藥物分析

PharmaceuticalAnalysis藥物分析

PharmaceuticalAnalysis1第六章

芳酸類非甾體抗炎藥物的分析

典型藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

鑒別試驗特殊雜質(zhì)及其檢查法含量測定4123體內(nèi)藥物分析5第六章

芳酸類非甾體抗炎藥物的分析典型藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)鑒2第六章熟悉:

主要芳酸類非甾體抗炎藥物雜質(zhì)的結(jié)構(gòu),危害,檢查方法與限度了解:

影響芳酸類非甾體抗炎藥物穩(wěn)定性的主要因素,體內(nèi)樣品與臨床監(jiān)測掌握:

芳酸類非甾體抗炎藥的結(jié)構(gòu)和性質(zhì); 主要芳酸類藥物的鑒別,檢查和含量測定的原理與特點第六章熟悉:主要芳酸類非甾體抗炎藥物雜質(zhì)的結(jié)構(gòu),危害,檢查3概述結(jié)構(gòu)特點藥物特點理化特性分析方法作用臨床基本結(jié)構(gòu)基本性質(zhì)鑒別,檢查含量測定;體內(nèi)分析抗炎,抗風(fēng)濕,

止痛,退熱關(guān)節(jié)炎,發(fā)熱,

慢性疼痛芳基取代羧酸游離羧基和苯環(huán)酸性;水解性;

光譜特性基團(酚)/元素(硫)特性Fe3+;UV,IR,LC中間體或水解產(chǎn)物酸堿滴定;UV;HPLC體內(nèi)過程與分析非甾體抗炎藥(NSAIDs)是一類不含有甾體骨架的抗炎藥,是目前臨床使用最多的藥物種類之一概述結(jié)構(gòu)特點藥物特點理化特性分析方法作用臨床基本結(jié)構(gòu)基本性質(zhì)4第一節(jié)

典型藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、典型藥物與結(jié)構(gòu)特點

二、主要理化性質(zhì)第一節(jié)

典型藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、典型藥物與結(jié)構(gòu)特點二、主要5一、典型藥物與結(jié)構(gòu)特點

羧基狀態(tài)

游離: 水楊酸,阿司匹林,雙水楊酯,二氟尼柳, 甲芬那酸,布洛芬,酮洛芬,萘普生,吲哚美辛鹽/酯:雙氯芬酸鈉,雙水楊酯酰胺: 吡羅昔康,美洛昔康具有苯環(huán)和羧基(分類見表6-1)水楊酸阿司匹林雙水楊酯二氟尼柳一、典型藥物與結(jié)構(gòu)特點羧基狀態(tài)游離: 水楊酸,阿司匹林,6一、典型藥物與結(jié)構(gòu)特點

苯環(huán)結(jié)構(gòu)特征鄰羥基苯甲酸:

水楊酸,阿司匹林,雙水楊酯,二氟尼柳鄰胺基苯甲酸:

甲芬那酸二苯甲酮:

酮洛芬羥基不飽和酮:

吡羅昔康,美洛昔康雜環(huán):

吲哚美辛,吡羅昔康,美洛昔康特殊元素:二氟尼柳(氟);雙氯芬酸鈉/吲哚美辛(氯)

吡羅/美洛昔康(硫)

結(jié)構(gòu)上不屬于芳酸類的藥物：尼美舒利：甲磺酰基對乙酰氨基酚：苯胺對乙酰氨基酚尼美舒利一、典型藥物與結(jié)構(gòu)特點苯環(huán)結(jié)構(gòu)特征鄰羥基苯甲酸:水楊酸7二、主要理化性質(zhì)(一)酸性酸性強度受苯環(huán)取代位置及苯環(huán)上其他取代基的影響:鄰位效應(yīng)：阿司匹林＞苯甲酸酸性分子內(nèi)氫鍵：水楊酸＞阿司匹林pKa=3.492.954.26二、主要理化性質(zhì)(一)酸性酸性強度受苯環(huán)取代位置8二、主要理化性質(zhì)

(一)酸性雙氯芬酸,布洛芬,酮洛芬,萘普生,吲哚美辛: 羧基不與苯環(huán)直接相連,酸性較弱吡羅昔康,美洛昔康,尼美舒利,對乙酰氨基酚: 酰胺結(jié)構(gòu),無明顯酸性

較強酸性:原料藥可在中性乙醇或甲醇,丙酮等 水溶性有機溶劑中,用氫氧化鈉直接滴定二、主要理化性質(zhì)(一)酸性雙氯芬酸,布洛芬,酮洛芬,萘普9二、主要理化性質(zhì)

(二)水解性酯鍵:

阿司匹林/雙水楊酯酰胺鍵:

吲哚美辛,吡羅昔康,美洛昔康,尼美舒利, 對乙酰氨基酚水解反應(yīng)及其產(chǎn)物的特性反應(yīng)——鑒別水解可快速,定量——含量測定(剩余堿量法)美洛昔康——定量過量的氫氧化鈉水解 剩余的氫氧化鈉用鹽酸回滴定美洛昔康二、主要理化性質(zhì)(二)水解性酯鍵: 阿司匹林/雙水楊酯美10二、主要理化性質(zhì)

(三)吸收光譜特性紫外特征光譜:

鑒別;含量均勻度,溶出度/釋放度紅外特征光譜

:

鑒別酮洛芬酚羥基:

對乙酰氨基酚,水楊酸與Fe3+顯色——鑒別

二苯甲酮:

酮洛芬與苯肼縮合顯色——鑒別

硫: 美洛昔康熱分解后產(chǎn)生的硫化氫 與醋酸鉛生成黑色硫化鉛——鑒別(四)基團/元素特性美洛昔康二、主要理化性質(zhì)(三)吸收光譜特性紫外特征光譜: 鑒別11第二節(jié)

