標準解讀

GB/T 17999.1-1999是一項關于SPF雞（無特定病原體雞）的紅細胞凝集抑制試驗的標準。該標準詳細規定了如何利用紅細胞凝集抑制現象來檢測SPF雞體內是否存在針對特定抗原的抗體，常用于傳染病的診斷和疫苗效果評估。以下是該標準的主要內容概述：

標準適用范圍

本標準適用于評估SPF雞血清中對特定抗原（如禽流感病毒、新城疫病毒等）的免疫反應，通過紅細胞凝集抑制（HI）試驗方法進行測定。

試驗材料

  • SPF雞紅細胞：需來源于無特定病原體的健康雞，經過適宜處理以保證試驗的敏感性和特異性。
  • 抗原：應為純化或標準化的抗原，如病毒抗原，確保試驗的一致性和可比性。
  • 血清樣本：從待測SPF雞中采集，處理后用于檢測抗體水平。
  • 生理鹽水、磷酸鹽緩沖液等試劑，用于配制溶液和洗滌。

試驗步驟

  1. 紅細胞懸液準備：按照規定濃度制備紅細胞懸液。
  2. 血清稀釋：將待測血清按一定梯度稀釋。
  3. 抗原添加：向血清稀釋液中加入已知量的抗原，并孵育使抗體與抗原結合。
  4. 紅細胞加入與孵育：將上述混合物與紅細胞懸液混合，孵育以觀察凝集現象。
  5. 觀察與記錄：根據紅細胞是否凝集來判斷抗體的存在及其效價。

結果判定

  • 凝集現象：如果血清中含有相應抗體，會抑制紅細胞與抗原的凝集，表現為不凝集或部分凝集。
  • 抗體滴度：通過血清的最高稀釋度仍能抑制凝集來確定抗體的滴度，即HI滴度。

試驗條件與質量控制

標準還強調了實驗操作的標準化，包括環境溫度、孵育時間、操作手法的一致性，以及設立陽性和陰性對照的重要性，以確保試驗結果的準確性和重復性。

記錄與報告

要求詳細記錄試驗過程、所用材料批號、試驗結果等，以便追溯和審核。報告中應包含所有必要的試驗細節及最終的HI滴度結果。


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  • 被代替
  • 已被新標準代替，建議下載現行標準GB/T 17999.2-2008
  • 1999-11-10 頒布
  • 2000-04-01 實施
?正版授權
GB/T 17999.1-1999SPF雞紅細胞凝集抑制試驗_第1頁
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GB/T 17999.1-1999SPF雞紅細胞凝集抑制試驗-免費下載試讀頁

文檔簡介

TCS.65.020.30B41中華人民共和國國家標準GB/T17999.1—1999SPF雞紅細胞凝集抑制試驗SPFchicken-Hemagglutinationinhibitiontest1999-11-10發布2000-04-01實施國家質量技術監督局發布

GB/T17999.1-1999本標準以我國建立的HI方法為基礎,參照美國SPAFAS公司的有關操作規程.規定了SPF雞紅細胞凝集抑制試驗SPF雞微生物學質量控制國家系列標準包括SPF雞微生物學監測總則和9種SPF雞微生物學檢測方法。本標準為《SPF雞紅細胞凝集抑制試驗》。SPF雞微生物學檢測方法還包括以下部分：GB/T17999.2—1999SPF雞血清中和試驗;GB/T17999.3—1999SPF雞血清平板凝集試驗;GB/T17999.4—1999SPF雞瓊脂擴散試驗；GB/T17999.5—1999SPF雞酶聯免疫吸附試驗;GB/T17999.6-1999SPF雞胚敏感試驗：GB/T17999.7—1999SPF雞雞白癇沙門氏菌檢驗;GB/T17999.8-1999SPF雞，試管凝集試驗；GB/T17999.9—1999SPF雞間接免疫熒光試驗本標準由中華人民共和國農業部、國家科學技術部提出本標準由農業部畜牧獸醫司歸口。本標準起草單位：農業部實驗動物研究中心、山東省農科院家禽研究所本標準主要起草人：陳德威、趙立紅、靳彥華、張秀美、李軍。

中華人民共和國國家標準GB/T17999.1-1999SPF雞紅細胞凝集抑制試驗SPFchicken--Hemagglutinationinhibitiontes11范圍本標準規定了紅細胞凝集抑制試驗所用試劑、材料,操作程序及結果判定等本標準適用于SPF雞感染以下病原微生物后的血凝抑制抗體監測：禽流感病毒（A型）AvianInfluenzaVirus(TypeA），傳染性支氣管炎病毒（InfectiousBronchitisVirus）新城疫病毒（NewcastleDiseaseVirus），禽腺病毒I群(減蛋綜合癥）（AvianAdenovirusGroupI），雞毒支原體（MycoplasmaGallisepticum）,滑液囊支原體(MycoplasmaSynoviae)。2原理許多病毒具有凝集動物紅細胞的能力，這種凝集紅細胞的能力能被特異性抗體所抑制.因此可用已知病毒檢測相應的血凝抑制性抗體3試劑和器材3.1試劑3.1.1血凝抗原3.1.2陰性、陽性血清。3.1.3被檢血清。3.1.4紅細胞、3.1.50.85%生理鹽水。3.1.6阿氏液3.2器材3.2.196孔微量血凝板(U型）3.2.2微量移液器(TD10L.～200L.)及吸頭3.2.3水浴鍋。3.2.4離心機與錐形刻度離心管。4操作程序4.1抗原血凝效價測定4.1.110%和0.5%雞紅細胞液的制備4.1.1.1采雞血:用注射器吸取阿氏液約1mL.取3日齡～10日齡SPF雞(最少兩只),從胸骨尖下方約1.3cm處將注射器針頭刺入心臟,吸取心血約2mL～4mL,與阿氏液輕輕混合，放入裝有10mL阿氏液的離心管中。4.1.1.2洗滌雞紅細胞：將離心管中的血液經1500r/min～1800r/min離心8min.棄上清液，沉淀物加入阿氏液，輕輕混合后,再經

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