某免疫雞群的新城疫抗體效價監(jiān)測報告_0某免疫雞群的新城疫抗體效價監(jiān)測報告核心提示:新城疫是由新城疫病毒引起的雞和火雞的一種急性、高度接觸性和毀滅性的傳染病。新城疫流行于世界各國，在150多個國家和地區(qū)都有此病發(fā)生。隨著高度集約化養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展，新城疫的防治也備受關(guān)注。近年來，新城疫的新城疫是由新城疫病毒引起的雞和火雞的一種急性、高度接觸性和毀滅性的傳染病。新城疫流行于世界各國，在150多個國家和地區(qū)都有此病發(fā)生。隨著高度集約化養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展，新城疫的防治也備受關(guān)注。近年來，新城疫的流行趨勢發(fā)生了變化，以發(fā)病率低、臨床癥狀不明顯、病理變化不典型、死亡率低、蛋雞產(chǎn)蛋量下降為特征的非典型新城疫，使得新城疫的防治變得更加復雜和棘手。新城疫目前仍然是嚴重危害我國養(yǎng)禽業(yè)的主要疾病之一，造成的經(jīng)濟損失十分巨大。除了大量死亡的直接損失外，還因幸存者生長發(fā)育受阻、飼料轉(zhuǎn)化率低、產(chǎn)蛋量下降、受精率和孵化率降低以及封鎖隔離等措施花費的大量人力和財力所造成的間接經(jīng)濟損失。由于機體免疫機能狀況等很多因素的綜合影響，使新城疫疫苗接種效果不佳，甚至免疫失敗，新城疫的發(fā)病次數(shù)仍然很高。再者，由于近十多年來養(yǎng)雞業(yè)的蓬勃發(fā)展，使雞場的數(shù)量巨增，星羅棋布，使疫病種類更加復雜化、病情程度更加嚴重。為了更加有效地防治雞新城疫，疫苗免疫后雞新城疫抗體效價監(jiān)測，常作為免疫效果評價的重要依據(jù)。檢測家禽血清中雞新城疫抗體的方法有很多種，包括單向輻射免疫擴散試驗、單向輻射溶血試驗、瓊脂擴散試驗、雞胚中和試驗及蝕斑中和試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗以及血凝抑制試驗(HI)等，但常采用血凝試驗(HA)與血凝抑制試驗(HI)來定量測定雞新城疫抗體。ELISA可以半自動化操作，其技術(shù)已經(jīng)普及，并且ELISA與HI有很好的相關(guān)性。迄今為止，雞紅細胞血凝抑制試驗仍不失為一種快速準確的試驗手段。本次監(jiān)測采用HI方法，對市某戶新城疫疫苗已免疫雞群的1000只100日齡育成雞進行檢驗，并結(jié)合農(nóng)戶的敘述及實地考察，做出該雞群新城疫疫苗免疫效果評價，以便有的放矢地預防和控制該養(yǎng)雞場的新城疫。材料與方法材料抽檢雞涿州市某蛋雞場，從100日齡新城疫疫苗免疫育成雞1000只中分別在100日齡和150日齡時隨機抽取32只采血并分離血清。試劑和藥品雞新城疫HA抗原、新城疫陽性和陰性血清，由中監(jiān)所生產(chǎn);氯化鈉、磷酸二氫鉀、氫氧化鈉、檸檬酸三鈉、葡萄糖、檸檬酸。儀器微量震蕩器微量加樣器、離心機、天平、手提式壓力蒸汽消毒器、90V型96孔血凝板、電冰箱。(pH7.0~7.2)磷酸緩沖鹽水：氯化鈉(GB1266-77)170克磷酸二氫鉀(GB1274-77)13.6克氫氧化鈉(GB-77)3.0克蒸餾水1000毫升高壓滅菌，4?保存，使用時作20倍稀釋阿氏(Aisevers)液配置。葡萄糖2.05克檸檬酸鈉0.8克檸檬酸0.055克氯化鈉0.42克加蒸餾水至1000l,加熱溶解后調(diào)pH值至6.1，69kPal5in高壓滅菌，4?保存?zhèn)溆谩７椒u新城疫紅細胞凝集(HA)試驗參照文獻，以微量法測試新城疫抗原HA價。1%雞紅細胞懸液的制備:采取3只成年無禽流感和新城疫等抗體的健康公雞血與等體積阿氏液混合，用1倍稀釋液洗滌3次，每次均以lOOOr/分鐘離心10分鐘，洗滌后用1倍稀釋液配成1%(V/V)紅細胞懸液。4?保存?zhèn)溆谩A試驗：自左向右于96孔V型血凝板的每1孔中加1倍稀釋液25口L;吸取25口L的抗原滴加到第1孔，用微量加樣器充分混勻后移取25口L，加于第2孔，依此法從左向右進行倍比稀釋至第11孔，從第11孔吸取25口L棄取，第12孔不加抗原作陰性對照;每孔再加25口L稀釋液;每孔均加1%紅細胞懸液25口L，置微量震蕩器震蕩2分鐘，室溫下(20?)作用30分鐘，將血凝板傾斜觀察結(jié)果。結(jié)果判定：以100%凝集的最大稀釋孔為新城疫抗原(HA)價，即一個凝集單位，不凝集者紅細胞沉于孔底呈點狀。第12孔為對照應不凝集。雞新城疫紅細胞凝集抑制(HI)試驗參照文獻，以微量法測試待檢血清中的新城疫血凝抑制抗體效價。