鑒別試驗一、與三氯化鐵反應(yīng)二、縮合反應(yīng)三、重氮化-偶合反應(yīng)四、氧化反應(yīng)五、水解反應(yīng)六、特征元素反應(yīng)七、光譜法八、色譜法第二節(jié)

鑒別試驗一、與三氯化鐵反應(yīng)12一、與三氯化鐵反應(yīng)中性或弱酸性(pH值4~6)條件下進行,強酸性溶液中配位化合物分解阿司匹林加水煮沸雙水楊酯在氫氧化鈉試液中煮沸水解生成水楊酸鈉,與三氯化鐵試液顯紫色二氟尼柳于乙醇中與三氯化鐵試液呈深紫色1.水楊酸反應(yīng)二氟尼柳阿司匹林雙水楊酯紫堇色紫堇色一、與三氯化鐵反應(yīng)中性或弱酸性(pH值4~6)條件下進行,13一、與三氯化鐵反應(yīng)對乙酰氨基酚:水溶液加三氯化鐵試液顯藍紫色吡羅昔康(三氯甲烷):與三氯化鐵顯玫瑰紅色美洛昔康顯淡紫紅色

烯醇式羥基具有酚羥基性質(zhì),與FeCl3生成紅色配位化合物2.酚羥基反應(yīng)美洛昔康一、與三氯化鐵反應(yīng)對乙酰氨基酚:水溶液加三氯化鐵試液顯藍紫色14二、縮合反應(yīng)酮洛芬的二苯甲酮,在酸性下與二硝基苯肼縮合生成橙色沉淀（腙）二、縮合反應(yīng)酮洛芬的二苯甲酮,在酸性下與二硝基苯肼縮合生成15三、重氮化-偶合反應(yīng)對乙酰氨基酚酸中水解生成對氨基酚,游離芳伯氨基與亞硝酸鈉試液重氮化,重氮鹽再與堿性β-萘酚偶合生成紅色偶氮化合物三、重氮化-偶合反應(yīng)對乙酰氨基酚酸中水解生成對氨基酚,游離16四、氧化反應(yīng)甲芬那酸:溶于硫酸,被重鉻酸鉀氧化顯深藍色→隨即變?yōu)樽鼐G色吲哚美辛:溶液在硫酸酸性下與重鉻酸鉀溶液共熱,被氧化顯紫色在鹽酸溶液中與亞硝酸鈉溶液反應(yīng)顯綠色,放置后漸變黃色四、氧化反應(yīng)甲芬那酸:溶于硫酸,被重鉻酸鉀氧化顯深藍色→17五、水解反應(yīng)阿司匹林,水解得水楊酸鈉與醋酸鈉,酸化生成水楊酸白色沉淀;并發(fā)生醋酸的臭氣雙水楊酯水解后酸化,生成白色水楊酸沉淀;2CH3COONa+H2SO4→2CH3COOH+Na2SO4五、水解反應(yīng)阿司匹林,水解得水楊酸鈉與醋酸鈉,酸化生成水18六、特征元素的反應(yīng)氯的鑒別——與堿共熱分解產(chǎn)生氯化物,顯氯化物的鑒別反應(yīng)雙氯芬酸鈉:與碳酸鈉熾灼灰化,加水煮沸,濾過,濾液顯氯化物鑒別反應(yīng)

硫的鑒別——經(jīng)高溫分解產(chǎn)生硫化氫氣體,遇醋酸鉛生成硫化鉛黑色沉淀美洛昔康:試管中熾灼,產(chǎn)生的氣體使?jié)駶櫟拇姿徙U試紙顯黑色六、特征元素的反應(yīng)氯的鑒別——與堿共熱分解產(chǎn)生氯化物,顯氯19七、光譜法(一)紫外-可見分光光度法最大吸收波長法:雙氯芬酸鈉溶液:276nm有最大吸收吡羅昔康片,含量測定溶液:243與334nm最大吸收最大與最小吸收波長法:布洛芬及制劑氫氧化鈉溶液:265,273nm最大吸收245,271nm最小吸收259nm肩峰

七、光譜法(一)紫外-可見分光光度法20七、光譜法(一)紫外-可見分光光度法吸光度法:甲芬那酸鹽酸-甲醇溶液:279與350nm最大吸收吸光度(20μg/ml)分別:0.69~0.74與0.56~0.60吸光度比值法:二氟尼柳鹽酸-乙醇溶液:251與315nm最大吸收吸光度比值應(yīng)為4.2~4.6

七、光譜法(一)紫外-可見分光光度法21七、光譜法(二)紅外分光光度法 阿司匹林

峰位(cm-1)歸屬3300~2300vO-H(羧基)1760,1690vC=O(羧酸酯和羧酸)1610,1570,1480,1460vC=C(苯環(huán))1310,1230,1180vC-O(羧酸酯和羧酸)775δAr-H(鄰位取代苯環(huán))3300~23001760,16901610~14601310~1180775七、光譜法(二)紅外分光光度法峰位(cm-1)歸屬330022八、色譜法(一)薄層色譜法個別藥物制劑采用溶劑提取法去除輔料后IR鑒別;部分藥物制劑采用TLC鑒別:二氟尼柳,美洛昔康等

(二)高效液相色譜法隨著HPLC在藥物制劑含量測定中的大量應(yīng)用,更多應(yīng)用HPLC進行制劑的鑒別:阿司匹林等多種制劑均直接取含量測定項下記錄的HPLC色譜圖進行鑒別

當TLC和HPLC均有收載時:二者可任選其一 如美洛昔康片的鑒別八、色譜法(一)薄層色譜法23藥物名稱特殊雜質(zhì)游離水楊酸與有關(guān)物質(zhì)/FeCl3阿司匹林/雙水楊酯甲芬那酸二氟尼柳第三節(jié)

特殊雜質(zhì)及其檢查法2.3-二甲基苯胺有關(guān)物質(zhì)

