臨床免疫學疾病的實驗室檢測-2(clinicalimmunologicaltest)--part2(clinicalimmunologicaltest)1腫瘤標志物的檢測腫瘤標志物(tumormarker;TM)：Asubstancethatmaybefoundintumortissueorreleasedfromatumorintothebloodorotherbodyfluids.Ahighlevelofatumormarkermaymeanthatacertaintypeofcancerisinthebody.(腫瘤細胞所產(chǎn)生或分泌的某種蛋白質(zhì),它們的出現(xiàn)與腫瘤的存在和發(fā)展有密切關系。)腫瘤標志物的檢測腫瘤標志物(tumormarker;TM)2腫瘤標志物的分類(classify)：1、腫瘤特異性抗原(TSA）2、腫瘤相關性抗原(TAA）3、腫瘤細胞增生(proliferation～)4、癌基因、生長因子與受體5、腫瘤抑制基因和基因產(chǎn)物腫瘤標志物的分類(classify)：31、腫瘤特異性抗原（TSA）：指僅表達與腫瘤細胞表面，而不存在于正常組織細胞的新抗原。

1、腫瘤特異性抗原（TSA）：42、腫瘤相關性(associable)抗原:TAA:是指非腫瘤細胞所特有，正常組織細胞也可表達的抗原物質(zhì)，作為腫瘤標志物監(jiān)測，是因為此類抗原在癌變細胞的表達水平遠超過于正常細胞，但又無嚴格的腫瘤特異性。2、腫瘤相關性(associable)抗原:53、腫瘤細胞增生標志物：是指與腫瘤細胞增(proliferation)：的標志性物質(zhì)，目前被廣泛接受的有Ki-67和PCNA（增生細胞核抗原）。

因為Ki-67和PCNA的免疫反應性與細胞增生的形態(tài)特征關系密切。3、腫瘤細胞增生標志物：64、癌基因、生長因子與受體：正常細胞有原癌基因，當原癌基因激活后變成癌基因，可引起細胞惡性轉(zhuǎn)化癌基因的作用中又需要生長因子及其受體的協(xié)同參與～。例：HER-2/neu基因Ras基因表皮生長因子受體4、癌基因、生長因子與受體：75、腫瘤抑制基因和基因產(chǎn)物：是指抑制腫瘤發(fā)生、發(fā)展的基因（抑癌基因）和其基因產(chǎn)物。例：Rb基因p53基因等5、腫瘤抑制基因和基因產(chǎn)物：8主要腫瘤標志物檢測:1、CEA2、AFP3、CA12-54、PSA5、CA19-96、NSE7、SCC8、HCG注：標志物的本質(zhì)(nature)、檢測方法(mathod)、參考值范圍(referencevalue)、臨床意義(significance)及注意事項(attention）。主要腫瘤標志物檢測:1、CEA2、91、CEA（carcinoembryonicantigen）癌胚抗原-于1965年被發(fā)現(xiàn)，通過由人直腸組織提取物免疫動物獲得抗血清并經(jīng)吸收。再將此抗血清與腫瘤/正常組織分別反應，只與腫瘤組織有反應。由于此抗原也能在胚胎組織中發(fā)現(xiàn)，故稱“癌胚抗原”。檢測方法有ELISA、RIA、自動免疫～1、CEA（carcinoembryonicantigen10CEA在正常情況下由胎兒胃腸道上皮、胰腺和肝細胞合成，經(jīng)胃腸道代謝。腫瘤狀態(tài)時CEA大量分泌并經(jīng)入血和淋巴液循環(huán)導致血清中CEA上升。正常群體CEA值：＜3ug/L;吸煙者＜5ug/L;孕婦的前6個月升高,產(chǎn)后恢復測得值＞60ug/L時,腫瘤?(惡性/良性)CEA在正常情況下由胎兒胃腸道上皮、胰腺和肝細胞合成，經(jīng)胃腸11意義及注意事項:(significanceandattentions)1、值升高—胃、結/直腸、肺癌，胰膽道與膀胱癌（待檢物來源）2、注意—良性腫瘤（病癥）也可升高轉(zhuǎn)移時升高，術后恢復持續(xù)升高，示預后不良不宜選為篩選（假陽/陰性）(falseposiyive/negative)意義及注意事項:122、AFP（alpha-fetoprotein）：甲胎蛋白-是胚胎期肝臟和卵黃囊合成為胎兒循環(huán)中主要蛋白，出生后水平下將，18個月后至正常人水平。肝細胞惡變又可獲其功能導致血清含量增高(rejuvenated,返祖)，目前成為肝細胞和生殖（非精原）細胞惡性腫瘤的標志物。2、AFP（alpha-fetoprotein）：13AFP的檢測方法同前外，用金標記測定正常成人：血清＜10ug/L；妊娠14周起上升至2～3g/L后逐降，足孕70mg/L分娩后迅速下降。意義：＞500ug/L多見于原發(fā)肝癌。良性肝病也可升高，但多＜200ug/L。多用于篩選、判斷預后及調(diào)整治療等。AFP的檢測方法同前外，用金標記測定143、CA12-5/5、CA19-9：屬糖類抗原標志物，使由腫瘤細胞分泌釋放或存于該細胞表面的抗原，又歸屬腫瘤相關抗原。有CA12-5（卵巢癌相關）；CA19-9（胰腺、腸癌～）；乳腺癌（CA15-3）消化系統(tǒng)（CA242）及CA50等。3、CA12-5/5、CA19-9：15CA12-5：在卵巢腫瘤上皮和Mullerian副腎管來源的組織中表達（病理/正常）正常人血清≤35U/ml。CA12-5血中代謝快，測得值反映近期CA12-5值升高—惡性腫瘤（晚）少數(shù)異位癥、良性等CA12-5監(jiān)測（動態(tài)），反映病情、預后（手術指征）CA12-5：在卵巢腫瘤上皮和Mullerian16CA19-9：一種與胰腺、膽囊、結腸和胃癌等相關的腫瘤標志物，本質(zhì)為細胞膜上的糖脂質(zhì)，因制備的單克隆抗體而命名。正常參考值≤37U/ml。胰腺癌的陽性率70～92%，膽管癌66%胃癌25～60%，肝癌56～60%，結直腸癌18～58%。伴黃疸的良性疾患也可升高，但一般不＞120U/ml，隨處置而下降。CA19-9：一種與胰腺、膽囊、結腸和174、PSA（prostatespecificantigen）：前列腺特異抗原—由前列腺分泌的單鏈糖蛋白，存在于前列腺管道上皮細胞中發(fā)生前列腺癌時血清中含量升高。正常男性：＜4ug/L（f-＜1ug/L）升高：前列腺癌、增生、炎癥等應用：普查、療程跟蹤、復發(fā)監(jiān)測4、PSA（prostatespecificantige186、NSE(neuronspecificenolase)神經(jīng)元特異性烯醇化酶—是烯醇化酶的同功酶，正常存在于神經(jīng)組織和RBC中，正常人血清值＜13ug/ml。升高：小細胞肺癌、神經(jīng)母細胞瘤和其內(nèi)分泌腫瘤及腦損傷。注意：標本禁止溶血動態(tài)監(jiān)測可用于療效、評估預后等。6、NSE(neuronspecificenolase)197、SCC（鱗狀細胞癌抗原）：屬糖蛋白是一種鱗狀細胞癌標志物（宮頸癌、肺癌、頭頸部癌等）,血清＜1.5ug/L。8、HCG（人絨毛膜促性腺激素）：作為絨毛膜上皮細胞癌標志，異位妊娠？檢測HCG包括總HCG和f-HCG。～7、SCC（鱗狀細胞癌抗原）：屬糖蛋白20

