干細胞1干細胞概述胚胎干細胞的分化性成體干細胞的可塑性1干細胞概述胚胎干細胞的分化性成體干細胞的可塑性按照發(fā)育階段分類胚胎干細胞(EmbryonicStemcell，ES細胞)。成體■造血■肌肉■骨髓2干細胞應用研究■美容領域■器官移植■疾病治療■生物修復■神經干細胞概述編輯干(gM)細胞即為起源細胞。干細胞是具有增殖和分化潛能的細胞，具有自我更新復制的能力(Self-renewing),能夠產生高度分化的功能細胞。簡單來講，它是一類具有多向分化潛能和自我復制能力的原始的未分化細胞，是形成哺乳類動物的各組織器官的原始細胞。干細胞在形態(tài)上具有共性，通常呈圓形或橢圓形，細胞體積小，核相對較大，細胞核多為常染色質，并具有較高的端粒酶活性。干細胞可分為胚胎干細胞和成體干細胞。干細胞是自我復制還是分化功能細胞，主要由于細胞本身的狀態(tài)和微環(huán)境因素所決定。包括調節(jié)細胞周期的各種周期素(Cyclin)和周期素依賴激酶(Cyclin-DependentKinase)、基因轉錄因子、影響細胞不對稱分裂的細胞質因子。微環(huán)境因素，包括干細胞與周圍細胞，干細胞與外基質以及干細胞與各種可溶性因子的相互作用。人體內的干細胞分兩種類型，一種是全功能干細胞(totipotentstemcell),可直接克隆人體；另一種是多功能干細胞(pluripotentstemcell),可直接復制各種臟器和修復組織。人類寄希望于利用干細胞的分離和體外培養(yǎng)，在體外繁育出組織或器官，并最終通過組織或器官移植，實現對臨床疾病的治療。“原位培植皮膚干細胞再生新皮膚技術”不僅實現了利用干細胞復制皮膚器官，而且做到了人體原位皮膚器官的復制，從而使人類從干細胞體外培植組織成器官移植治療，直接跨入了人體原位干細胞復制器官。科學家普遍認為：干細胞的研究將為臨床醫(yī)學提供更為廣闊的應用前景。干細胞具有經培養(yǎng)不定期地分化并產生特化細胞的能力。在正常的人體發(fā)育環(huán)境中，它們得到了最好的詮釋。人體發(fā)育起始于卵子的受精，產生一個能發(fā)育為完整有機體潛能的單細胞，即全能性受精卵。受精后的最初幾個小時內，受精卵分裂為一些完全相同的全能細胞。這意味著如果把這些細胞的任何一個放入女性子宮內，均有可能發(fā)育成胎兒。實際上，當兩個全能細胞分別發(fā)育為單獨遺傳基因型的人時，即出現了各方面都完全相同的雙胞胎。大約在受精后四天，經過幾個循環(huán)的細胞分裂之后，這些全能細胞開始特異化，形成一個中空環(huán)形的細胞群結構，稱之為胚囊，胚囊由外層細胞和位于中空球形內的細胞簇(稱為內細胞群)所構成。外層細胞繼續(xù)發(fā)展，形成胎盤以及胎兒在子宮內發(fā)育所需的其它支持組織。內細胞群細胞亦繼續(xù)發(fā)育，形成人體所須的全部組織。盡管內細胞群可形成人體內的所有組織，但它們不能發(fā)育為一個單獨的生物體，因為它們不能形成胎盤以及子宮內發(fā)育所需的支持組織。這些內細胞群細胞是多能性的----它們能產生許多種類型的細胞，但并非胎兒發(fā)育所需的全部細胞類型。因為它們不是全能性的，不是胚胎，沒有完全的發(fā)育潛能。如果內細胞群被放入女性子宮，它不會發(fā)育成胎兒。多能性干細胞經歷進一步的特異分化，發(fā)展為參與生成特殊功能細胞的干細胞。如造血干細胞，它能產生紅細胞、白細胞和血小板。又如皮膚干細胞，它能產生各種類型的皮膚細胞。這些更專門化的干細胞被稱為專能干細胞。胚胎干細胞(Embryonicstemcell)的發(fā)育等級較高，是全能干細胞(Totipotentstemcell),而成體干細胞的發(fā)育等級較低，是多能干細胞或單能干細胞。干細胞的發(fā)育受多種內在機制和微環(huán)境因素的影響。人類胚胎干細胞已可成功地在體外培養(yǎng)。最新研究發(fā)現，成體干細胞可以橫向分化為其他類型的細胞和組織，為干細胞的廣泛應用提供了基礎。在胚胎的發(fā)生發(fā)育中，單個受精卵可以分裂發(fā)育為多細胞的組織或器官。胚胎的分化形成和成體組織的再生是干細胞進一步分化的結果。胚胎干細胞是全能的，具有分化為幾乎全部組織和器官的能力。而成體組織或器官內的干細胞一般認為具有組織特異性，只能分化成特定的細胞或組織。最新的研究表明，組織特異性干細胞同樣具有分化成其他細胞或組織的潛能，這為干細胞的應用開創(chuàng)了更廣泛的空間。干細胞對早期人體的發(fā)育特別重要，在兒童和成年人中也可發(fā)現專能干細胞。舉我們所最熟知的干細胞之一，造血干細胞為例，造血干細胞存在于每個兒童和成年人的骨髓之中，也存在于循環(huán)血液中，但數量非常少。在我們的整個生命過程中，造血干細胞在不斷地向人體補充血細胞一一紅細胞、白細胞和血小板的過程中起著很關鍵的作用。如果沒有造血干細胞，我們就無法存活。干細胞是一類具有自我更新和分化潛能的細胞。人類胚胎干細胞已成功地在體外培養(yǎng)。最新研究發(fā)現，成體干細胞可以橫向分化為其它類型的細胞和組織，為干細胞的廣泛應用提供了基礎。在胚胎的發(fā)生發(fā)育中，單個受精卵可以分裂發(fā)育為多細胞組織或器官。在成年動物中，正常的生理代謝或病理損傷也會引起組織或器官的修復再生。胚胎的分化形成和成年組織的再生是干細胞進一步分化的結果。胚胎干細胞是全能的，具有分化為幾乎全部組織和器官的能力。而成年組織或器官內的干細胞一般認為具有組織特異性，只能分化特定的細胞或組織。