6-甲氧基-2-萘乙酮

氨基酚和對氯苯乙酰胺A.TLC;B.HPLCGC萘普生對乙酰氨基酚藥物名稱特殊雜質(zhì)游離水楊酸與有關(guān)物質(zhì)/FeCl3阿司匹林/雙24一、阿司匹林與雙水楊酯(一)阿司匹林與雙水楊酯的合成一、阿司匹林與雙水楊酯(一)阿司匹林與雙水楊酯的合成25一、阿司匹林與雙水楊酯(二)阿司匹林中游離水楊酸與有關(guān)物質(zhì)游離水楊酸:

酚羥基易被空氣(氧)逐漸氧化生成淡黃,紅棕至深棕色醌型化合物為什么要檢查游離水楊酸？一、阿司匹林與雙水楊酯(二)阿司匹林中游離水楊酸與有關(guān)物質(zhì)26游離水楊酸檢查方法：ChP用水楊酸與Fe3+生成紫堇色配離子的原理,用稀硫酸鐵銨溶液顯色法檢查

供試品溶液制備過程中阿司匹林水解ChP2010采用1%冰醋酸甲醇溶液制備供試品溶液(防阿司匹林水解);并用RP-HPLC檢查原料藥和制劑均要檢查游離水楊酸！游離水楊酸檢查方法：ChP用水楊酸與Fe3+生成紫堇272.有關(guān)物質(zhì):阿司匹林中“有關(guān)物質(zhì)”系指除“游離水楊酸”外的合成原料(苯酚)及副產(chǎn)物2.有關(guān)物質(zhì):阿司匹林中“有關(guān)物質(zhì)”系指除“游離水楊酸”外282.有關(guān)物質(zhì):阿司匹林

水楊酸

乙酰水楊酰水楊酸a:阿司匹林供試品(10mg/ml)；b:0.5%自身對照(50g/ml)；c:水楊酸對照(10g/ml)；d:e:空白2.有關(guān)物質(zhì):阿司匹林a:阿司匹林供試品(10mg/ml)29一、阿司匹林與雙水楊酯(三)雙水楊酯中游離水楊酸利用水楊酸與三價鐵生成有色配離子的原理,用硝酸鐵溶液顯色,在530nm的波長處測定吸光度,限度為0.5%;雙水楊酯片同法檢查,限度為1.5%

一、阿司匹林與雙水楊酯(三)雙水楊酯中游離水楊酸利用水楊酸30二、甲芬那酸(一)合成工藝甲芬那酸主要以鄰-氯苯甲酸(o-chloroben-zoicacid)和2,3-二甲基苯胺(2,3-dimethyl-aniline)為原料,在銅的催化下縮合而成二、甲芬那酸(一)合成工藝甲芬那酸主要以鄰-氯苯甲酸(o31二、甲芬那酸(二)2,3-二甲基苯胺的檢查ChP曾采用HPLC法檢查: 單一雜質(zhì)的限量為0.1% 雜質(zhì)總量為0.5%ChP2010規(guī)定

HPLC法檢查:“有關(guān)物質(zhì)”

GC檢查:2,3-二甲基苯胺(0.01%)二、甲芬那酸(二)2,3-二甲基苯胺的檢查ChP曾采用32三、二氟尼柳(一)合成工藝原料(I)

:2,4-二氟苯胺中間體(II):2,4-二氟聯(lián)苯中間體(III)

:4-(2',4'-二氟苯基)苯乙酮中間體(IV)

:4-(2',4'-二氟苯基)苯酚乙酯中間體(V):4-(2‘,4’-二氟苯基)苯酚產(chǎn)品(VI):二氟尼柳三、二氟尼柳(一)合成工藝原料(I):2,4-二氟苯33三、二氟尼柳(二)有關(guān)物質(zhì)A和B的檢查1.有關(guān)物質(zhì)A的檢查——TLC(正相): 極性較小的雜質(zhì) 單1雜質(zhì)的限量為0.5%2.有關(guān)物質(zhì)B的檢查——HPLC(反相): 極性較大的雜質(zhì) 各面積的和為0.5%三、二氟尼柳(二)有關(guān)物質(zhì)A和B的檢查1.有關(guān)物質(zhì)A34四、萘普生

(一)合成工藝原料(I)

:2-萘甲醚中間體(II):6-甲氧基-2-乙酰萘(6-甲氧基-2-萘乙酮)中間體(III):2-羥基-2-(6-甲氧基-2-萘基)丙酸產(chǎn)品(IV):萘普生

四、萘普生(一)合成工藝原料(I):2-萘甲醚35四、萘普生(二)6-甲氧基-2-萘乙酮及其它有關(guān)物質(zhì)1.溶液制備供試品溶液:0.5mg/ml流動相溶液對照品溶液:6-甲氧基-2-萘乙酮(雜質(zhì)I),

50μg/ml對照溶液:供試品溶液1ml+對照品溶液2ml→200ml2.限度

雜質(zhì)I:

不得大于雜質(zhì)I峰面積(0.1%)

其他單個雜質(zhì):

不得大于雜質(zhì)I峰面積的2倍(0.2%)各雜質(zhì)總量:

不得大于對照溶液中萘普生峰面積(0.5%)

四、萘普生(二)6-甲氧基-2-萘乙酮及其它有關(guān)物質(zhì)1.36五、對乙酰氨基酚

(一)合成工藝(二)有關(guān)雜質(zhì):

對硝基酚,對氨基酚,對氯苯胺,對氯苯乙酰胺,o-乙酰 基對乙酰氨基酚,偶氮苯,氧化偶氮苯,苯醌和醌亞胺1.對氨基酚及(其它)有關(guān)物質(zhì)——HPLC對氨基酚:0.005%有關(guān)物質(zhì):單個0.1%;總量0.5%2.

