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DNA的變性和復性高中生物學選擇性必修三提到,DNA擴增每一次循環一般可分為變性、復性和延伸三步:那么,DNA如何變性和復性?影響因素有哪些?蛋白質和DNA都是生物大分子,都有空間結構,但兩者之間還是有一定的區別,如蛋白質的空間結構多種多樣,而雙鏈DNA的空間結構都是雙螺旋結構,并沒有表現出DNA空間結構的多樣性。同樣,蛋白質的變性和DNA的變性也有很大區別。1.DNA的變性DNA雙鏈之間以氫鍵連接,氫鍵是一種次級鍵,能量較低,易受破壞,在某些理化因素作用下,DNA分子互補堿基對之間的氫鍵斷裂,使DNA雙螺旋結構松散,變成單鏈,即為DNA變性。DNA變性只涉及二級結構改變,不伴隨一級共價鍵的斷裂。加熱、低鹽及強酸、強堿均可使DNA變性。NA的變性從開始到解鏈完全,是在一個相當窄的溫度內完成的,在這一范圍內,紫外光吸收值增加達到最大增加值的50%時的溫度叫做DNA的解鏈溫度(Tm)。一種DNA分子的Tm值的大小與其所含堿基中的G+C的比例相關也與DNA分子大小及變性條件有關,G+C的比例越高,DNA分子越長,溶液離子強度越高,Tm值越大。Tm不僅與DNA本身性質有關,而且與溶液的條件有關,通常溶液的離子強度較低時,Tm值較低,融點范圍也較寬,離子強度增高時,Tm值較高,融點范圍也變窄。因此,DNA制劑不應保存在離子強度過低的溶液中,一般保存在1mol/lNaCl溶液中較穩定。那么為什么離子強度越強,DNA解鏈溫度越高?穩定DNA雙螺旋結構的一個重要因素就是堿基堆積力(比氫鍵更重要),堿基層層堆積,內部形成疏水核心。離子強度高,即溶液極性大,堿基對的疏水作用力會增加,堿基堆積力更大,結構更穩定。此外,離子強度高,也可以降低DNA骨架上磷酸負離子的排斥作用,結構會更穩定。2.DNA的復性變性DNA在適當條件下,兩條互補鏈可重新恢復天然的雙螺旋構象,這種現象稱為復性。熱變性的DNA經緩慢冷卻后即可復性,并維持在比Tm低25~30℃左右時,變性后的單鏈DNA即可恢復雙螺旋結構,因此這一過程也叫退火,一般認為,比Tm值低25℃的溫度是DNA復性的最佳條件。DNA復性的實際應用——分子雜交:通過變性DNA的復性性質,我們可知道,DNA單鏈之間、RNA單鏈之間、一條DNA和一條RNA鏈之間只要存在序列互補配對區域,不管是整條鏈互補,還是部分序列互補,即可重新形成整條雙鏈或部分雙鏈,這即為核酸分子雜交,這在分子生物學研究中有極大的應用,如可用于在基因組中對特異基因的定位及檢測,PCR技術擴增目的基因等。例、在一定溫度下,DNA雙鏈會解鏈成單鏈,即發生DNA變性。Tm是DNA的雙螺旋有一半發生熱變性時相應的溫度。如圖表示DNA分子中的G-C含量與DNA的Tm之間的關系曲線(EDTA對DNA分子具有保護作用),下列敘述中錯誤的是()A.DNA的Tm值受到G-C含量的影響B.DNA的Tm值受到離子濃度的影響C.雙鏈DNA熱變性與解旋酶的催化作用有關D.雙鏈DNA熱變性后不改變其中的遺傳信息解析:分析曲線圖:DNA分子中的G-C含量越高,Tm(DNA的雙螺旋有一半發生熱變性時相應的溫度)越高,兩者呈正相關;0.15MNaCl所在的曲線比0.01MNaCl所在的曲線高,說明DNA的Tm值受到NaCl濃度的影響,題干和題圖均沒有涉及到解旋酶。DNA分子中的G-C含量越高,Tm越高,說明DNA的Tm值受到G-C含量的影響,A正確;0.15MNaCl所在的曲線與0.01MNaCl所在的曲線不重疊,說明DNA的Tm

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