然而，這個觀點受到了挑戰(zhàn)。最新的研究表明，組織特異性干細胞同樣具有分化成其它細胞或組織的潛能，這為干細胞的應用開創(chuàng)了更廣泛的空間。按分化潛能的大小，干細胞基本上可分為三種類型：一類是全能性干細胞，它具有形成完整個體的分化潛能。如胚胎干細胞，它是從早期胚胎內的細胞團分離出來的一種高度未分化的細胞系，具有與早期胚胎細胞相似的形態(tài)特征和很強的分化能力，它可以無限增殖并分化成為全身200多種細胞類型，進一步形成機體的所有組織、器官。另一類是多能性干細胞，這種干細胞具有分化出多種細胞組織的潛能，但卻失去了發(fā)育成完整個體的能力，發(fā)育潛能受到一定的限制，骨髓多能造血干細胞是典型的例子，它可分化出至少十一中血細胞，但不分化出造血系統(tǒng)以外的其他細胞。還有一類干細胞為單能干細胞(也稱專能、偏能干細胞)，這類干細胞只能向一種類型或密切相關的兩種類型的細胞分化，如上皮組織基底層的干細胞、肌肉中的成肌細胞。總之，凡需要不斷產生新的分化細胞以及分化細胞本身不能再分裂的細胞或組織，都要通過干細胞所產生的具有分化能力的細胞來維持肌體細胞的數量，可以這樣說，生命是通過干細胞的分裂來實現細胞的更新及保證持續(xù)生長。胚胎干細胞的分化性胚胎干細胞具有萬能分化性(pluripotency)功能，特點是可以細胞分化(Cellulardifferentiation成多種組織的能力，但無法獨自發(fā)育成一個個體。它可以差轉成為外胚層、中胚層及內胚層三種胚層的成員，然后再差轉成為人體的220多種細胞種類。萬能分化性是胚胎干細胞與在成年人體內可找到的多功能干細胞的主要分別：多功能干細胞只能差轉成為某幾種特定的細胞種類。在無外界提供差轉的刺激之下(即可在實驗環(huán)境下生長)，胚胎干細胞在經過多重細胞分裂之后，仍然能保有萬能分化性。成人干細胞能否保有萬能分化性，直到現在仍然有爭議。不過，有研究已示范了萬能干細胞可以從成纖維細胞集叢產生出來。成體干細胞的可塑性越來越多的證據表明，當成體干細胞被移植入受體中，它們表現出很強的可塑性。通常情況下，供體的干細胞在受體中分化為與其組織來源一致的細胞。而在某些情況下干細胞的分化并不遵循這種規(guī)律。1999年Goodell等人分離出小鼠的肌肉干細胞，體外培養(yǎng)5天后，與少量的骨髓間質細胞一起移植入接受致死量輻射的小鼠中，結果發(fā)現肌肉干細胞會分化為各種血細胞系。這種現象被稱為干細胞的橫向分化(trans-differentiation)[5]。關于橫向分化的調控機制還不清楚。大多數觀點認為干細胞的分化與微環(huán)境密切相關。可能的機制是，干細胞進入新的微環(huán)境后，對分化信號的反應受到周圍正在進行分化的細胞的影響，從而對新的微環(huán)境中的調節(jié)信號做出反應。克隆豬、克隆羊，其技術的機制原理和干細胞是一致的。按照發(fā)育階段分類胚胎干細胞(EmbryonicStemCell)和成體干細胞(AdultStemCell)。1、胚胎干細胞包括ES細胞(EmbryonicStemCell)、EG細胞(EmbryonicGermCell)2、成體干細胞包括神經干細胞(NeuralStemCe11，NSC)、血液干細胞(HematopoieticStemCell，HSC)、骨髓間充質干細胞(MesenchymalStemCell，MSC)、表皮干細胞(EPidexmisStemCell)等。按分化潛能，干細胞可分為，全能干細胞，亞全能干細胞，多能干細胞，單能干細胞。全能干細胞：具有形成完整個體的分化潛能，如受精卵亞全能干細胞：為人類體內存在為數不多的三胚層分化潛能干細胞多能干細胞：具有分化出多種細胞組織的潛能。如胚胎干細胞(ES)單能干細胞：只能向一種或兩種密切相關的細胞類型分化。如神經干細胞、造血干細胞胚胎干細胞：ES細胞是一種高度未分化細胞。它具有發(fā)育的全能性，能分化出成體動物的所有組織和器官，包括生殖細胞。研究和利用ES細胞是當前生物工程領域的核心問題之一。在未來幾年，ES細胞移植和其它先進生物技術的聯合應用很可能在移植醫(yī)學領域引發(fā)革命性進步。胚胎干細胞可來源于畸胎瘤細胞(EC)、桑椹球細胞(ES)、囊胚內細胞團(ES)、擬胚體細胞(ES)、生殖原基細胞(EG)等。當受精卵分裂發(fā)育成囊胚時，將內細胞團(nnerCellMass)分離出來進行培養(yǎng)，在一定條件下，這些細胞可在體外“無限期”地增殖傳代，同時還保持其全能性，因此被稱為胚胎干細胞。胚胎干細胞在培養(yǎng)條件下，若加入白血病抑制因子LIF(LeukaemiaInhibitoryFactor),則能保持在未分化狀態(tài)，若去掉LIF,胚胎干細胞迅速分化，最終產生多種細胞系，如肌肉細胞、血細胞、神經細胞或發(fā)育成“胚胎體”。成體干細胞：成年動物的許多組織和器官，比如表皮和造血系統(tǒng)，具有修復和再生的能力。成體干細胞在其中起著關鍵的作用。在特定條件下，成體干細胞或者產生新的干細胞，或者按一定的程序分化，形成新的功能細胞，從而使組織和器官保持生長和衰退的動態(tài)平衡。成體干細胞可以由下列幾個方面得到：⑴胚胎細胞一一由胚胎干細胞定向分化，或移植分化而成。⑵胚胎組織——由分離胚胎組織、細胞分離、或培養(yǎng)而成。⑶成體組織一一由臍血、新生兒胎盤、骨髓、外周血、骨髓間質、脂肪細胞等得到。造血干細胞：造血干細胞是體內各種血細胞的唯一來源，它主要存在于骨髓、外周血、臍帶血中。