對氯苯乙酰胺(極性較小)——HPLC(0.005%)

五、對乙酰氨基酚(一)合成工藝(二)有關(guān)雜質(zhì):137第四節(jié)

含量測定一、酸堿滴定法二、紫外-可見分光光度法三、高效液相色譜法第四節(jié)

含量測定一、酸堿滴定法二、紫外-可見分光光38一、酸堿滴定法（原料藥）酸堿滴定法水解后剩余量滴定法阿司匹林

USP,BP,JP非水溶液滴定法吡羅昔康具有吡啶環(huán),顯堿性,可在冰醋酸溶液中用高氯酸滴定液滴定

剩余量滴定法美洛昔康水及與水混溶的有機溶劑中難溶,溶于氫氧化鈉滴定液后鹽酸回滴定

直接滴定法水楊酸,阿司匹林,雙水楊酯,二氟尼柳,甲芬那酸,布洛芬,酮洛芬,萘普生,尼美舒利一、酸堿滴定法（原料藥）酸堿水解后剩余量滴定法阿司匹林非水39(一)直接滴定法1.測定法本品約0.4g,精密稱定,加中性乙醇(對酚酞指示液顯中性)20ml溶解后,加酚酞指示液3滴,用氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)滴定T=18.02mg2.討論中性乙醇：對所選用的指示劑顯中性的乙醇目的：a.

乙醇：溶解樣品，減少水解b.中性：消除乙醇中對酚酞顯酸性物質(zhì)的影響滴定在不斷振搖下稍快進行,防阿司匹林水解受阿司匹林的水解產(chǎn)物水楊酸及醋酸的干擾(一)直接滴定法1.測定法40(二)剩余量滴定法1.原理美洛昔康含有與羰基共軛的烯醇式羥基,具有羧酸性質(zhì),可用氫氧化鈉滴定液滴定本品甲醇,乙醇,丙酮及水中難溶,定量過量的氫氧化鈉滴定液溶解后,用鹽酸滴定液回滴定2.測定法本品約0.4g,精密稱定,精密加氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)25ml,微溫溶解,加中性乙醇(對溴麝香草酚藍指示液顯中性)100ml與指示液10滴,用鹽酸滴定液(0.1mol/L)滴定;T=35.14mg美洛昔康(二)剩余量滴定法1.原理美洛昔康41(三)水解后剩余量滴定法1.原理阿司匹林酯結(jié)構(gòu)在堿性溶液中易水解,加入定量過量的氫氧化鈉滴定液,加熱使酯鍵水解后,再用硫酸滴定液回滴定剩余的氫氧化鈉滴定液

2NaOH+H2SO4→Na2SO4+2H2O2.測定法(USP32-NF27)本品約1.5g,精密稱定,加氫氧化鈉滴定液(0.5mol/L)50.0ml,緩緩煮沸10min,放冷,加酚酞指示液,用硫酸滴定液(0.25mol/L)滴定，并將滴定結(jié)果用空白試驗校正。T=45.40mg為什么要做空白試驗？(三)水解后剩余量滴定法1.原理42(三)水解后剩余量滴定法3.兩步滴定法——水解后剩余量滴定法的改進阿司匹林片劑:水解產(chǎn)物水楊酸及醋酸;穩(wěn)定劑酒石酸或枸櫞酸兩步滴定法:第1步:中和,中和干擾物和阿司匹林的游離羧基第2步:水解與滴定,水解后剩余量滴定法阿司匹林片含量測定方法(ChP2005)如下:

本品10片,精密稱定,研細,精密稱取片粉(阿司匹林0.3g),中性乙醇(酚酞指示液顯中性)20ml,振搖,加指示液3滴,滴加氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)至溶液顯粉紅色,精密加氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)40ml,加熱15min,放冷,用硫酸滴定液(0.05mol/L)滴定;并將滴定結(jié)果用空白試驗校正。T=18.02mg(三)水解后剩余量滴定法3.兩步滴定法——水解后剩余量滴43第一步中和第一步中和44第二步水解后剩余滴定水解：

剩余滴定：2NaOH（過量）＋H2SO4

＝Na2SO4＋2H2O

反應(yīng)摩爾比為1∶1優(yōu)點：本法消除了酸性雜質(zhì)的干擾，降低了酯鍵水解的干擾

第二步水解后剩余滴定水解：剩余滴定：2NaOH（過量45(三)水解后剩余量滴定法含量計算 供試品中阿司匹林的含量,由水解時消耗的堿量計算第1步:中和時,阿司匹林的游離羧酸中和第2步:水解后剩余量滴定法時阿司匹林與氫氧化鈉反應(yīng)的摩爾比為1:1滴定度:T=0.1×(1/1)×180.16=18.02(mg/m1)片劑含量:(三)水解后剩余量滴定法含量計算46(四)非水溶液滴定法1.原理吡羅昔康具有吡啶環(huán),顯堿性,可在冰醋酸溶液中用高氯酸滴定液滴定2.測定法本品約0.2g,精密稱定,加冰醋酸20ml使溶解,加結(jié)晶紫指示液1滴,用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液顯藍綠色,并將滴定的結(jié)果用空白試驗校正T=33.14mg/ml(四)非水溶液滴定法1.原理47二、紫外-可見分光光度法(一)直接分光光度法二氟尼柳,美洛昔康,尼美舒利制劑,對乙酰氨基酚及其部分制劑;二氟尼柳膠囊含量測定:精密稱取內(nèi)容物適量(二氟尼柳0.1g),置100ml量瓶,加溶劑(0.1mol/L的鹽酸乙醇溶液)適量,超聲處理10min,用溶劑稀釋至刻度,搖勻,濾過,精密量取續(xù)濾液5ml,置l00ml量瓶,用溶劑稀釋至刻度,搖勻,在315nm的波長處測定吸光度;另取二氟尼柳對照品,用溶劑溶解并定量稀釋制成每1ml中約含50μg的溶液作為對照品溶液,同法測定,計算式中,D為供試品溶液稀釋體積(ml,

D=100100/5=2000);標示量為膠囊劑的規(guī)格(mg/粒)