腫瘤標志物的應用原則

（～appliedprinciple）相關的標志物聯(lián)合檢測—提高靈敏度陽性標志物的動態(tài)監(jiān)測—提高準確性

（union/dynamics）不宜憑單項、單次的檢測結果下診斷結論腫瘤標志物的應用原則

（～app21

腫瘤標志物的聯(lián)合應用

（～jointapply）例：肺癌：NES、CEA、CYFRA21-1乳腺癌：CA15-3、CEA肝癌：AFP、CEA、AKP同功酶胰腺癌：CA19-2、CA242、CA50卵巢癌：CA12-5、CEA、CA19-9HCG腫瘤標志物的聯(lián)合應用

（～j22

自身免疫性疾病的免疫學檢驗

（diagnosticofautoimmunedisease）Systemiclupuserythematosus；SLERheumatoidarthritis；RA自身免疫性疾病的免疫學檢驗

（diagnost23Hashimoto’sthyroiditis

AnkylosingspondylitisHashimoto’sthyroiditis

Anky24Autoimmunediseases:Aconditioninwhichthebodyrecognizesitsowntissuesasforeignanddirectsanimmuneresponseagainstthem.自身免疫病：指因自身免疫應答反應而導致破壞自身正常組織結構并引起臨床癥狀。（由：自身抗體/自身反應性T淋巴細胞）Autoimmunediseases:25臨床各科自身免疫性疾病舉例(附表)臨床各科自身免疫性疾病舉例(附表)26累及系統(tǒng)自身免疫性疾病舉例(example)血液系統(tǒng)自身免疫性溶血性貧血、特發(fā)性血小板(blood～)減少性紫癜、特發(fā)性白細胞減少癥等神經(jīng)肌肉多發(fā)性硬化癥、重癥肌無力、脫髓鞘疾(nerve/muscle)病等內(nèi)分泌系統(tǒng)原發(fā)性腎上腺皮質(zhì)萎縮、慢性甲狀腺(endocrine～)炎、胰島素依賴性糖尿病等消化系統(tǒng)非特異性潰瘍性結腸炎、慢性活動性肝(digestive～)炎、惡性貧血與萎縮性胃炎等泌尿系統(tǒng)自身免疫性腎小球腎炎、肺—腎出血性(uropoietic～)綜合癥等結締組織類風濕性關節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、皮(connectivetissue)肌炎、硬皮病等累及系統(tǒng)自身免疫性疾病舉例(example)27檢測——自身抗體(Autoantibodies)