造血干細胞的移植是治療血液系統(tǒng)疾病、先天性遺傳疾病以及多發(fā)性轉移性腫瘤疾病的最有效方法。與骨髓移植和外周血干細胞移植相比，臍血干細胞移植的長處在于無來源的限制，對HLA配型要求不高，不易受病毒或腫瘤的污染。神經干細胞：神經干細胞的研究尚處初級階段。理論上講，任何一種中樞神經疾病都可歸結為神經干細胞功能的紊亂。給帕金森氏綜合癥患者的腦內移植含有多巴胺生成細胞的神經細胞，可治愈部分患者的癥狀。周邊血干細胞：骨髓中存有人體內最主要造血干細胞的來源，而周邊血干細胞則是指借由施打白細胞生長激素(G-CSF),將骨髓中的干細胞驅動至血液中，再經由血液分離機收集取得之干細胞.由于與骨髓干細胞極為相近，現已逐漸取代需要全身麻醉的骨髓抽取手術.脂肪干細胞：以往人們因塑身而抽出的脂肪，大部分都當廢棄物丟掉，現經由醫(yī)學專家研究證，脂肪中含有大量的間質干細胞，間質干細胞具有體外增生及多重分化的潛力，能運用于組織與器官的再生與修復.骨髓間充質干細胞(mesenchymalstemcells,MSC)：是干細胞家族的重要成員，來源于發(fā)育早期的中胚層和外胚層.MSC最初在骨髓中發(fā)現，因其具有多向分化潛能、造血支持和促進干細胞植入、免疫調控和自我復制等特點而日益受到人們的關注.如間充質干細胞在體內或體外特定的誘導條件下，可分化為脂肪、骨、軟骨、肌肉、肌腱、韌帶、神經、肝、心肌、內皮等多種組織細胞,連續(xù)傳代培養(yǎng)和冷凍保存后仍具有多向分化潛能，可作為理想的種子細胞用于衰老和病變引起的組織器官損傷修復.骨髓間充質干細胞由于其來源廣泛，易于分離培養(yǎng)，并且具有較強的分化潛能和可自體移植等優(yōu)點，越來越受到學者們的青睞，被認為是不久即將被引入臨床治療的最優(yōu)干細胞.心臟干細胞：以色列的科學家研究出了一種用干細胞做成的心臟，這是由干細胞的分裂形成的。胎盤造血干細胞：胎盤是胎兒和母親血液交換的場所，含有非常豐富的血液微循環(huán)。人在母親子宮內發(fā)育的階段，胎盤是首先形成的器官之一。胎盤中含有大量的早期干細胞，包括數量豐富的造血干細胞。這些干細胞在胎盤中行使著造血的功能。小孩出生后剝離的胎盤內所含的造血干細胞，可以分化形成各種血細胞(紅細胞、白細胞、血小板等)的祖宗，注射到體內可以發(fā)揮造血功能。胎盤亞全能干細胞：亞全能干細胞自胚胎形成的第5到7天開始出現，能分化形成200多種人體組織器官細胞，但不能形成一個完整的人體。胎盤亞全能干細胞是來源于新生兒胎盤組織的一族亞全能干細胞，其在發(fā)育階段與胚胎干細胞接近，具備分化形成三個胚層的組織細胞的能力，但不會形成畸胎瘤。羊膜干細胞：來源于羊膜上皮，表達多種胚胎干細胞的標志物，具有多系分化的能力，其分化能力超過骨髓來源的間充質干細胞，具有較低的免疫原性。胚胎干細胞(EmbryonicStemcell，ES細胞)胚胎干細胞當受精卵分裂發(fā)育成囊胚時，內層細胞團(InnerCellMass)的細胞即為胚胎干細胞。胚胎干細胞具有全能性，可以自我更新并具有分化為體內所有組織的能力。早在1970年MartinEvans已從小鼠中分離出胚胎干細胞并在體外進行培養(yǎng)。而人的胚胎干細胞的體外培養(yǎng)才獲得成功。進一步說，胚胎干細胞(ES細胞)是一種高度未分化細胞。ES細胞的研究可追溯到上世紀五十年代，由于畸胎瘤干細胞(EC細胞)的發(fā)現開始了ES細胞的生物學研究歷程。許多研究工作都是以小鼠ES細胞為研究對象展開的，如：德美醫(yī)學小組在成功的向試驗鼠體內移植了由ES細胞培養(yǎng)出的神經膠質細胞。密蘇里的研究人員通過鼠胚細胞移植技術，使癱瘓的貓恢復了部分肢體活動能力。隨著ES細胞的研究日益深入，生命科學家對人類ES細胞的了解邁入了一個新的階段。在98年末，兩個研究小組成功的培養(yǎng)出人類ES細胞，保持了ES細胞分化為各種體細胞的全能性。這樣就使科學家利用人類ES細胞治療各種疾病成為可能。然而，人類ES細胞的研究工作引起了全世界范圍內的很大爭議，出于社會倫理學方面的原因，有些國家甚至明令禁止進行人類ES細胞研究。無論從基礎研究角度來講還是從臨床應用方面來看，人類ES細胞帶給人類的益處遠遠大于在倫理方面可能造成的負面影響，因此要求展開人類ES細胞研究的呼聲也一浪高似一浪。成體過去認為成體干細胞主要包括上皮干細胞和造血干細胞。研究表明，以往認為不能再生的神經組織仍然包含神經干細胞，說明成體干細胞普遍存在，問題是如何尋找和分離各種組織特異性干細胞。成體干細胞經常位于特定的微環(huán)境中。微環(huán)境中的間質細胞能夠產生一系列生長因子或配體，與干細胞相互作用，控制干細胞的更新和分化。造血造血干細胞是體內各種血細胞的唯一來源，它主要存在于骨髓、外周血、臍帶血中、胎盤組織中。協(xié)和醫(yī)大血液學研究所的龐文新又在肌肉組織中發(fā)現了具有造血潛能的干細胞。造血干細胞的移植是治療血液系統(tǒng)疾病、先天性遺傳疾病以及多發(fā)性和轉移性惡性腫瘤疾病的最有效方法。在臨床治療中，造血干細胞應用較早，在20世紀五十年代，臨床上就開始應用骨髓移植（BMT）方法來治療血液系統(tǒng)疾病。到八十年代末，外周血干細胞移植（PBSCT）技術逐漸推廣開來，絕大多數為自體外周血干細胞移植（APBSCT），在提高治療有效率和縮短療程方面優(yōu)于常規(guī)治療，且效果令人滿意。在東北地區(qū)首例臍血干細胞移植成功，又為中國造血干細胞移植技術注入新的活力。