二、紫外-可見分光光度法(一)直接分光光度法48二、紫外-可見分光光度法(二)柱分配色譜-紫外分光光度法

USP32-NF27則采用柱色譜分離法消除阿司匹林膠囊和栓劑中輔料及降解產(chǎn)物的干擾柱分配色譜-紫外分光光度法不需特殊儀器,結(jié)果重現(xiàn)性較好,但操作較繁瑣二、紫外-可見分光光度法(二)柱分配色譜-紫外分光光度法49阿司匹林的含量測定填充劑：硅藻土+NaHCO3除去中性，堿性雜質(zhì)上樣樣品的三氯甲烷溶液，水楊酸、阿司匹林均生成鈉鹽，保留柱上洗脫1.三氯甲烷2.冰醋酸-三氯甲烷阿司匹林游離，被洗脫，收集280nm處測定供試液和標準溶液吸光度，計算含量酸性強弱:水楊酸＞醋酸＞阿司匹林阿司匹林的含量測定除去中性，堿性雜質(zhì)上樣樣品的三氯甲烷溶液，50三、高效液相色譜法阿司匹林栓的含量測定:

（離子抑制色譜）取本品5粒,精密稱定,置小燒杯中,在40~50℃水浴上微溫熔融,在不斷攪拌下冷卻至室溫,精密稱取適量(阿司匹林0.1g),置50ml量瓶中,加溶劑(1%冰醋酸的甲醇溶液)適量,在40~50℃水浴中充分振搖使阿司匹林溶解,放冷,用溶劑稀釋至刻度,搖勻,置冰浴中冷卻1小時,取出,迅速濾過,取續(xù)濾液作為供試品貯備液;精密量取供試品貯備液5ml,置100ml量瓶中,用溶劑稀釋至刻度,搖勻,精密量取10μl進樣分析;按外標法以峰面積計算流動相（乙腈-四氫呋喃-冰醋酸-水（20:5:5:70））中添加冰醋酸是為抑制阿司匹林的解離,消除色譜峰拖尾;同時,流動相及供試液中的醋酸也可抑制阿司匹林的水解D為稀釋體積(ml,D=50100/5=1000);標示量為栓劑規(guī)格(mg/支)

三、高效液相色譜法阿司匹林栓的含量測定:（離子抑制色譜）51ThankYou!ThankYou!52藥物分析

PharmaceuticalAnalysis藥物分析

PharmaceuticalAnalysis53第六章

芳酸類非甾體抗炎藥物的分析

典型藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

鑒別試驗特殊雜質(zhì)及其檢查法含量測定4123體內(nèi)藥物分析5第六章

芳酸類非甾體抗炎藥物的分析典型藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)鑒54第六章熟悉:

主要芳酸類非甾體抗炎藥物雜質(zhì)的結(jié)構(gòu),危害,檢查方法與限度了解:

影響芳酸類非甾體抗炎藥物穩(wěn)定性的主要因素,體內(nèi)樣品與臨床監(jiān)測掌握:

芳酸類非甾體抗炎藥的結(jié)構(gòu)和性質(zhì); 主要芳酸類藥物的鑒別,檢查和含量測定的原理與特點第六章熟悉:主要芳酸類非甾體抗炎藥物雜質(zhì)的結(jié)構(gòu),危害,檢查55概述結(jié)構(gòu)特點藥物特點理化特性分析方法作用臨床基本結(jié)構(gòu)基本性質(zhì)鑒別,檢查含量測定;體內(nèi)分析抗炎,抗風(fēng)濕,

止痛,退熱關(guān)節(jié)炎,發(fā)熱,

慢性疼痛芳基取代羧酸游離羧基和苯環(huán)酸性;水解性;

光譜特性基團(酚)/元素(硫)特性Fe3+;UV,IR,LC中間體或水解產(chǎn)物酸堿滴定;UV;HPLC體內(nèi)過程與分析非甾體抗炎藥(NSAIDs)是一類不含有甾體骨架的抗炎藥,是目前臨床使用最多的藥物種類之一概述結(jié)構(gòu)特點藥物特點理化特性分析方法作用臨床基本結(jié)構(gòu)基本性質(zhì)56第一節(jié)

典型藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、典型藥物與結(jié)構(gòu)特點

二、主要理化性質(zhì)第一節(jié)

典型藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)一、典型藥物與結(jié)構(gòu)特點二、主要57一、典型藥物與結(jié)構(gòu)特點

羧基狀態(tài)

游離: 水楊酸,阿司匹林,雙水楊酯,二氟尼柳, 甲芬那酸,布洛芬,酮洛芬,萘普生,吲哚美辛鹽/酯:雙氯芬酸鈉,雙水楊酯酰胺: 吡羅昔康,美洛昔康具有苯環(huán)和羧基(分類見表6-1)水楊酸阿司匹林雙水楊酯二氟尼柳一、典型藥物與結(jié)構(gòu)特點羧基狀態(tài)游離: 水楊酸,阿司匹林,58一、典型藥物與結(jié)構(gòu)特點

苯環(huán)結(jié)構(gòu)特征鄰羥基苯甲酸:

水楊酸,阿司匹林,雙水楊酯,二氟尼柳鄰胺基苯甲酸:

甲芬那酸二苯甲酮:

酮洛芬羥基不飽和酮:

吡羅昔康,美洛昔康雜環(huán):

吲哚美辛,吡羅昔康,美洛昔康特殊元素:二氟尼柳(氟);雙氯芬酸鈉/吲哚美辛(氯)

吡羅/美洛昔康(硫)