免疫復合物(immunecomplex)其他相關因素（Ig、complement

lymphocyte、cytokine,etc）檢測——自身抗體(Autoantibodies)28Autoantibodies:Autoantibodyhavebeendefinedasanaberrationofanessentiallyphysiologicalandprotectiveprocess,representingimmunoglobulinsreactingagainstself-molecules.（由于機體自身免疫的發(fā)生，使得機體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生了針對機體自身組織成分的抗體，稱～。）Autoantibodies:29自身抗體(Autoantibodies)：包括：抗核抗體(胞核內(nèi)成分)(anti-nuclearantibody;ANA)

抗細胞漿(cytoplasmic)成分抗體抗磷脂(anti-phospholipid)抗體類風濕因子(rheumatoidfactor,RF)自身抗體(Autoantibodies)：30抗核抗體（廣義）：抗細胞核內(nèi)所有抗

原成分(核質(zhì)\膜\仁\DNA等)的自身抗體。抗核抗體（廣義）：抗細胞核內(nèi)所有抗31抗體名稱檢測所用抗原臨床意義抗核抗體(均質(zhì)型）HEp-2細胞抗原片高滴度主要見于SLE,低滴或大鼠肝細胞印片度可見于RA、慢性肝病、傳單或藥物誘發(fā)的狼瘡者抗核抗體（斑點型）混合性結締組織病、SLE硬皮病、SS等。抗核抗體（核膜型）高滴度幾乎僅見于SLE抗核抗體（核仁型）高滴度對硬皮病特異dsDNA抗體馬疫錐蟲或短膜是SLE的特征性抗體RNP抗體ENA抗原硬皮病滴度高，其它自身免疫病低水平陽性，RA一般為陰性Sm抗體是SLE的標志性抗體（其它疾病很少陽性），但敏感性只有30％左右Scl-70抗體系統(tǒng)性硬化癥的標記抗體SSA/Ro、SSB/La抗體干燥綜合征J0-1抗體多發(fā)性皮肌炎和皮肌炎的標記抗體抗體名稱檢測所用抗原32抗細胞漿成分抗體:抗線粒體抗體抗肌動蛋白抗體抗溶酶體抗體抗Jo-1抗體等方法:免疫組化意義:肝病的鑒別肌炎肺纖維化等抗細胞漿成分抗體:33抗組織細胞抗體:1、抗腎小球基底膜(anti-glomeularbasementmembran)抗體（肺出血腎炎綜合征,Goodpasture～）2、抗甲狀腺（anti-thyroid）抗體（甲狀腺炎thyroiditis,甲亢Graves病）3、抗胰島(insular)細胞抗體（胰島素依賴性糖尿病,IDDM）(insulindependentdiabetesmellitus)抗組織細胞抗體:34類風濕因子（rheumatoidfactor）：是變性IgG刺激機體產(chǎn)生的一種自身抗體，主要存在于類風濕關節(jié)炎患者的血清和關節(jié)液內(nèi)（分IgM/G～E型）。檢測：乳膠凝集測IgM型；速率法不分型參考值：乳膠法≤1:10;速率法＜30U/L意義:類風濕病,自身免疫病的輔助～類風濕因子（rheumatoidfactor）：35類風濕因子在病人和健康人中檢出情況70%～90%的RA患者RF呈陽性。但RF并不是RA獨有的特異性抗體。2健康人群20混合性結締組織病10皮肌炎24系統(tǒng)性硬皮病50結節(jié)性多動脈炎95干燥綜合征33～55SLE70～90RA陽性率（%）疾病類風濕因子在病人和健康人中檢出情況70%～90%的RA患者R36循環(huán)免疫復合物（CIC）測定【原理】利用濁度增強劑或促凝劑-聚乙二醇（PEG）、葡聚糖等，在一定濃度時可選擇性析出一定分子大小的抗原抗體復合物而形成濁度，其濁度的程度與抗原抗體復合物的量呈正比。由于濁度的形成可導致反射、散射以及吸收入射光線，使原入射光衰減。此時，通過測定透射光衰減（以A值表示）檢測免疫復合物的量。循環(huán)免疫復合物（CIC）測定37循環(huán)免疫復合物檢測流程(方法)