隨著臍血干細胞移植技術的不斷完善，它可能會代替APBSCT的地位，為全世界更多的血液病及惡性腫瘤的患者帶來福音。神經神經干細胞關于神經干細胞研究起步較晚，由于分離神經干細胞所需的胎兒腦組織較難取材，加之胚胎細胞研究的爭議尚未平息，神經干細胞的研究仍處于初級階段。理論上講，任何一種中樞神經系統(tǒng)疾病都可歸結為神經干細胞功能的紊亂。腦和脊髓由于血腦屏障的存在使之在干細胞移植到中樞神經系統(tǒng)后不會產生免疫排斥反應，如：給帕金森氏綜合癥患者的腦內移植含有多巴胺生成細胞的神經干細胞，可治愈部分患者癥狀。除此之外，神經干細胞的功能還可延伸到藥物檢測方面，對判斷藥物有效性、毒性有一定的作用。實際上，到目前為止，人們對干細胞的了解仍存在許多盲區(qū)。2000年年初美國研究人員無意中發(fā)現在胰腺中存有干細胞；加拿大研究人員在人、鼠、牛的視網膜中發(fā)現了始終處于“休眠狀態(tài)的干細胞”；有些科學家證實骨髓干細胞可發(fā)育成肝細胞，腦干細胞可發(fā)育成血細胞。隨著干細胞研究領域向深度和廣度不斷擴展，人們對干細胞的了解也將更加全面。21世紀是生命科學的時代，也是為人類的健康長壽創(chuàng)造世界奇跡的時代，干細胞的應用將有廣闊前景。肌肉成肌細胞（myoblasts）可發(fā)育分化為成肌細胞（myocytes），后者可互相融合成為多核的肌纖維，形成骨骼肌最基本的結構。皿3骨髓骨髓間充質干細胞（mesenchymalstemcells,MSC）是干細胞家族的重要成員，來源于發(fā)育早期的中胚層和外胚層。骨髓間充質干細胞具有如下的優(yōu)點：一.具有強大的增殖能力和多向分化潛能，在適宜的體內或體外環(huán)境下不僅可分化為造血細胞，還具有分化為肌細胞、肝細胞、成骨細胞、軟骨細胞、基質細胞等多種細胞的能力。二.具有免疫調節(jié)功能，從而發(fā)揮免疫重建的功能。干細胞的調控是指給出適當的因子條件，對干細胞的增殖和分化進行調控，使之向指定的方向發(fā)展。內源性調控干細胞自身有許多調控因子可對外界信號起反應從而調節(jié)其增殖和分化，包括調節(jié)細胞不對稱分裂的蛋白，控制基因表達的核因子等。另外，干細胞在終末分化之前所進行的分裂次數也受到細胞內調控因子的制約。⑴細胞內蛋白對干細胞分裂的調控：干細胞分裂可能產生新的干細胞或分化的功能細胞。這種分化的不對稱是由于細胞本身成分的不均等分配和周圍環(huán)境的作用造成的。細胞的結構蛋白，特別是細胞骨架成分對細胞的發(fā)育非常重要。如在果蠅卵巢中，調控干細胞不對稱分裂的是一種稱為收縮體的細胞器，包含有許多調節(jié)蛋白，如膜收縮蛋白和細胞周期素A。收縮體與紡錘體的結合決定了干細胞分裂的部位，從而把維持干細胞性狀所必需的成分保留在子代干細胞中。⑵轉錄因子的調控：在脊椎動物中，轉錄因子對干細胞分化的調節(jié)非常重要。比如在胚胎干細胞的發(fā)生中，轉錄因子Oct4是必需的。Oct4是一種哺乳動物早期胚胎細胞表達的轉錄因子，它誘導表達的靶基因產物是FGF-4等生長因子，能夠通過生長因子的旁分泌作用調節(jié)干細胞以及周圍滋養(yǎng)層的進一步分化。Oct4缺失突變的胚胎只能發(fā)育到囊胚期，其內部細胞不能發(fā)育成內層細胞團。另外白血病抑制因子（LIF）對培養(yǎng)的小鼠ES細胞的自我更新有促進作用，而對人的成體干細胞無作用，說明不同種屬間的轉錄調控是不完全一致的。又如Tcf/Lef轉錄因子家族對上皮干細胞的分化非常重要。Tcf/Lef是Wnt信號通路的中間介質，當與B-Catenin形成轉錄復合物后，促使角質細胞轉化為多能狀態(tài)并分化為毛囊。外源性調控除內源性調控外，干細胞的分化還可受到其周圍組織及細胞外基質等外源性因素的影響。⑴分泌因子：間質細胞能夠分泌許多因子，維持干細胞的增殖，分化和存活。有兩類因子在不同組織甚至不同種屬中都發(fā)揮重要作用，它們是TGFB家族和Wnt信號通路。比如TGF家族中至少有兩個成員能夠調節(jié)神經嵴干細胞的分化。研究發(fā)現，膠質細胞衍生的神經營養(yǎng)因子（GDNF）不僅能夠促進多種神經元的存活和分化，還對精原細胞的再生和分化有決定作用。GDNF缺失的小鼠表現為干細胞數量的減少，而GDNF的過度表達導致未分化的精原細胞的累積［3］。Wnts的作用機制是通過阻止B-Catenin分解從而激活Tcf/Lef介導的轉錄，促進干細胞的分化。比如在線蟲卵裂球的分裂中，鄰近細胞誘導的Wnt信號通路能夠控制紡錘體的起始和內胚層的分化。⑵膜蛋白介導的細胞間的相互作用：有些信號是通過細胞-細胞的直接接觸起作用的。B-Catenin就是一種介導細胞粘附連接的結構成分。除此之外，穿膜蛋白Notch及其配體Delta或Jagged也對干細胞分化有重要影響。在果蠅的感覺器官前體細胞，脊椎動物的胚胎及成年組織包括視網膜神經上皮、骨骼肌和血液系統(tǒng)中，Notch信號都起著非常重要的作用。當Notch與其配體結合時，干細胞進行非分化性增殖；當Notch活性被抑制時，干細胞進入分化程序，發(fā)育為功能細胞［4］。⑶整合素（Integrin）與細胞外基質：整合素家族是介導干細胞與細胞外基質粘附的最主要的分子。整合素與其配體的相互作用為干細胞的非分化增殖提供了適當的微環(huán)境。比如當B1整合素喪失功能時，上皮干細胞逃脫了微環(huán)境的制約，分化成角質細胞。此外細胞外基質通過調節(jié)B1整合素的表達和激活，從而影響干細胞的分布和分化方向。干細胞的研究被認為開始于1960年代，在加拿大科學家恩尼斯特?