結(jié)構(gòu)上不屬于芳酸類的藥物：尼美舒利：甲磺酰基對乙酰氨基酚：苯胺對乙酰氨基酚尼美舒利一、典型藥物與結(jié)構(gòu)特點苯環(huán)結(jié)構(gòu)特征鄰羥基苯甲酸:水楊酸59二、主要理化性質(zhì)(一)酸性酸性強度受苯環(huán)取代位置及苯環(huán)上其他取代基的影響:鄰位效應(yīng)：阿司匹林＞苯甲酸酸性分子內(nèi)氫鍵：水楊酸＞阿司匹林pKa=3.492.954.26二、主要理化性質(zhì)(一)酸性酸性強度受苯環(huán)取代位置60二、主要理化性質(zhì)

(一)酸性雙氯芬酸,布洛芬,酮洛芬,萘普生,吲哚美辛: 羧基不與苯環(huán)直接相連,酸性較弱吡羅昔康,美洛昔康,尼美舒利,對乙酰氨基酚: 酰胺結(jié)構(gòu),無明顯酸性

較強酸性:原料藥可在中性乙醇或甲醇,丙酮等 水溶性有機溶劑中,用氫氧化鈉直接滴定二、主要理化性質(zhì)(一)酸性雙氯芬酸,布洛芬,酮洛芬,萘普61二、主要理化性質(zhì)

(二)水解性酯鍵:

阿司匹林/雙水楊酯酰胺鍵:

吲哚美辛,吡羅昔康,美洛昔康,尼美舒利, 對乙酰氨基酚水解反應(yīng)及其產(chǎn)物的特性反應(yīng)——鑒別水解可快速,定量——含量測定(剩余堿量法)美洛昔康——定量過量的氫氧化鈉水解 剩余的氫氧化鈉用鹽酸回滴定美洛昔康二、主要理化性質(zhì)(二)水解性酯鍵: 阿司匹林/雙水楊酯美62二、主要理化性質(zhì)

(三)吸收光譜特性紫外特征光譜:

鑒別;含量均勻度,溶出度/釋放度紅外特征光譜

:

鑒別酮洛芬酚羥基:

對乙酰氨基酚,水楊酸與Fe3+顯色——鑒別

二苯甲酮:

酮洛芬與苯肼縮合顯色——鑒別

硫: 美洛昔康熱分解后產(chǎn)生的硫化氫 與醋酸鉛生成黑色硫化鉛——鑒別(四)基團/元素特性美洛昔康二、主要理化性質(zhì)(三)吸收光譜特性紫外特征光譜: 鑒別63第二節(jié)

鑒別試驗一、與三氯化鐵反應(yīng)二、縮合反應(yīng)三、重氮化-偶合反應(yīng)四、氧化反應(yīng)五、水解反應(yīng)六、特征元素反應(yīng)七、光譜法八、色譜法第二節(jié)

鑒別試驗一、與三氯化鐵反應(yīng)64一、與三氯化鐵反應(yīng)中性或弱酸性(pH值4~6)條件下進行,強酸性溶液中配位化合物分解阿司匹林加水煮沸雙水楊酯在氫氧化鈉試液中煮沸水解生成水楊酸鈉,與三氯化鐵試液顯紫色二氟尼柳于乙醇中與三氯化鐵試液呈深紫色1.水楊酸反應(yīng)二氟尼柳阿司匹林雙水楊酯紫堇色紫堇色一、與三氯化鐵反應(yīng)中性或弱酸性(pH值4~6)條件下進行,65一、與三氯化鐵反應(yīng)對乙酰氨基酚:水溶液加三氯化鐵試液顯藍紫色吡羅昔康(三氯甲烷):與三氯化鐵顯玫瑰紅色美洛昔康顯淡紫紅色

烯醇式羥基具有酚羥基性質(zhì),與FeCl3生成紅色配位化合物2.酚羥基反應(yīng)美洛昔康一、與三氯化鐵反應(yīng)對乙酰氨基酚:水溶液加三氯化鐵試液顯藍紫色66二、縮合反應(yīng)酮洛芬的二苯甲酮,在酸性下與二硝基苯肼縮合生成橙色沉淀（腙）二、縮合反應(yīng)酮洛芬的二苯甲酮,在酸性下與二硝基苯肼縮合生成67三、重氮化-偶合反應(yīng)對乙酰氨基酚酸中水解生成對氨基酚,游離芳伯氨基與亞硝酸鈉試液重氮化,重氮鹽再與堿性β-萘酚偶合生成紅色偶氮化合物三、重氮化-偶合反應(yīng)對乙酰氨基酚酸中水解生成對氨基酚,游離68四、氧化反應(yīng)甲芬那酸:溶于硫酸,被重鉻酸鉀氧化顯深藍色→隨即變?yōu)樽鼐G色吲哚美辛:溶液在硫酸酸性下與重鉻酸鉀溶液共熱,被氧化顯紫色在鹽酸溶液中與亞硝酸鈉溶液反應(yīng)顯綠色,放置后漸變黃色四、氧化反應(yīng)甲芬那酸:溶于硫酸,被重鉻酸鉀氧化顯深藍色→69五、水解反應(yīng)阿司匹林,水解得水楊酸鈉與醋酸鈉,酸化生成水楊酸白色沉淀;并發(fā)生醋酸的臭氣雙水楊酯水解后酸化,生成白色水楊酸沉淀;2CH3COONa+H2SO4→2CH3COOH+Na2SO4五、水解反應(yīng)阿司匹林,水解得水楊酸鈉與醋酸鈉,酸化生成水70六、特征元素的反應(yīng)氯的鑒別——與堿共熱分解產(chǎn)生氯化物,顯氯化物的鑒別反應(yīng)雙氯芬酸鈉:與碳酸鈉熾灼灰化,加水煮沸,濾過,濾液顯氯化物鑒別反應(yīng)