1、測定管+血清對照管+血清（4.166%PEG2.0ml）（硼酸緩沖液2.0ml）

2、混勻后4℃，60min

3、室溫預溫30min，A450nm比濁。

循環(huán)免疫復合物檢測流程(方法)

2、混勻后4℃，38【參考范圍】測定波長為450nm時，數(shù)值為0.015～0.05【臨床意義】CIC的量增高，反映血清中存在免疫復合物量增多。已知CIC增多與許多疾病相關，包括：自身免疫性疾病、傳染性疾病、腫瘤及某些超敏反應性疾病等………-------【參考范圍】39移植免疫的實驗室檢測移植(transplantation):是應用自體或異體的正常細胞、組織或器官置換病變的或功能缺損的細胞、組織和器官，以維持和重建機體生理功能的新型治療方法。移植排斥反應的防與治是關鍵(組織配型、供體選擇、免疫抑制劑用和術后的免疫學監(jiān)測～)移植免疫的實驗室檢測移植(transplantation):40免疫排斥（immunerejection）：指器官、組織或細胞移植后，受體發(fā)生免疫應答，引起針對移植物的免疫損傷而使其喪失功能的一個過程。表現(xiàn)：hyperacuterejectionacuterejectionchronicrejection免疫排斥（immunerejection）：指器官、組織或41移植的組織配型(matching):（一）選擇組織相匹配的供者1、一般情況:供物狀態(tài)、全身情況、年齡2、ABO血型相容（擬輸血）3、HLA相容性（受、供者HLA等位基因相合的數(shù)目越多越好）（二）HLA相容程度測試1、血清學(serological～)分型2、細胞學(cytological～)分型3、基因(gene)分型移植的組織配型(matching):（一）選擇組織相匹配的供421、血清學分型(serologicaltyping)：原理—利用各種已知的HLA標準血清型，與檢測細胞反應，添加補體后觀察細胞反應（CDC）～micro-complementdependentcytotoxiciti

技術要點（keypoint）—分離淋巴細胞,與標準抗血清反應，添加補體，死細胞染色,記數(shù)、判斷。評價—較理想，找標準抗血清（antiseraofdefinedspecificity）難。

1、血清學分型(serologicaltyping)：432、細胞學(cytological)分型—采用淋巴細胞混合培養(yǎng)（MLC）,(twoway)/oneway)雙向MLC—受、供體淋巴細胞混合體外培養(yǎng)，彼此作用，觀察細胞形態(tài)與細胞增殖，互不影響示受、供體間HLA型相匹配否則～技術要點(keypoint)—分離計數(shù)彼此淋巴細胞，共孵育，染色計數(shù)轉(zhuǎn)化細胞～評價(evalu)—用于移植前的交叉配合試驗，但不能判定HLA-D型～2、細胞學(cytological)分型—采用淋巴443、基因(gene)分型①限制性片段長度多態(tài)性（RFLP）分型②聚合酶鏈反應-序列特異性寡核苷酸探針（PCR-SSOP）③PCR-序列特異性引物（PCR-SSP）分型④PCR-單鏈構象多態(tài)性（PCR-SSCP）分型⑤PCR指紋圖譜技術⑥其他3、基因(gene)分型45（三）交叉配型(crossmatching)試驗

目的：檢測受者體內(nèi)是否存在抗供者的特異性抗體,避免移植物的超急排斥(HVGR)～技術要點：供者淋巴細胞+受者血清+補體方法：1、微量細胞毒試驗，2、流式細胞術.（三）交叉配型(crossmatching)試驗

目的：檢測46排斥反應的免疫學監(jiān)測

(immunologicalmonitoringofrejection)1、細胞免疫學監(jiān)測①T淋巴細胞數(shù)量、功能以及亞群比例等，②殺細胞活性（CTL和NK）。2、細胞因子監(jiān)測：Th1型/Th2型Th1型包括IL-2、TNF-a、IFN-r等Th2型包括IL-4、IL-10等3、抗HLA抗體檢測4、蛋白、酶類、補體檢測排斥反應的免疫學監(jiān)測

(immunological47抗HLA抗體檢測：原理—與異體排斥反應有關的體液、細胞免疫效應主要是針對HLA抗原的～因為測得血清中PRA的水平更有助于移植時受者對移植物的敏感程度包括群體反應性抗體(PRA)意義：移植術前后的PRA高低與術后急性排斥反應明顯有關。抗HLA抗體檢測：48Whymonitoringtheconcentration

ofdruges?藥物應用的臨床特征:病人不同時期狀況變化個體差異身高體重年齡個人吸收狀況懷孕肝，腎等代謝功能其他疾病Whymonitoringtheconcentrati49目的與手段通過測定血液中藥物濃度,并利用藥代動力學的原理和公式使給藥方案即時個體化,以提高藥效效,避免或減少毒性反應。檢測:fluorescencepolarizationimmunoassay(FPIA)

