生物組織中

還原糖、脂肪、蛋白質的鑒定

講解教師：徐飛霞、張丹娜、輔導教師：劉紫軒、劉凱寧、王云霄、韓文婕一、實驗目的：

嘗試用化學試劑檢測生物組織中糖類、脂肪和蛋白質，能闡明實驗原理—顏色反應；

識記和區分用于可溶性還原糖、脂肪、蛋白質鑒定的試劑及產生的特定顏色，掌握鑒定方法，學會描述實驗現象。二、實驗原理呈色反應脂肪+蘇丹Ⅲ染液橘黃色蛋白質+雙縮脲試劑紫色反應

還原糖+斐林試劑磚紅色沉淀2、蛋白質的鑒定原理在堿性溶液（NaOH）中，雙縮脲（H2NCO—NH—CONH2）能與Cu2+作用，可形成紫色或紫紅色的絡合物，這一反應叫做雙縮脲反應。由于蛋白質分子中含有很多與雙縮脲結構相似的肽鍵，因此，蛋白質可與雙縮脲試劑發生顏色（紫色或紫紅色）反應。3、脂肪的鑒定原理：蘇丹染料在脂肪中的溶解度大于酒精中的溶解度，用含蘇丹染料的酒精處理含有脂肪的生物組織時，酒精中的蘇丹進入脂肪中，在脂肪中溶解、積累，并吸附在脂肪顆粒結構上，呈現出橘黃色（蘇丹Ⅲ）或紅色（蘇丹Ⅳ）。三、實驗器材

實驗材料：梨、花生、雞蛋清；實驗器械：雙面刀片、試管（最好用刻度試管）、試管夾、試管架、大小燒杯、小量筒、滴管、酒精燈、三腳架、石棉網、火柴、載玻片、蓋玻片、毛筆、吸水紙、顯微鏡；實驗試劑1．斐林試劑（現配現用---甲液：乙液=1:1）

甲液：質量濃度為0.1g/mLNaOH溶液

乙液：質量濃度為0.05g/mLCuSO4溶液2．雙縮脲試劑

A液：質量濃度為0.1g/mLNaOH溶液

B液：質量濃度為0.01g/mLCuSO4溶液3．蘇丹Ⅲ染液4．體積分數為50%的酒精溶液

組織樣液2ml剛配制斐林試劑2ml加熱2min無色藍色可溶性還原糖的鑒定組織樣液（蛋白稀釋液）2ml雙縮脲試劑A液2ml雙縮脲試劑B液4–5滴無顏色變化紫色蛋白質的鑒定五、注意事項

1、注意實驗安全。食用酒精燈時小心燒到自己或他人；使用雙面刀片時小心割傷手。2、還原糖鑒定中所用的斐林試劑必須現配現用。3、雙縮脲試劑的使用，應先加試劑A（造成堿性的反應環境后)，再加試劑B。試劑B加3—4滴，千萬不要加多。4、制作切片過程中，染色后一定要用50%的酒精溶液洗去浮色。觀察時要找最薄處，最好只有1～2層細胞。1、可溶性還原糖的鑒定

制備生物組織樣液

（取材，研磨，過濾）

取樣

（取2ml組織樣液注入試管

）

注入試劑

（向試管中加入2ml剛配置的斐林試劑

）

加熱（2分鐘左右），觀察2、蛋白質的鑒定

制備組織樣液（蛋白稀釋液）

（2ml

）

注入試劑A（

加入2ml雙縮脲試劑A

）

注入試劑B

（滴入3～4滴雙縮脲試劑B，搖勻）

觀察顏色變化3、脂肪的鑒定

制備生物組織實驗材料

(去種皮，削平面，切片）

染色

（滴2～3滴蘇丹Ⅲ染液染色1分鐘）

去浮色

（濾紙吸去多余染液，在在玻片上滴1～2滴體積分數為50%酒精溶液，洗去浮色

）

制作臨時裝片，放在顯微鏡下觀察（先低倍鏡后高倍鏡）六、實驗結果檢測生物組織中的還原糖六、實驗結果檢測生物組織中的蛋白質六、實驗結果檢測生物組織中的脂肪10×40×高考鏈接（2010年皖南模擬）下列表示一組有機物的鑒定試驗，表格中的數字是尚未確定的待檢測物質、試劑和顏色反應的結果，請按數字順序選出正確的對應內容（）D你的困惑謝謝大家雙縮脲反應H2NCO—NH—CONH2紫色絡合物2、雙縮脲試劑A和B在實驗過程中加入的順序是否可以改變？雙縮脲試劑A和B加入的先后順序是可以改變的。但是先加入B以后得到的實驗結果的顏色會比按正常順序做的結果紫色要淺，這樣會影響我們的實驗觀察。3