4個血凝單位抗原的配置：根據(jù)以確定的新城疫抗原血凝價，計算4個單位抗原的稀釋倍數(shù)(血凝價/4)，以一倍的稀釋液配置出4單位抗原放入冷藏室待用。待檢血清的制備：采取32只待檢雞血液各5毫升置入試管中，靜置至血液凝集后以3000r/分鐘離心2分鐘，吸取血清待檢。HI試驗:于96孔V型血凝板上，自第1孔至第11孔各加稀釋液25微升，11孔和12孔分別為抗原和紅細胞對照;吸取25微升待檢血清滴加到第1孔，用微量加樣器充分混勻后移取25微升，加于第2孔，依此法從左向右進行倍比稀釋至第10孔，吸取25微升棄去，12孔加稀釋液50微升;除12孔外每孔中滴加25微升4單位抗原，室溫下(20?)作用30分鐘;每孔均加1%紅細胞懸液25微升;振蕩2分鐘，室溫下(20?)作用40分鐘，待4單位抗原已凝集紅細胞可觀察結(jié)果。結(jié)果判定：以100%抑制凝集的血清最大稀釋度為該血清的滴度，即血凝抑制(HI)價。11孔的抗原對照應為100%凝集，12孔紅細胞對照應為100%不凝集。結(jié)果與分析新城疫抗原的血凝(HA)價由試驗結(jié)果可知該新城疫抗原的凝集價為1?512，4個凝集單位抗原稀釋倍數(shù)為1?128。待檢血清的新城疫抗體的血凝抑制(HI)價由凝集試驗可知，抗原對照均為100%凝集，紅細胞對照均為100%不凝集，各待檢血清的新城疫抗體血凝抑制價;4份為lg2,14份為3lg2，12份為5lg2,4份為6lg2,4份為7lg2,4份為8lg2。就以上結(jié)果進一步分析該雞群新城疫疫苗免疫雞，HI價?6lg2者占37.5%、?5lg2者占62.5%，其中？臨界值4lg2者占25%，表明該雞群免疫失敗，應考慮重新進行免疫。該雞群HI價均?8lg2,而且臨床健康，HI價分布離散，可判定未發(fā)生新城疫病毒感染。該戶根據(jù)我們的建議用新城疫油乳劑滅活苗對雞群進行了新城疫重新免疫，免疫50天后重新進行抗體監(jiān)測結(jié)果均?5lg2，且?8lg2表明該雞群新城疫免疫抗體合格對新城疫病毒有一定的抵抗力。討論免疫效果評價本次監(jiān)測新城疫疫苗免疫雞群，HI價低于5lg2者占62.5%,其中處于或者小于3lg2者占25%,該雞群存在被新城疫病毒感染的威脅，大于或等于6lg2者占37.5%,表明該雞群免疫失敗，應考慮重新進行免疫。該雞群的HI價均小于或等于8lg2，且HI價分布離散，可判定未發(fā)生新城疫病毒感染。該戶根據(jù)建議對雞群進行了重新免疫后，經(jīng)監(jiān)測新城疫抗體合格。免疫失敗的因素疫苗效價不高農(nóng)戶貪圖便宜或方便就近從個體藥店買些效價不高的疫苗用于雞群免疫，致使免疫效果不佳。免疫方法不當農(nóng)戶擔心疫苗效力不夠，選用3倍,4倍藥量飲水，致使部分雞能飲到超過正常劑量6倍,7倍的疫苗，這極易引起免疫麻痹或超過機體的免疫耐受力而使雞發(fā)病;同時部分雞只喝到很少一點疫苗，免疫力很差。疫苗應用不合理養(yǎng)殖戶認為滅活苗誘導產(chǎn)生的抗體水平較高，且維持時間長，因而首免就選用新城疫滅活苗進行肌肉注射，忽視了弱毒苗的免疫，造成免疫效果不佳。還有一些養(yǎng)殖戶為了省事方便，該進行疫苗注射時不注射而采用飲水的方法進行免疫。前面我們進行監(jiān)測的這1戶就是在雞群60日齡時沒有用新城疫I系苗進行肌肉注射，而是用I系苗進行飲水免疫造成免疫不合格。頻繁免疫造成的免疫抑制近年來，農(nóng)村養(yǎng)雞戶越來越認識到免疫的重要性，但有時在機體內(nèi)抗體效價還很高且均勻度很好的情況下，盲目進行弱毒苗的免疫，容易造成抗體水平下降，雞群容易在抗體下降時感染新城疫病毒。另一方面，由于抗原的頻繁刺激，機體應答反應疲勞，形成免疫抑制。免疫間隔時間長。由于雛雞受母源抗體的影響和免疫器官發(fā)育不完善，首免后的抗體效價往往不高，下降較快，因此使用弱毒苗，在首免后3周之內(nèi)應進行2免，時間間隔過長，容易造成免疫斷當而染病。養(yǎng)雞場因為雞群狀況不佳，總想把病治好了再去免疫接種，人為推遲免疫時間，結(jié)果因健康狀況不佳，抵抗力下降。雞群免疫系統(tǒng)缺損影響雞體的營養(yǎng)狀況。農(nóng)村養(yǎng)雞的飼料多是自配料，隨意性比較大，很容易造成某些營養(yǎng)物質(zhì)，如某些必需氨基酸、維生素、微量元素的缺乏或不足，致使雞體因營養(yǎng)不良而抑制免疫系統(tǒng)的功能。各種應激因素的影響。如溫度濕度的急劇變化、擴群、換料、饑渴等都能引起機體免疫系統(tǒng)功能的暫時性抑制，這時如果進行疫苗免疫接種很容易造成免疫失敗。免疫抑制性疾病的干擾。如傳染性法氏囊病、傳染性支氣管病、馬立克氏病等疾病都能降低免疫應答。缺乏綜合性防治措施。為降低養(yǎng)雞成本，農(nóng)村多采用大棚養(yǎng)殖，雞舍簡