硫的鑒別——經(jīng)高溫分解產(chǎn)生硫化氫氣體,遇醋酸鉛生成硫化鉛黑色沉淀美洛昔康:試管中熾灼,產(chǎn)生的氣體使?jié)駶櫟拇姿徙U試紙顯黑色六、特征元素的反應(yīng)氯的鑒別——與堿共熱分解產(chǎn)生氯化物,顯氯71七、光譜法(一)紫外-可見分光光度法最大吸收波長法:雙氯芬酸鈉溶液:276nm有最大吸收吡羅昔康片,含量測定溶液:243與334nm最大吸收最大與最小吸收波長法:布洛芬及制劑氫氧化鈉溶液:265,273nm最大吸收245,271nm最小吸收259nm肩峰

七、光譜法(一)紫外-可見分光光度法72七、光譜法(一)紫外-可見分光光度法吸光度法:甲芬那酸鹽酸-甲醇溶液:279與350nm最大吸收吸光度(20μg/ml)分別:0.69~0.74與0.56~0.60吸光度比值法:二氟尼柳鹽酸-乙醇溶液:251與315nm最大吸收吸光度比值應(yīng)為4.2~4.6

七、光譜法(一)紫外-可見分光光度法73七、光譜法(二)紅外分光光度法 阿司匹林

峰位(cm-1)歸屬3300~2300vO-H(羧基)1760,1690vC=O(羧酸酯和羧酸)1610,1570,1480,1460vC=C(苯環(huán))1310,1230,1180vC-O(羧酸酯和羧酸)775δAr-H(鄰位取代苯環(huán))3300~23001760,16901610~14601310~1180775七、光譜法(二)紅外分光光度法峰位(cm-1)歸屬330074八、色譜法(一)薄層色譜法個別藥物制劑采用溶劑提取法去除輔料后IR鑒別;部分藥物制劑采用TLC鑒別:二氟尼柳,美洛昔康等

(二)高效液相色譜法隨著HPLC在藥物制劑含量測定中的大量應(yīng)用,更多應(yīng)用HPLC進行制劑的鑒別:阿司匹林等多種制劑均直接取含量測定項下記錄的HPLC色譜圖進行鑒別

當TLC和HPLC均有收載時:二者可任選其一 如美洛昔康片的鑒別八、色譜法(一)薄層色譜法75藥物名稱特殊雜質(zhì)游離水楊酸與有關(guān)物質(zhì)/FeCl3阿司匹林/雙水楊酯甲芬那酸二氟尼柳第三節(jié)

特殊雜質(zhì)及其檢查法2.3-二甲基苯胺有關(guān)物質(zhì)

6-甲氧基-2-萘乙酮

氨基酚和對氯苯乙酰胺A.TLC;B.HPLCGC萘普生對乙酰氨基酚藥物名稱特殊雜質(zhì)游離水楊酸與有關(guān)物質(zhì)/FeCl3阿司匹林/雙76一、阿司匹林與雙水楊酯(一)阿司匹林與雙水楊酯的合成一、阿司匹林與雙水楊酯(一)阿司匹林與雙水楊酯的合成77一、阿司匹林與雙水楊酯(二)阿司匹林中游離水楊酸與有關(guān)物質(zhì)游離水楊酸:

酚羥基易被空氣(氧)逐漸氧化生成淡黃,紅棕至深棕色醌型化合物為什么要檢查游離水楊酸？一、阿司匹林與雙水楊酯(二)阿司匹林中游離水楊酸與有關(guān)物質(zhì)78游離水楊酸檢查方法：ChP用水楊酸與Fe3+生成紫堇色配離子的原理,用稀硫酸鐵銨溶液顯色法檢查

供試品溶液制備過程中阿司匹林水解ChP2010采用1%冰醋酸甲醇溶液制備供試品溶液(防阿司匹林水解);并用RP-HPLC檢查原料藥和制劑均要檢查游離水楊酸！游離水楊酸檢查方法：ChP用水楊酸與Fe3+生成紫堇792.有關(guān)物質(zhì):阿司匹林中“有關(guān)物質(zhì)”系指除“游離水楊酸”外的合成原料(苯酚)及副產(chǎn)物2.有關(guān)物質(zhì):阿司匹林中“有關(guān)物質(zhì)”系指除“游離水楊酸”外802.有關(guān)物質(zhì):阿司匹林

水楊酸

乙酰水楊酰水楊酸a:阿司匹林供試品(10mg/ml)；b:0.5%自身對照(50g/ml)；c:水楊酸對照(10g/ml)；d:e:空白2.有關(guān)物質(zhì):阿司匹林a:阿司匹林供試品(10mg/ml)81一、阿司匹林與雙水楊酯(三)雙水楊酯中游離水楊酸利用水楊酸與三價鐵生成有色配離子的原理,用硝酸鐵溶液顯色,在530nm的波長處測定吸光度,限度為0.5%;雙水楊酯片同法檢查,限度為1.5%

一、阿司匹林與雙水楊酯(三)雙水楊酯中游離水楊酸利用水楊酸82二、甲芬那酸(一)合成工藝甲芬那酸主要以鄰-氯苯甲酸(o-chloroben-zoicacid)和2,3-二甲基苯胺(2,3-dimethyl-aniline)為原料,在銅的催化下縮合而成二、甲芬那酸(一)合成工藝甲芬那酸主要以鄰-氯苯甲酸(o83二、甲芬那酸(二)2,3-二甲基苯胺的檢查ChP曾采用HPLC法檢查: 單一雜質(zhì)的限量為0.1% 雜質(zhì)總量為0.5%ChP2010規(guī)定

HPLC法檢查:“有關(guān)物質(zhì)”

GC檢查:2,3-二甲基苯胺(0.01%)二、甲芬那酸(二)2,3-二甲基苯胺的檢查ChP曾采用84三、二氟尼柳(一)合成工藝原料(I)

:2,4-二氟苯胺中間體(II):2,4-二氟聯(lián)苯中間體(III)

:4-(2',4'-二氟苯基)苯乙酮中間體(IV)