莫科洛克和詹姆士?堤爾的研究之后。1959年，美國首次報道了通過體外受精（WF）動物。60年代，幾個近親種系的小鼠睪丸畸胎瘤的研究表明其來源于胚胎生殖細胞（embryonicgermcells,EG細胞），此工作確立了胚胎癌細胞（embryoniccarcinomacells,EC細胞）是一種干細胞。1968年，Edwards和Bavister在體外獲得了第一個人卵子。70年代，EC細胞注入小鼠胚泡產生雜合小鼠。培養(yǎng)的SC細胞作為胚胎發(fā)育的模型，雖然其染色體的數目屬于異常。1978年，第一個試管嬰兒，LouiseBrown在英國誕生。1981年，Evan,Kaufman和Martin從小鼠胚泡內細胞群分離出小鼠ES細胞。他們建立了小鼠ES細胞體外培養(yǎng)條件。由這些細胞產生的細胞系有正常的二倍型，像原生殖細胞一樣產生三個胚層的衍生物。將ES細胞注入上鼠，能誘導形成畸胎瘤。1984—1988年，Anderews等人從人睪丸畸胎瘤細胞系Tera-2中產生出多能的、可鑒定的（克隆化的）細胞，稱之為胚胎癌細胞（embryoniccarcinomacells,EC細胞）。克隆的人EC細胞在視黃酸的作用下分化形成神經元樣細胞和其他類型的細胞。1989年，Pera等分離了一個人EC細胞系，此細胞系能產生出三個胚層的組織。這些細胞是非整倍體的（比正常細胞染色體多或少），他們在體外的分化潛能是有限的。1994年，通過體外授精和病人捐獻的人胚泡處于2-原核期。胚泡內細胞群在培養(yǎng)中得以保存其周邊有滋養(yǎng)層細胞聚集，ES樣細胞位于中央。1998年美國有兩個小組分別培養(yǎng)出了人的多能（pluripotent）干細胞：JamesA.Thomson在Wisconsin大學領導的研究小組從人胚胎組織中培養(yǎng)出了干細胞株。他們使用的方法是：人卵體外受精后，將胚胎培育到囊胚階段，提取innercellmass細胞，建立細胞株。經測試這些細胞株的細胞表面marker和酶活性，證實他們就是全能干細胞。用這種方法，每個胚胎可取得15-20干細胞用于培養(yǎng)。JohnD.Gearhart在JohnsHopkins大學領導的另一個研究小組也從人胚胎組織中建立了干細胞株。他們的方法是：從受精后 5-9周人工流產的胚胎中提取生殖母細胞（primordialgermcell）。由此培養(yǎng)的細胞株，證實具有全能干細胞的特征。2000年，由Pera、Trounson和Bongso領導的新加坡和澳大利亞科學家從治療不育癥的夫婦捐贈的胚泡內細胞群中分離得到人ES細胞，這些細胞體外增殖，保持正常的核型，自發(fā)分化形成來源于三個胚層的體細胞系。將其注入免疫缺陷小鼠錯開內產生畸胎瘤。2003,建立了人類皮膚細胞與兔子卵細胞種間融合的方法，為人胚胎干細胞研究提供了新的途徑。2004年，MassachusettsAdvancedCellTechnology報道克隆小鼠的干細胞可以通過形成細小血管的心肌細胞修復心衰小鼠的心肌損傷。這種克隆細胞比來源于骨髓的成體干細胞修復作用更快、更有效，可以取代40%的瘢痕組織和恢復心肌功能。這是首次顯示克隆干細胞在活體動物體內修復受損組織。2012年2月，賽萊拉“人干細胞生長因子在化妝品中的應用”獲得國家重大發(fā)明專利。2012年12月，獲批成立“廣東省賽萊拉-暨南干細胞研究與儲存院士工作站”。2013年05月，賽萊拉“人胎盤干細胞提取物凍干粉及其制備方法與應用”榮獲國家重大發(fā)明專利。2013年12月，人胎盤干細胞研究成果榮獲全國工商聯“科技進步獎?優(yōu)秀獎”。干細胞和再生醫(yī)學的研究已成為自然科學中最為引人注目的領域。中國在干細胞低溫超低溫氣相、液相保存技術、定向溫度保存技術及超低溫干細胞保存抗損傷技術等處于世界領先水平。干細胞理論的日臻完善和技術的迅猛發(fā)展必將在疾病治療和生物醫(yī)藥等領域產生劃時代的成果，是對傳統(tǒng)醫(yī)療手段和醫(yī)療觀念的一場重大革命。采用干細胞治療有著多種優(yōu)勢：低毒性（或無毒性），即使不完全了解疾病發(fā)病的確切機理治療也可達到較好的治療效果，自身干細胞移植可避免產生免疫排斥反應，對傳統(tǒng)治療方法療效較差的疾病多有驚人的效果。2011年5月，《自然》期刊發(fā)表研究報告指出，用皮膚干細胞制成的細胞組織，盡管是來自同一病患體內的細胞，都可能受到病患體內免疫系統(tǒng)的排斥，這項報告讓干細胞治病的前景受到挫折。研究人員是用與胚胎干細胞類似特點的皮膚細胞，制成誘發(fā)性多能干細胞（inducedpluripotentstemcells，簡稱iPS細胞）。這種細胞理論上可變?yōu)樯窠洝⑿呐K、肝臟或其他器官的細胞，也可進行移植，修補受損的器官。iPS細胞2007年最初制成時，科學家深感震撼，因為這種細胞具有胚胎細胞缺乏的兩大優(yōu)點，一是沒有爭議，無需毀壞人類胚胎；二是因用病患本身的皮膚細胞制成，所以應當不會受到免疫系統(tǒng)的排斥。但第二個理論上的優(yōu)點從未經過實際檢驗，直至圣地牙哥加州大學的華裔生物學家徐陽（YangXu,音譯）和同事在試驗中才發(fā)現，用老鼠皮膚制成的iPS細胞，在屬性相同的老鼠體內受到排斥。很多科學家也對這樣的結果感到驚訝。高級細胞技術公司科學主管蘭札說：「干細胞的臨床應用前景更加黯淡了。」他說，在老鼠身上的試驗，不清楚是否在人類身上也產生同樣結果，但一些科學家認為，結果可能相同。