ECL規格g/片g/100mlgChPWEA%cmD10011××%100標示量平均片重××（三）硫色素熒光法原理1、熒光硫色素異丁醇鐵氰化鉀1VitBNaOH通過與對照品熒光強度的比較即可測得供試品含量2、實驗操作40ml具塞試管3支→對照品溶液5ml；其中2支加入氧化試劑3.0ml，再迅速加入異丁醇20ml，振搖。第三支試管中加入3.5mol/l的NaOH，同法操作為空白。另取三支試管加入對照品同法操作。各試管中加入無水乙醇2ml，分取異丁醇，進行熒光測定。3、結果計算特點4、（1）靈敏度高，線性范圍寬（2）代謝產物不干擾，適用于體液分析（3）該法適用于VitB1的制劑含量分析（4）可用BrCN為氧化劑，反應定量完全，適合于生物樣本分析第三節維生素CL－抗壞血酸具有烯二醇結構；具有內酯環；具2個手性碳原子具有旋光性1、易溶于水2、水溶液呈酸性結構與性質一、（一）溶解性烯二醇結構二酮基結構烯二醇結構（二）還原性有活性有活性無活性△糖類的顯色反應50℃結構與糖類相似（三）具糖的性質C3－OH的pKa=4.17C2－OH的pKa=11.57酸性（四）一元酸L(+)－抗壞血酸活性最強手性C（C4、C5）（五）光學活性**與堿反應（六）水解性弱堿中生成單鈉鹽，強堿中水解七紫外吸收特性與氧化劑的反應（一）鑒別試驗二、去氫抗壞血酸]O[VitC1、與AgNO3反應2、與2，6-二氯靛酚反應氧化型玫瑰紅色還原型藍色OHˉ（玫瑰色）（無色）3.其他氧化劑的反應：亞甲藍或高錳酸鉀試劑褪色

堿性酒石酸銅磚紅色沉淀

磷鉬酸鉬藍

糖類的反應（二）或鹽酸50℃吡咯USP（藍色）(糠醛)戊糖50℃(吡咯)UV（三）BP0.01mol/LHCl三、雜質檢查1.溶液的澄清度與顏色：有色雜質分光光度法

2.鐵、銅離子：原子吸收分光光度法指示劑淀粉指示液原理1、碘量法（一）含量測定四、H+取本品約0.2g，精密稱定，加新沸過的冷水100ml與稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液顯藍色，在30秒內不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相當于8.806mg的C6H8O6方法2、（1）酸性環境.HAc

（2）新沸冷H2O減慢VitC被O2氧化速度討論3、（3）立即滴定趕走水中O2減少O2的干擾（4）附加劑干擾的排除片劑——滑石粉——過濾注射劑——抗氧劑——丙酮甲醛Na2SO3NaHSO3

Na2S2O3Na2S2O52，6-二氯靛酚鈉滴定法法（二）USPJP原理1、酚亞胺二氯靛酚，-62VitC自身指示終點法方法2、（2）快速滴定2min內

（1）酸性環境HPO3-HAc

穩定VitC防止其他還原性物質干擾（3）剩余比色測定

（定量過量）（測剩余染料）討論3、（4）缺點

需經常標定貯存≤一周不穩定干擾多

氧化力較強三、高效液相色譜法人血漿中VitC濃度的HPLC法測定1、色譜條件2、標準溶液的制備3、血漿樣品的處理：酸性溶液沉淀蛋白法4、方法學考察5、測定苯并－二氫吡喃醇VitE為二氫吡喃醇衍生物第五節維生素E

名稱R1R2相對活性α-生育酚β-生育酚γ-生育酚δ-生育酚CH3CH3HHCH3HCH3H1.00.50.20.1***VE為α-生育酚及其各種酯類dl－α－生育酚醋酸酯結構與性質一、苯環+二氫吡喃環+飽和烴鏈1、溶解性易溶于乙醇、丙酮、乙醚等，水中不溶2、氧化性對氧十分敏感遇光、空氣可被氧化為生育醌和生育酚二聚體3、UV－284nm吸收系數為41.0-45.04、乙?；姆恿u基易水解]O[醌型化合物△生育酚-+orOHHVitE雜質，需檢查]O[生育紅（一）硝酸反應橙紅色鑒別二、75℃水解HNO3VitE生育酚（橙紅色）生育紅生育酚HNO3強氧化劑三氯化鐵-聯吡啶反應（二）生育酚對-生育醌[O]弱氧化劑血紅色