;microgranularenzyme-linkedimmunoassay,(MEIA)和Enzyme-linkedimmunoassay(ELISA)檢測的藥物：環(huán)孢霉素（CsA);他克莫司(FK506);霉酚酸（MPA）目的與手段通過測定血液中藥物濃度,并利用藥代動力學的原理和公50

其他免疫檢測感染免疫相關檢測超敏反應性檢測皮試其他免疫檢測感染免疫相關檢測51超敏反應性檢測1、血清IgE測定測定方法：ELISA正常參考值：總IgE＜100IU/ml意義：超敏反應性疾病的輔助指標自身免疫病、腫瘤或炎癥預測兒童是否易發(fā)超敏反應性疾病。超敏反應性檢測522、人嗜堿性粒細胞脫顆粒試驗【原理】嗜堿性粒細胞內(nèi)顆粒能被堿性染料著色，當加入過敏原，其與結合在細胞表面的IgE形成橋連反應，導致該細胞脫顆粒，結果該細胞不被染料著色，記數(shù)著色細胞并以其減少程度判斷結果。目前已漸被淘汰。2、人嗜堿性粒細胞脫顆粒試驗533、皮試：3、皮試：541、Ⅰ型變態(tài)反應:皮試后15min產(chǎn)生結果（青霉素、多種變應原如花粉、塵螨等）2、Ⅲ（Arthus）反應:為5～12h后產(chǎn)生～（異種血清接種含Ag，多次刺激產(chǎn)生Ab）（再次注射，出現(xiàn)局部過敏反應～）3、Ⅳ型變態(tài)反應:皮試后24～48h后產(chǎn)生（結核菌素試驗、等）。1、Ⅰ型變態(tài)反應:55感染性疾病的免疫學檢測包括(including)：1、病毒(viral)感染（病毒性肝炎,ToRCH感染,HIV感染,其他病毒感染等）2、細菌(bacterial)感染（傷寒、副傷寒,化膿性鏈球菌感染,結核,軍團病）3、真菌(fungi)與其他微生物感染感染4、寄生蟲(parasitic)感染（原蟲,蠕蟲～）感染性疾病的免疫學檢測包括(including)：56病毒性感染(viralinfection)病毒性肝炎（引起的病原體）1、肝炎病毒(hepatitisvirus)2、皰疹病毒(herpsvirus)3、蟲媒病毒(arthropod-bornevirus)4、出血熱病毒(hemorrhagicfever～)5、腺病毒/柯薩基病毒等(adenovirus/coxsakivirus)病毒性感染(viralinfection)病毒性肝炎（引起57病毒性肝炎：HAVHBVHCVHDVHEV其他（HGV/TTV）（SEN/TLMV）病毒性肝炎：HAV581、免疫學檢測指標—HAV-Ag抗HAV總抗體抗HAV-IgM2、HAV的潛伏期(30天±2周)3、HAV的傳播途徑(糞—口)HAV血清標志物出現(xiàn)的規(guī)律1、免疫學檢測指標—HAV-AgHAV血清標志物出現(xiàn)的規(guī)律59人巨細胞病毒潛伏—激活感染診斷的進展60乙肝主要血清標志物聯(lián)合檢測的臨床義意

乙肝主要血清標志物聯(lián)合檢測的臨床義意61丙型肝炎病毒感染血清標志物出現(xiàn)過程HCV的傳播途徑HCV容易變異….HCV的實驗室診斷—測病毒RNA.測病毒相應抗體..丙型肝炎病毒感染血清標志物出現(xiàn)過程HCV的傳播途徑62HDV為缺陷病毒與HBV同時感染（共同/聯(lián)合）的特征HDV的傳播途徑HDV的免疫學檢測指標（抗-HDV總抗體）（抗-HDVIgM型抗體）HDV為缺陷病毒63HEV的特性HEV的傳播途徑HEV不同于HAVHEV感染的實驗室診斷—（抗-HEVIgM）（抗-HEVIgG）HEV的特性64ToRCH感染:“To”代表弓形體(toxplasma,TOX)，“R”代表風疹病毒(rubellavirua,RV)，“C”代表巨細胞病毒(cytomegalovirus,CMV)，“H”代表單純皰疹病毒(herpssimplexvirus,HSV)。一組優(yōu)生優(yōu)育篩選常用檢測對象ToRCH感染:“To”代表弓形體(toxplasma,65特異性抗體檢測結果的分析1.IgG(-);IgM(-)(未感染,需排除窗口期)(以及變異等)2.IgG(-);IgM(+)(感染早期,觀察抗體轉(zhuǎn)歸，排除非特異性等)3.IgG(+);IgM(-)(繼往感染,免疫功能受損,無反應能力者等)4.IgG(+);IgM(+)(激活感染,再感染,非特異性,少數(shù)高免疫狀態(tài))特異性抗體檢測結果的分析1.IgG(-);IgM(-)(未66人巨細胞病毒潛伏—激活感染診斷的進展67細菌性感染：檢測指標—肥達反應、Vi抗體抗溶血素“O”抗-PPDIgG、OT微量凝集抗體蒼白螺旋體感染（梅毒）：檢測指標—非梅毒螺旋體血清學試驗梅毒螺旋體抗原血清試驗細菌性感染：68非梅毒螺旋體血清學試驗1、性病研究實驗室試驗（VDRL）2、不加熱血清反應素試驗（USR）3、快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗（RPR）4、甲苯胺紅試驗（TRUST）非梅毒螺旋體血清學試驗1、性病研究實驗室試驗（VDRL）69梅毒螺旋體抗原血清試驗