一些研究人員數月前指出，iPS細胞可能會產生多種形式的基因突變，最新的研究結果更使iPS細胞的應用前景失色。波士頓兒童醫(yī)院的干細胞移植計劃主任戴利說：「這表明我們對干細胞的本質仍然不甚了解，任何新技術在初期階段都是先表現得癡迷，然彳爰才變得現實，我沒料到會是這樣的結果。」爭議性研究國際權威刊物《細胞》雜志的子刊《細胞一干細胞》網絡版發(fā)表了一項有爭議的研究成果：一個國際研究小組在實驗室中首次利用成人皮膚細胞克隆出干細胞，朝著培養(yǎng)患者特異性細胞系用以治療從心臟病到失明的各類疾病邁進了一步，但這項進展也可能重啟有關克隆人的倫理討論。從理論上來說，這些干細胞可以用來制造幾乎任何類型的細胞，并作為一種治療手段植回人體。由先進細胞技術公司的羅伯特?蘭扎帶領的研究團隊使用了與克隆“多利羊”類似的體細胞核轉移技術。他們先對捐贈的未受精卵細胞進行重編程，移除了它的DNA（脫氧核糖核酸），并用來自成人供體的DNA取而代之；然后用電流刺激的方式使細胞分裂和繁殖。由此獲得的細胞便擁有與成人供體相同的DNA。人類干細胞首次克隆成功是在2013年，當時美國俄勒岡健康與科學大學和俄勒岡國家靈長類研究中心的科學家使用的是來自嬰兒的捐贈細胞。而新研究使用的細胞則由兩位成年男性提供，一位35歲，另一位75歲。研究人員在論文中強調了這項技術用于開發(fā)新療法的前景。雖然該研究從技術上涉及到早期胚胎，但其意圖并不是要讓它們發(fā)育成為人。當然，在理論上，這項技術可能是克隆一個與供體具有相同基因組成的嬰兒的第一步。這就是生物倫理學家所謂的“雙重用途困境”，即一種研究既可以被用于不良目的，又可能被用來造福人類。主導人類胚胎干細胞克隆研究的俄勒岡健康與科學大學胚胎細胞和基因治療中心主任舒赫拉特?米塔利波夫強調，這項新研究并不涉及受精胚胎。胚胎研究總是會招致反對，但其潛在的利益是巨大的。研究團隊嘗試著克隆了39次，但只有兩次獲得了胚胎。起初他們也沒辦法讓細胞繁殖，最后發(fā)現，需要等待兩個小時才能誘導細胞成功繁殖。但研究人員表示，利用這項技術來培育患者特異性干細胞是可能的，并且患者的年齡不受限制。隨著基因工程、胚胎工程、細胞工程等各種生物技術的快速發(fā)展，按照一定的目的，在體外人工分離、培養(yǎng)干細胞已成為可能，利用干細胞構建各種細胞、組織、器官作為移植器官的來源，這將成為干細胞應用的主要方向。科學家將人類干細胞植入豬身體且無排斥性2014年6月6日，科學家已成功將人類干細胞移植到基因改造豬的體內，沒有出現排斥現象。由于這些細胞得以茁壯成長，人們有望通過移植干細胞來治療使人衰弱的疾病。這項突破性技術還有助于為免疫力嚴重不足的患者找到治療方法。這項突破性研究有助于治療嚴重免疫性缺陷的患者群體，當前，對于干細胞治療有效性醫(yī)學研究的一個最大挑戰(zhàn)是移植或者嫁接細胞經常被主體排斥。研究小組將人類多功能干細胞植入密蘇里大學生殖生理學教授蘭德爾-普拉瑟（RandallPrather）培育的轉基因實驗豬體內，這只豬的免疫系統(tǒng)使它能夠無排斥性接受所有移植和嫁接。當科學家將這些人類干細胞植入豬的身體，它對人類干細胞并不產生排斥性，并且能夠存活下來。普拉瑟說：“這項實驗的成功性具有顯著意義，因為豬比其它測試動物更接近人類。”許多醫(yī)學研究人員愿意對豬進行實驗是因為從解剖學上豬比其它動物更類似于人類，體型上豬比老鼠等其它動物更接近人類，它們適用于類似的健康治療。這意味著對豬的實驗研究很可能獲得類似于人類進行不同的測試和治療。干細胞應用研究美容領域人體的衰老，皺紋的出現，究其根源實質上都是細胞的衰老和減少。而細胞的衰老和減少則是由干細胞老化引起的。干細胞是各種組織細胞更新換代的種子細胞，是人體細胞的生產廠。干細胞族群的老化嚴重減弱了其增殖和分化的能力，新生的細胞補充不足，衰老細胞不能及時被替代，全身各系統(tǒng)功能下降，讓人一天天老去。而你的皮膚，也因為皮膚干細胞的衰老而無法及時更新，衰老的皮膚得不到修復，所以，你有了皺紋，失去了青春容顏。干細胞美容原理是通過輸注特定的多種細胞（包括各種干細胞和免疫細胞），激活人體自身的“自愈功能”，對病變的細胞進行補充與調控，激活細胞功能，增加正常細胞的數量，提高細胞的活性，改善細胞的質量，防止和延緩細胞的病變，恢復細胞的正常生理功能，從而達到疾病康復、對抗衰老的目的。分化后的細胞，往往由于高度分化而完全喪失了再分化的能力，這樣的細胞最終將衰老和死亡。然而，動物體在發(fā)育的過程中，體內卻始終保留了一部分未分化的細胞，這就是干細胞，干細胞的衰老是機體衰老或人類衰老的重要因素，因而，人體干細胞移植（或注射）對阻止人類衰老意義重大。干細胞又叫做起源細胞、萬用細胞，是一類具有自我更新和分化潛能的細胞。可以這樣說，動物體就是通過干細胞的分裂來實現細胞的更新，從而保證動物體持續(xù)生長發(fā)育的。干細胞根據其分化潛能的大小，可以分為兩類：全能干細胞和組織干細胞。前者可以分化、發(fā)育成完整的動物個體，后者則是一種或多種組織器官的起源細胞。人的胚胎干細胞可以發(fā)育成完整的人，所以屬于全能干細胞。早在19世紀，發(fā)育生物學家就知道，卵細胞受精后很快就開始分裂，先是1個受精卵分裂成2個細胞，然后繼續(xù)分裂，直至分裂成有16至32個細胞的細胞團，叫做桑椹胚。這時如果將組成桑椹胚的細胞一一分開，并分別植入到母體的子宮內，則每個細胞都可以發(fā)育成一個完整的胚胎。這種細胞就是胚胎干細胞，屬于全能干細胞。骨髓、臍帶、胎盤和脂肪中則可以獲取組織干細胞。