:4-(2',4'-二氟苯基)苯酚乙酯中間體(V):4-(2‘,4’-二氟苯基)苯酚產(chǎn)品(VI):二氟尼柳三、二氟尼柳(一)合成工藝原料(I):2,4-二氟苯85三、二氟尼柳(二)有關(guān)物質(zhì)A和B的檢查1.有關(guān)物質(zhì)A的檢查——TLC(正相): 極性較小的雜質(zhì) 單1雜質(zhì)的限量為0.5%2.有關(guān)物質(zhì)B的檢查——HPLC(反相): 極性較大的雜質(zhì) 各面積的和為0.5%三、二氟尼柳(二)有關(guān)物質(zhì)A和B的檢查1.有關(guān)物質(zhì)A86四、萘普生

(一)合成工藝原料(I)

:2-萘甲醚中間體(II):6-甲氧基-2-乙酰萘(6-甲氧基-2-萘乙酮)中間體(III):2-羥基-2-(6-甲氧基-2-萘基)丙酸產(chǎn)品(IV):萘普生

四、萘普生(一)合成工藝原料(I):2-萘甲醚87四、萘普生(二)6-甲氧基-2-萘乙酮及其它有關(guān)物質(zhì)1.溶液制備供試品溶液:0.5mg/ml流動相溶液對照品溶液:6-甲氧基-2-萘乙酮(雜質(zhì)I),

50μg/ml對照溶液:供試品溶液1ml+對照品溶液2ml→200ml2.限度

雜質(zhì)I:

不得大于雜質(zhì)I峰面積(0.1%)

其他單個雜質(zhì):

不得大于雜質(zhì)I峰面積的2倍(0.2%)各雜質(zhì)總量:

不得大于對照溶液中萘普生峰面積(0.5%)

四、萘普生(二)6-甲氧基-2-萘乙酮及其它有關(guān)物質(zhì)1.88五、對乙酰氨基酚

(一)合成工藝(二)有關(guān)雜質(zhì):

對硝基酚,對氨基酚,對氯苯胺,對氯苯乙酰胺,o-乙酰 基對乙酰氨基酚,偶氮苯,氧化偶氮苯,苯醌和醌亞胺1.對氨基酚及(其它)有關(guān)物質(zhì)——HPLC對氨基酚:0.005%有關(guān)物質(zhì):單個0.1%;總量0.5%2.

對氯苯乙酰胺(極性較小)——HPLC(0.005%)

五、對乙酰氨基酚(一)合成工藝(二)有關(guān)雜質(zhì):189第四節(jié)

含量測定一、酸堿滴定法二、紫外-可見分光光度法三、高效液相色譜法第四節(jié)

含量測定一、酸堿滴定法二、紫外-可見分光光90一、酸堿滴定法（原料藥）酸堿滴定法水解后剩余量滴定法阿司匹林

USP,BP,JP非水溶液滴定法吡羅昔康具有吡啶環(huán),顯堿性,可在冰醋酸溶液中用高氯酸滴定液滴定

剩余量滴定法美洛昔康水及與水混溶的有機溶劑中難溶,溶于氫氧化鈉滴定液后鹽酸回滴定

直接滴定法水楊酸,阿司匹林,雙水楊酯,二氟尼柳,甲芬那酸,布洛芬,酮洛芬,萘普生,尼美舒利一、酸堿滴定法（原料藥）酸堿水解后剩余量滴定法阿司匹林非水91(一)直接滴定法1.測定法本品約0.4g,精密稱定,加中性乙醇(對酚酞指示液顯中性)20ml溶解后,加酚酞指示液3滴,用氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)滴定T=18.02mg2.討論中性乙醇：對所選用的指示劑顯中性的乙醇目的：a.

乙醇：溶解樣品，減少水解b.中性：消除乙醇中對酚酞顯酸性物質(zhì)的影響滴定在不斷振搖下稍快進行,防阿司匹林水解受阿司匹林的水解產(chǎn)物水楊酸及醋酸的干擾(一)直接滴定法1.測定法92(二)剩余量滴定法1.原理美洛昔康含有與羰基共軛的烯醇式羥基,具有羧酸性質(zhì),可用氫氧化鈉滴定液滴定本品甲醇,乙醇,丙酮及水中難溶,定量過量的氫氧化鈉滴定液溶解后,用鹽酸滴定液回滴定2.測定法本品約0.4g,精密稱定,精密加氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)25ml,微溫溶解,加中性乙醇(對溴麝香草酚藍指示液顯中性)100ml與指示液10滴,用鹽酸滴定液(0.1mol/L)滴定;T=35.14mg美洛昔康(二)剩余量滴定法1.原理美洛昔康93(三)水解后剩余量滴定法1.原理阿司匹林酯結(jié)構(gòu)在堿性溶液中易水解,加入定量過量的氫氧化鈉滴定液,加熱使酯鍵水解后,再用硫酸滴定液回滴定剩余的氫氧化鈉滴定液

2NaOH+H2SO4→Na2SO4+2H2O2.測定法(USP32-NF27)本品約1.5g,精密稱定,加氫氧化鈉滴定液(0.5mol/L)50.0ml,緩緩煮沸10min,放冷,加酚酞指示液,用硫酸滴定液(0.25mol/L)滴定，并將滴定結(jié)果用空白試驗校正。T=45.40mg為什么要做空白試驗？(三)水解后剩余量滴定法1.原理94(三)水解后剩余量滴定法3.兩步滴定法——水解后剩余量滴定法的改進阿司匹林片劑:水解產(chǎn)物水楊酸及醋酸;穩(wěn)定劑酒石酸或枸櫞酸兩步滴定法:第1步:中和,中和干擾物和阿司匹林的游離羧基第2步:水解與滴定,水解后剩余量滴定法阿司匹林片含量測定方法(ChP2005)如下:

本品10片,精密稱定,研細,精密稱取片粉(阿司匹林0.3g),中性乙醇(酚酞指示液顯中性)20ml,振搖,加指示液3滴,滴加氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)至溶液顯粉紅色,精密加氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)40ml,加熱15m