1、梅毒螺旋體血細胞凝集驗（TPHA）2、梅毒螺旋體明膠凝集實驗（TPPA）3、熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS）4、梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗（TP-ELISA）5、梅毒螺旋體蛋白印跡試驗（TP-WBA）梅毒螺旋體抗原血清試驗

1、梅毒螺旋體血細胞凝集驗（TPHA70人巨細胞病毒潛伏—激活感染診斷的進展71臨床常見的寄生蟲(parasitical)感染癥

瘧疾(malaria)原蟲–{阿米巴(amoebiasis)寄生蟲--{卡氏肺孢子蟲病(pneumocystosis)蠕蟲--{血吸蟲(schistosomisis)囊蟲病(cysticercosis)絲蟲病(filariasis)等等臨床常見的寄生蟲(parasitical)感染癥72寄生蟲感染的免疫學檢驗1、機體抗寄生蟲感染調(diào)動：巨噬細胞、粒細胞的吞噬，殺傷；寄生蟲抗原刺激產(chǎn)生相應抗體，抗體-抗原的中和、調(diào)理及促吞噬；致敏T細胞的直接殺傷與淋巴因子的作用等。2、檢測則圍繞蟲體抗原、相應抗體、循環(huán)復合物以及細胞因子等展開。寄生蟲感染的免疫學檢驗1、機體抗寄生蟲感染調(diào)動：巨噬細胞、粒73臨床免疫學疾病的實驗室檢測-2(clinicalimmunologicaltest)--part2(clinicalimmunologicaltest)74腫瘤標志物的檢測腫瘤標志物(tumormarker;TM)：Asubstancethatmaybefoundintumortissueorreleasedfromatumorintothebloodorotherbodyfluids.Ahighlevelofatumormarkermaymeanthatacertaintypeofcancerisinthebody.(腫瘤細胞所產(chǎn)生或分泌的某種蛋白質(zhì),它們的出現(xiàn)與腫瘤的存在和發(fā)展有密切關系。)腫瘤標志物的檢測腫瘤標志物(tumormarker;TM)75腫瘤標志物的分類(classify)：1、腫瘤特異性抗原(TSA）2、腫瘤相關性抗原(TAA）3、腫瘤細胞增生(proliferation～)4、癌基因、生長因子與受體5、腫瘤抑制基因和基因產(chǎn)物腫瘤標志物的分類(classify)：761、腫瘤特異性抗原（TSA）：指僅表達與腫瘤細胞表面，而不存在于正常組織細胞的新抗原。

1、腫瘤特異性抗原（TSA）：772、腫瘤相關性(associable)抗原:TAA:是指非腫瘤細胞所特有，正常組織細胞也可表達的抗原物質(zhì)，作為腫瘤標志物監(jiān)測，是因為此類抗原在癌變細胞的表達水平遠超過于正常細胞，但又無嚴格的腫瘤特異性。2、腫瘤相關性(associable)抗原:783、腫瘤細胞增生標志物：是指與腫瘤細胞增(proliferation)：的標志性物質(zhì)，目前被廣泛接受的有Ki-67和PCNA（增生細胞核抗原）。