每個人的體內都有一些終生與自己相伴的干細胞。但是，人的年齡越大，干細胞就越少。為了彌補干細胞的不足，一些科學家建議從胚胎或胎兒以及其他動物身上獲取干細胞。進行培養(yǎng)和研究。器官移植干細胞的用途非常廣泛，涉及到醫(yī)學的多個領域。科學家已經能夠在體外鑒別、分離、純化、擴增和培養(yǎng)人體胚胎干細胞，并以這樣的干細胞為“種子”，培育出一些人的組織器官。干細胞及其衍生組織器官的廣泛臨床應用，將產生一種全新的醫(yī)療技術，也就是再造人體正常的甚至年輕的組織器官，從而使人能夠用上自己的或他人的干細胞或由干細胞所衍生出的新的組織器官，來替換自身病變的或衰老的組織器官。假如某位老年人能夠使用上自己或他人嬰幼兒時期或者青年時期保存起來的干細胞及其衍生組織器官，那么，這位老年人的壽命就可以得到明顯的延長。美國《科學》雜志于1999年將干細胞研究列為世界十大科學成就的第一，排在人類基因組測序和克隆技術之前。新加坡國立大學醫(yī)院和中央醫(yī)院通過臍帶血干細胞移植手術，根治了一名因家族遺傳而患上嚴重的地中海貧血癥的男童，這是世界上第一例移植非親屬的臍帶血干細胞而使患者痊愈的手術。醫(yī)生們認為，臍帶血干細胞移植手術并不復雜，就像給患者輸血一樣。由于臍帶血自身固有的特性，使得用臍帶血干細胞進行移植比用骨髓進行移植更加有效。利用造血干細胞移植技術已經逐漸成為治療白血病、各種惡性腫瘤放化療后引起的造血系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)功能障礙等疾病的一種重要手段。科學家預言，用神經干細胞替代已被破壞的神經細胞，有望使因脊髓損傷而癱瘓的病人重新站立起來；不久的將來，失明、帕金森氏綜合癥、艾滋病、老年性癡呆、心肌梗塞和糖尿病等絕大多數疾病的患者，都可望借助干細胞移植手術獲得康復。同胚胎干細胞相比，成人身體上的干細胞只能發(fā)育成20多種組織器官，而胚胎干細胞則能發(fā)育成幾乎所有的組織器官。但是，如果從胚胎中提取干細胞，胚胎就會死亡。因此，倫理道理問題就成為當前胚胎干細胞研究的最大問題之一。美國政府明確反對破壞新的胚胎以獲取胚胎干細胞，美國眾議院甚至提出全面禁止胚胎干細胞克隆研究的法案。美國的一些科學家則對此提出了尖銳的批評，他們認為，將干細胞用于醫(yī)學研究，在減輕患者痛苦方面很有潛力。如果浪費這樣一個絕好的機會，結果將是悲劇性的。生命科學是二十世紀發(fā)展最為迅猛的學科之一，已經成為自然科學中最引人注目的領域。1957年，美國華盛頓大學多納爾?托瑪斯發(fā)現正常人的骨髓移植到病人體內，可以治療造血功能障礙。這一技術的發(fā)現，使多納爾?托瑪斯本人榮獲了諾貝爾獎。這一技術很快得到全世界的認可，并已成為根治白血病等病的主要手段。造血干細胞移植技術的發(fā)現和應用為人類戰(zhàn)勝疾病帶來新的希望。1999年Petersen等發(fā)現肝干細胞和一些肝細胞可能部分來源于骨髓或與骨髓相關。他們通過以下實驗檢測了這一思路：⑴將一雄性大鼠的骨髓移植到致死量照射的同源雌性大鼠，并用DNA探針檢測受鼠肝內有無雄性來源的Y染色體。⑵用表達組織相容性抗原H類抗原L21-6的Lewis大鼠作為受體，不表達L21-6的Brown-Norway大鼠作為供體進行全肝移植，以確定肝外來源的L21-6陽性細胞是否能夠定位于移植的肝臟。他們發(fā)現，在骨髓移植后13天，在肝內檢測到了Y染色體信號，在這一時間卵圓細胞開始分化為肝細胞。如果分化為肝細胞的卵圓細胞來自肝臟，那么將不會有肝細胞表達陽性的Y染色體信號，但結果顯示，一些肝細胞表達明顯的Y染色體信號，表明它們來源于骨髓供體細胞。同樣，在全肝移植后發(fā)現，在移植的肝臟內發(fā)現有明顯的L21-6陽性細胞，表明一些卵圓細胞來源于肝外，而那些來源于肝內的卵圓細胞則L21-6陰性，實驗表明，骨髓中含有能夠分化為肝細胞潛能的干細胞，一些卵圓細胞有可能來源于骨髓。骨髓中的肝前細胞可以用于肝衰竭的移植治療而不必考慮組織相容性抗原的配型問題，因為患者自身的骨髓細胞就可以用于移植。骨髓細胞具有以下優(yōu)點：⑴可以制備富含干細胞的骨髓細胞。⑵通過轉導促進基因能夠增加骨髓來源的肝細胞。⑶可用骨髓來源肝細胞用于生物人工肝；此外HGF也可以通過促進包括骨髓干細胞的肝前細胞分化用于肝硬化治療。自體骨髓干細胞移植治療肝損傷將為肝臟疾病的治療提供新的途徑。疾病治療干細胞治療疾病的基本原理：對組織細胞損傷的修復、替代損傷細胞的功能、刺激機體自身細胞的再生功能。呼吸道疾病自體干細胞免疫治療哮喘、氣管炎、肺氣腫、肺心病等干細胞免疫療法是通過調控細胞因子，修復受損的組織細胞，然后通過細胞間的相互作用及產生細胞因子抑制受損細胞的增殖及其免疫反應，從而發(fā)揮免疫重建的功能。從根本上消除哮喘病的發(fā)病基礎。這些治療方法在觀念上完全不同于傳統(tǒng)的治療方法，主要強調通過修復人體免疫細胞來治療哮喘病等呼吸道疾病。經北京京華友好醫(yī)院現代醫(yī)學臨床證實，干細胞免疫療法對哮喘出現的咳嗽、多痰、胸悶等癥狀有明顯的治療作用。具有療效快、療程短、不易復發(fā)等優(yōu)點，突破了以往“治療見效一一停藥復發(fā)”的弊端。其針對哮喘病特性經過細胞培養(yǎng)實驗室特殊培養(yǎng)的愈喘干細胞，可以增強患者自身免疫力，舒張平滑肌，促進體內新陳代謝，修復呼吸系統(tǒng)損傷，激活肺部細胞再生，全面調理脾肺腎，激活肺部細胞再生修復肺通氣功能，增強肺功能，充足提供肺部供氧，徹底修復肺、氣道粘膜，恢復纖毛的排污能力。