期末復習要點總結-生物材料評價一、生物材料國家標準答：1:評價與試驗2:動物保護要求3：遺傳毒性、致癌性和生殖毒性試驗4:與血液相互作用試驗選擇5:體外細胞毒性試驗6：植入后局部反應試驗7:環氧乙烷滅菌殘留量8:生物學試驗參照材料的選擇與定量指南9:潛在降解產物的定性和定量框架10:刺激與致敏試驗11:全身毒性試驗12:樣品制備與參照樣品13:聚合物降解產物的定性與定量14:陶瓷降解產物的定性與定量15:金屬與合金降解產物的定性與定量16:降解產物與可瀝濾物毒性動力學研究設計17:可瀝濾物允許限量的設計18:材料的化學定性（貌似這個是國際標準）（1）基本評價實驗：細胞毒性試驗、致敏試驗、刺激試驗、急性毒性試驗、溶血試驗、熱源試驗、遺傳毒性試驗、植入試驗、血液相容性試驗；（2）補充評價的生物學試驗：亞急性毒性試驗、致癌試驗、生殖和發育毒性試驗、體內降解試驗。二、血液相容性評價答：凝血:材料、器械表面與血液接觸數秒鐘內，血漿蛋白首先吸附于材料的表面，隨后血小板在材料表面粘附、聚集、變形，形成細小血栓，同時血液內一系列凝血因子相繼被激活，形成更大的血栓，最后產生紅血栓和凝血。體外試驗：將血液或血液成分離體后、暴露于不同材料，觀察材料或血液的變化。主要包括：全血和血液凝固實驗測定，血漿蛋白吸附實驗，血小板粘附實驗和血栓形成實驗半體內實驗：動物體流出的血液直接與實驗材料接觸，實驗材料位于動物體外，動物體內流出的血可直接進入試驗盒或管，在分析血液變化后將其廢棄或通過動物靜脈，將經過實驗材料的血液流回動物體內。多采用同位素標記血液成分并測定這些成分粘附在材料表面的變動情況來評價材料的血液相容性。體內：將材料直接植入動物體內的心血管體系。溶血：紅細胞破裂,血紅蛋白逸出稱紅細胞溶解。測試原理：紅細胞被溶血劑破壞，血紅蛋白中的Fe2+被高鐵氰化鉀氧化為Fe3+,形成高鐵血紅蛋白（Hi），與氰化鉀提供的氰根離子結合生成穩定的化合物氰化高鐵血紅蛋白（HiCN），在波長540nm處有吸收峰，用分光光度計測定你該處的吸光度，轉化成每升血液中的血紅蛋白濃度，用HiCN參考液進行比色法測定制作標準曲線供查閱.溶血率：材料組-陰性對照組/陽性對照組-陰性對照組（小于5%合格）陽性對照：蒸餾水；陰性對照：生理鹽水。三、組織相容性1、MTT（細胞生長抑制法）活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性的MTT還原為難溶性的藍紫色結晶物甲H（Formazan）,并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）或鹽酸-異丙醇溶解細胞中的紫色結晶物。酶聯免疫監測儀在490或570nm處測定溶液的吸光值OD（opticaldensity）。在一定細胞數范圍內，MTT結晶物形成的量與細胞數成正比。2、熱原試驗：熱原：引入或釋放到機體內后能引起恒溫動物體溫異常升高的物質。它包括細菌性熱原、內源性高分子熱原、內源性低分子熱原及化學熱原等。家兔熱原試驗：取適用的家兔3只，測定其正常體溫后15分鐘以內，自耳靜脈緩緩注入規定劑量（10ml/kg）并溫熱至約38°C的供試品溶液，然后每隔30分鐘按前法測量其體溫1次，共測6次，以6次體溫中最高的一次減去正常體溫，即為該兔體溫的升高溫度。如3只家兔中有1只體溫升高了0.6C或0.6C以上，或3只家兔體溫升高均低于0.6C,但體溫升高的總和達1.3C或1.3C以上，應另取5只家兔復試，檢查方法同上。結果判斷：在初試的3只家兔中，體溫升高0.6C或0.6C以上的家兔超過1只；或在復試的5只家兔中，體溫升高0.6C或0.6C以上的家兔超過1只；或在初試、復試合并8只家兔的體溫升高總和超過3.5C，均判為供試品的熱原檢查不符合規定在初試的3只家兔中，體溫升高均低于0.6C，并且3只家兔體溫升高總和低于1.3C；或在復試的5只家兔中，體溫升高0.6C或0.6C以上的家兔不超過1只，并且初試、復試合并8只家兔的體溫升高總和為3.5C或3.5C以下，均判為供試品的熱原檢查符合規定。四、可降解高分子答：性能變化：形貌（TEM、SEM）、結構（SEM、TEM）、分子量（GPC、粘度法）、力學性能（萬能電子試驗機）玻璃化轉變溫度（DSC）、分子組成（紅外、核磁）降解影響因素：直鏈（易）支鏈（交聯）-難柔軟（易）非晶（易）結晶（難）相對分子質量低（易）脂肪族（易）芳香族（難）親水（容易）疏水難降解分為體內降解（酶催化）、體外降解（酸催化、堿催化、酶催化）親水高分子：聚乙二醇、聚丙烯酸、尼龍、聚醚、聚丙烯酰胺疏水高分子：聚碳酸酯、聚乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚丙烯、硅橡膠五、細胞毒性試驗：1、直接法（1）直接接觸法：該法是形態不規則的試樣（如金屬粉末、油脂類材料）等與細胞一起放入培養皿中進行培養。當有溶出物時試樣周圍的細胞就會受到影響。（2）浸提液：浸出液法:試樣投入培養液或蒸餾水中適當條件下進行浸泡，浸泡液加在含有細胞的培養皿或試管中繼續培養，觀察溶出物對細胞的影響。2、間接法（1）瓊脂覆蓋法：將含有培養液的瓊層平鋪在有單層細胞的培養皿中，再在固化的瓊脂層上放上試樣進行細胞培養。當溶出物分子量小，易溶于水，毒性發現早且較強（2）分子濾過法：在單層細胞上覆蓋一層微孔濾膜，將試樣材料放在濾膜上，使材料毒性在成份通過濾膜作用于其下的細胞。由于濾膜微孔直徑較小（如0.45um），適合評價毒性成份分子量小的材料的相容性.六、提高材料的血液相容性：（1）使材料表面帶上負電荷的基團（2）高分子材料的表面接枝改性（3）制備具有微相分離結構的材料（4）高分子材料的肝素化（5）材料表面偽內膜化七、組織相容性影響因素：①材料本身的結構和性質（如微相結構、親水性、疏水性、電荷等）材料中可滲出的化學成分（如殘留單體、雜質、低聚物、添加劑等）降解或代謝產物等。植入材料的幾何形狀也可能引起組織反應。八、致突變試驗：1、微核試驗：用于測試能干擾細胞有絲分裂的物質的致突變性；微核：真核類生物細胞中的一種異常結構，是染色體畸變在間期細胞中的一種表現形式。微核往往是各種理化因子，如輻射、化學藥劑對分裂細胞作用而產生的。2、細菌回復突