因為Ki-67和PCNA的免疫反應性與細胞增生的形態(tài)特征關系密切。3、腫瘤細胞增生標志物：794、癌基因、生長因子與受體：正常細胞有原癌基因，當原癌基因激活后變成癌基因，可引起細胞惡性轉(zhuǎn)化癌基因的作用中又需要生長因子及其受體的協(xié)同參與～。例：HER-2/neu基因Ras基因表皮生長因子受體4、癌基因、生長因子與受體：805、腫瘤抑制基因和基因產(chǎn)物：是指抑制腫瘤發(fā)生、發(fā)展的基因（抑癌基因）和其基因產(chǎn)物。例：Rb基因p53基因等5、腫瘤抑制基因和基因產(chǎn)物：81主要腫瘤標志物檢測:1、CEA2、AFP3、CA12-54、PSA5、CA19-96、NSE7、SCC8、HCG注：標志物的本質(zhì)(nature)、檢測方法(mathod)、參考值范圍(referencevalue)、臨床意義(significance)及注意事項(attention）。主要腫瘤標志物檢測:1、CEA2、821、CEA（carcinoembryonicantigen）癌胚抗原-于1965年被發(fā)現(xiàn)，通過由人直腸組織提取物免疫動物獲得抗血清并經(jīng)吸收。再將此抗血清與腫瘤/正常組織分別反應，只與腫瘤組織有反應。由于此抗原也能在胚胎組織中發(fā)現(xiàn)，故稱“癌胚抗原”。檢測方法有ELISA、RIA、自動免疫～1、CEA（carcinoembryonicantigen83CEA在正常情況下由胎兒胃腸道上皮、胰腺和肝細胞合成，經(jīng)胃腸道代謝。腫瘤狀態(tài)時CEA大量分泌并經(jīng)入血和淋巴液循環(huán)導致血清中CEA上升。正常群體CEA值：＜3ug/L;吸煙者＜5ug/L;孕婦的前6個月升高,產(chǎn)后恢復測得值＞60ug/L時,腫瘤?(惡性/良性)CEA在正常情況下由胎兒胃腸道上皮、胰腺和肝細胞合成，經(jīng)胃腸84意義及注意事項:(significanceandattentions)1、值升高—胃、結/直腸、肺癌，胰膽道與膀胱癌（待檢物來源）2、注意—良性腫瘤（病癥）也可升高轉(zhuǎn)移時升高，術后恢復持續(xù)升高，示預后不良不宜選為篩選（假陽/陰性）(falseposiyive/negative)意義及注意事項:852、AFP（alpha-fetoprotein）：甲胎蛋白-是胚胎期肝臟和卵黃囊合成為胎兒循環(huán)中主要蛋白，出生后水平下將，18個月后至正常人水平。肝細胞惡變又可獲其功能導致血清含量增高(rejuvenated,返祖)，目前成為肝細胞和生殖（非精原）細胞惡性腫瘤的標志物。2、AFP（alpha-fetoprotein）：86AFP的檢測方法同前外，用金標記測定正常成人：血清＜10ug/L；妊娠14周起上升至2～3g/L后逐降，足孕70mg/L分娩后迅速下降。意義：＞500ug/L多見于原發(fā)肝癌。良性肝病也可升高，但多＜200ug/L。多用于篩選、判斷預后及調(diào)整治療等。AFP的檢測方法同前外，用金標記測定873、CA12-5/5、CA19-9：屬糖類抗原標志物，使由腫瘤細胞分泌釋放或存于該細胞表面的抗原，又歸屬腫瘤相關抗原。有CA12-5（卵巢癌相關）；CA19-9（胰腺、腸癌～）；乳腺癌（CA15-3）消化系統(tǒng)（CA242）及CA50等。3、CA12-5/5、CA19-9：88CA12-5：在卵巢腫瘤上皮和Mullerian副腎管來源的組織中表達（病理/正常）正常人血清≤35U/ml。CA12-5血中代謝快，測得值反映近期CA12-5值升高—惡性腫瘤（晚）少數(shù)異位癥、良性等CA12-5監(jiān)測（動態(tài)），反映病情、預后（手術指征）CA12-5：在卵巢腫瘤上皮和Mullerian89CA19-9：一種與胰腺、膽囊、結腸和胃癌等相關的腫瘤標志物，本質(zhì)為細胞膜上的糖脂質(zhì)，因制備的單克隆抗體而命名。正常參考值≤37U/ml。胰腺癌的陽性率70～92%，膽管癌66%胃癌25～60%，肝癌56～60%，結直腸癌18～58%。伴黃疸的良性疾患也可升高，但一般不＞120U/ml，隨處置而下降。CA19-9：一種與胰腺、膽囊、結腸和904、PSA（prostatespecificantigen）：前列腺特異抗原—由前列腺分泌的單鏈糖蛋白，存在于前列腺管道上皮細胞中發(fā)生前列腺癌時血清中含量升高。正常男性：＜4ug/L（f-＜1ug/L）升高：前列腺癌、增生、炎癥等應用：普查、療程跟蹤、復發(fā)監(jiān)測4、PSA（prostatespecificantige916、NSE(neuronspecificenolase)神經(jīng)元特異性烯醇化酶—是烯醇化酶的同功酶，正常存在于神經(jīng)組織和RBC中，正常人血清值＜13ug/ml。升高：小細胞肺癌、神經(jīng)母細胞瘤和其內(nèi)分泌腫瘤及腦損傷。注意：標本禁止溶血動態(tài)監(jiān)測可用于療效、評估預后等。6、NSE(neuronspecificenolase)927、SCC（鱗狀細胞癌抗原）：屬糖蛋白是一種鱗狀細胞癌標志物（宮頸癌、肺癌、頭頸部癌等）,血清＜1.5ug/L。8、HCG（人絨毛膜促性腺激素）：作為絨毛膜上皮細胞癌標志，異位妊娠？檢測HCG包括總HCG和f-HCG。～7、SCC（鱗狀細胞癌抗原）：屬糖蛋白93