經過百余例的臨床案例見證，其治愈率可到98%。后期配合中藥調理，可長效地控制病情，是目前治療哮喘病、氣管炎最理想、最規(guī)范的治療方法。治療腎病干細胞移植治療腎病的原理：因干細胞具有“無限”增殖，多向分化潛能，具有造血支持，免疫調控和自我復制等特點。可作為理想的“種子”細胞用于病變引起的組織器官損傷修復。基礎研究發(fā)現干細胞可分化成腎固有細胞，腎實質細胞等，所以干細胞移植后對腎臟功能具有良好的修復和重建作用。干細胞治療腎病的特性和優(yōu)勢具有強大的增殖能力和多向分化潛能，能夠增殖分化并產生大量后代。低免疫原性。因細胞處于原始狀態(tài)，不易被識別，所以不存在免疫排斥的特性，沒有血型匹配問題。長期傳代不改變生物學特性。可分化成腎固有細胞，肌細胞，肝細胞，成骨細胞，軟骨細胞等多種細胞的能力。正是由于干細胞所具備的這些免疫學特性和優(yōu)勢，使其在腎病治療方面具有廣闊的臨床應用前景。治療腦癱干細胞移植治療小兒腦癱逐漸被人們所熟知。干細胞移植治療小兒腦癱是根據細胞具有自我更新及分化為神經元，星形膠質細胞，少突膠質細胞潛能的神經前體細胞，細胞移植后分化的神經元補充缺損的神經元，并促進小兒腦組織中的神經細胞分化發(fā)揮功能，恢復腦神經的正常生長發(fā)育，改善大腦的認知功能障礙，為腦性癱瘓小兒進一步康復提供了更多的機會，已為先進最有效的治療方法。并且年齡越小，再構成代償能力越強，治療的可能性就越大。盡早干預，治療是預防小兒腦癱致殘的唯一途徑。.自我更新：干細胞具有對稱分裂及不對稱分裂兩種分裂方式，從而保持干細胞庫穩(wěn)定。.多向分化潛能：干細胞可以向神經元、星形膠質細胞和少突膠質細胞分化。低免疫源性：干細胞是未分化的原始細胞，不表達成熟的細胞抗原，不被免疫系統(tǒng)識別。.組織融合性好：可以與宿主的神經組織良好融合，并在宿主體內長期存活。治療自閉癥臍血干細胞和臍帶間充質干細胞具有免疫調節(jié)和改善腦內微循環(huán)的功能。干細胞進入體內可調節(jié)機體免疫功能，并通過自身分化和分泌細胞因子和神經肽刺激新生血管形成，改善腦內缺血缺氧狀態(tài)，激活和修復腦內受損的神經細胞。通過聯合移植臍血單個核細胞和臍帶間充質干細胞有助于改善患兒的語言交流能力、社會交往能力等。生物修復自身免疫性肝病是由自身免疫反應引起的一種特殊類型的慢性肝病，過去認為自身免疫性肝病比較罕見，由于對此類疾病認識不斷深入以及有關免疫學檢查方法和相關檢查方法的引進和提高，臨床上發(fā)現中國人群中自身免疫性肝病的患者不斷增多。臨床常見的自身免疫性肝病包括自身免疫性肝炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化及原發(fā)性硬化性膽管炎，很多自身免疫性肝病患者還伴有其他自身免疫性疾病如干燥綜合癥、類風濕性關節(jié)炎等等。北京304醫(yī)院肝病中心主任帶領的研究小組對自身免疫性肝病的發(fā)病原因、機理及免疫治療對策等方面進行了深入研究。國際會議將自身免疫性肝病確定為非病毒感染性的自身免疫性疾病，病人由于免疫調控功能缺陷，導致機體對自身肝細胞抗原產生反應，傳統(tǒng)治療還是以免疫制劑和激素為主，但無論是免疫抑制治療還是激素沖擊治療，均在早期階段有一定療效，至肝硬化階段，不僅療效不明顯，激素的不良反應也明顯加重。既然同屬自身免疫性疾病，發(fā)病機制也相似，那是否能使用干細胞來進行治療？經過與風濕免疫科醫(yī)生的交流，宮主任決定采用臍帶間充質干細胞移植方案。宮主任說，臍帶間充質干細胞具有免疫調控作用，對自身免疫性疾病能進行組織修復和免疫調節(jié)，從而達到治療疾病的目的，如風濕免疫科已開展的系統(tǒng)性紅斑狼瘡、天皰瘡、內風濕性關節(jié)炎、硬皮病和皮肌炎等，都取得了非常好的效果。ES細胞的應用前景，動物克隆及人類治療性克隆，在轉基因動物中的應用，制備嵌合體動物ES細胞研究面臨的難題，體外培養(yǎng)ES細胞需篩選適宜的培養(yǎng)條件，平衡增殖和分化之間的矛盾，高度未分化，具形成畸胎瘤的可能性，真正用于器官克隆與移植仍需技術上的突破，倫理學分離方法1998年美國有兩個小組分別培養(yǎng)出了人的多能干細胞：JamesA.Thomson在Wisconsin大學領導的研究小組從人胚胎組織中培養(yǎng)出了干細胞株。細胞株。經測試這些細胞株的細胞表面marker和酶活性，證實它們就是全能干細胞。目前胚胎干細胞來源主要是胚泡內細胞群和生殖嵴中的原始生殖細胞免疫學方法：干細胞表面有許多特殊標記，利用這些標記，采用熒光細胞分離器從單細胞懸液中的分離純化干細胞。免疫外科方法：該方法基本原理是利用囊胚腔對抗體的不通透性，通過抗體、補體結合對細胞的毒性殺傷作用，去除滋養(yǎng)層細胞，保留CIM進行培養(yǎng)。組織培養(yǎng)：將4-6天的胚胎取出培養(yǎng)，滋養(yǎng)層在培養(yǎng)皿底部平鋪生長，而CIM形成卵圓柱裝結構，在顯微鏡下用玻璃針挑出這種柱狀結構，消化傳代顯微外科學法：利用顯微鏡直接將CIM從胚泡中吸出進行培養(yǎng)。倫理之爭盡管人胚胎干細胞有著巨大的醫(yī)學應用潛力，但圍繞該研究的倫理道德問題也隨之出現。這些問題主要包括人胚胎干細胞的來源是否合乎法律及道德，應用潛力是否會引起倫理及法律問題。從體外受精人胚中獲得的ES細胞在適當條件下能否發(fā)育成人？干細胞要是來自自愿終止妊娠的孕婦該如何辦？為獲得ES細胞而殺死人胚是否道德?