=41.0～45.5λmax=284nmλmin=254nm0.01%無水乙醇中UV法（三）薄層板硅膠G展開劑環己烷-乙醚（4：1）顯色劑硫酸（105℃5′）

VitERf

=0.7-生育酚Rf

=0.5-生育醌Rf

=0.9TLC法（四）2.游離生育酚

雜質檢查

三、原理:利用游離生育酚的還原性，可被硫酸鈰定量氧化根據消耗硫酸鈰滴定液的體積來控制游離生育酚的限量。酸度

以NaOH滴定液（0.1mol/L≤0.5ml）體積控制。（M生育酚=430.8）例

取本品0.10g，加無水乙醇5ml溶解后，加二苯胺試液1滴，用硫酸鈰液（0.01mol/L）滴定，消耗硫酸鈰液（0.01mol/L）不得過1.0ml?！?.15％限量四、含量測定GC法（法定方法）（一）GC特點1、選擇性好靈敏度高速度快分離效能好揮發性低、不穩定、極性強→衍生化易受樣品蒸氣壓限制載氣→N2固定液→硅酮（OV-17）擔體→硅藻土或高分子多孔小球柱溫→265℃檢測器→氫火焰離子化檢測器(FID)內標→正三十二烷n≥500R≥2VitE測定的色譜條件2、內標法加校正因子內標法供試液（樣品+內標）內標物對照液（對照+內標）是樣品中不存在的物質與被測組分峰靠近能與各組分完全分離與被測組分的量接近WWKK%VitE%10012=稀釋倍數稀釋倍數樣對實際工作中的計算方法××××

公元前3500年-古埃及人發現能防治夜盲癥的物質，也就是后來的維A。

1600年-醫生鼓勵以多吃動物肝臟來治夜盲癥。

1747年-蘇格蘭醫生林德發現檸檬能治壞血病，也就是后來的維C。

1831年-胡蘿卜素被發現。

1905年-甲狀腺腫大被碘治愈。

1911年-波蘭化學家豐克為維生素命名。

1915年-科學家認為糙皮病是由于缺乏某種維生素而造成的1916年-維生素B被分離出來。

1917年-英國醫生發現魚肝油可治愈佝僂病，隨后斷定這種病是缺乏維D引起的。

維生素發展史1920年-發現人體可將胡蘿卜轉化為維生素A。

1922年-維E被發現。

1928年-科學家發現維B至少有兩種類型。

1933年-維E首次用于治療。

1948年-大劑量維C用于治療炎癥。

1949年-維B3與維C用于治療精神分裂癥。

1954年-自由基與人體老化的關系被揭開。

1957年-Q10多酶被發現。

1969年-體內超級抗氧化酶被發現。

1970年-維C被用于治療感冒。

1993年-哈佛大學發表維生素E與心臟病關系的研究結果。返回練習與思考[A型題]1.維生素B1的鑒別方法是A.三氯化鐵反應B.硫色素反應C.柯柏反應D.與堿性酒石酸銅試液反應E.雙縮脲反應2.維生素E《中國藥典》規定的含量測定方法為A.非水溶液滴定法B.旋光法C.HPLC法D.紫外分光法E.GC法[B型題]A。亞硝基鐵氰化鈉反應B.硫色素反應C.硝酸反應D.三氯化銻反應E.硝酸銀試液的反應1.維生素C2.維生素E3.維生素B14.維生素AECBD[X型題]1.用碘量法測定的藥物有A.醋酸地塞米松B.丙酸睪酮C.維生素CD.硫酸阿托品E.維生素C注射液返回2.可用紫外分光光度法測定含量的藥物有A.維生素A丸劑B.丙酸睪酮C.維生素AD.硫酸阿托品E.維生素B1片簡答題簡述碘量法測維生素C含量的原理及實驗注意事項。第四節維生素D維生素D2－骨化醇一、結構與性質維生素D3－膽骨化醇開環的甾體：具有甾類化合物的顯色反應，可用于鑒別。手性碳原子：具有旋光性，可用于鑒別。

多烯：可進行紫外檢測。

性質：1、脂溶性2、不穩定性3、旋光性4、顯色反應5、紫外吸收特性二、鑒別試驗1.顯色反應醋酐-硫酸反應D2黃紅紫綠D3黃紅紫、藍綠綠三氯化銻反應橙紅色漸變粉紅三氯化鐵反應橙黃色二氯丙醇和乙酰氯反應綠色2.比旋度鑒別維生素D2維生素D3溶劑

濃度比旋度值