腫瘤標志物的應用原則

（～appliedprinciple）相關的標志物聯(lián)合檢測—提高靈敏度陽性標志物的動態(tài)監(jiān)測—提高準確性

（union/dynamics）不宜憑單項、單次的檢測結果下診斷結論腫瘤標志物的應用原則

（～app94

腫瘤標志物的聯(lián)合應用

（～jointapply）例：肺癌：NES、CEA、CYFRA21-1乳腺癌：CA15-3、CEA肝癌：AFP、CEA、AKP同功酶胰腺癌：CA19-2、CA242、CA50卵巢癌：CA12-5、CEA、CA19-9HCG腫瘤標志物的聯(lián)合應用

（～j95

自身免疫性疾病的免疫學檢驗

（diagnosticofautoimmunedisease）Systemiclupuserythematosus；SLERheumatoidarthritis；RA自身免疫性疾病的免疫學檢驗

（diagnost96Hashimoto’sthyroiditis

AnkylosingspondylitisHashimoto’sthyroiditis

Anky97Autoimmunediseases:Aconditioninwhichthebodyrecognizesitsowntissuesasforeignanddirectsanimmuneresponseagainstthem.自身免疫病：指因自身免疫應答反應而導致破壞自身正常組織結構并引起臨床癥狀。（由：自身抗體/自身反應性T淋巴細胞）Autoimmunediseases:98臨床各科自身免疫性疾病舉例(附表)臨床各科自身免疫性疾病舉例(附表)99累及系統(tǒng)自身免疫性疾病舉例(example)血液系統(tǒng)自身免疫性溶血性貧血、特發(fā)性血小板(blood～)減少性紫癜、特發(fā)性白細胞減少癥等神經(jīng)肌肉多發(fā)性硬化癥、重癥肌無力、脫髓鞘疾(nerve/muscle)病等內(nèi)分泌系統(tǒng)原發(fā)性腎上腺皮質(zhì)萎縮、慢性甲狀腺(endocrine～)炎、胰島素依賴性糖尿病等消化系統(tǒng)非特異性潰瘍性結腸炎、慢性活動性肝(digestive～)炎、惡性貧血與萎縮性胃炎等泌尿系統(tǒng)自身免疫性腎小球腎炎、肺—腎出血性(uropoietic～)綜合癥等結締組織類風濕性關節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、皮(connectivetissue)肌炎、硬皮病等累及系統(tǒng)自身免疫性疾病舉例(example)100檢測——自身抗體(Autoantibodies)

免疫復合物(immunecomplex)其他相關因素（Ig、complement

lymphocyte、cytokine,etc）檢測——自身抗體(Autoantibodies)101Autoantibodies:Autoantibodyhavebeendefinedasanaberrationofanessentiallyphysiologicalandprotectiveprocess,representingimmunoglobulinsreactingagainstself-molecules.（由于機體自身免疫的發(fā)生，使得機體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生了針對機體自身組織成分的抗體，稱～。）Autoantibodies:102自身抗體(Autoantibodies)：包括：抗核抗體(胞核內(nèi)成分)(anti-nuclearantibody;ANA)

抗細胞漿(cytoplasmic)成分抗體抗磷脂(anti-phospholipid)抗體類風濕因子(rheumatoidfactor,RF)自身抗體(Autoantibodies)：103抗核抗體（廣義）：抗細胞核內(nèi)所有抗

原成分(核質(zhì)\膜\仁\DNA等)的自身抗體。抗核抗體（廣義）：抗細胞核內(nèi)所有抗104抗體名稱檢測所用抗原臨床意義抗核抗體(均質(zhì)型）HEp-2細胞抗原片高滴度主要見于SLE,低滴或大鼠肝細胞印片度可見于RA、慢性肝病、傳單或藥物誘發(fā)的狼瘡者抗核抗體（斑點型）混合性結締組織病、SLE硬皮病、SS等。抗核抗體（核膜型）高滴度幾乎僅見于SLE抗核抗體（核仁型）高滴度對硬皮病特異dsDNA抗體馬疫錐蟲或短膜是SLE的特征性抗體RNP抗體ENA抗原硬皮病滴度高，其它自身免疫病低水平陽性，RA一般為陰性Sm抗體是SLE的標志性抗體（其它疾病很少陽性），但敏感性只有30％左右Scl-70抗體系統(tǒng)性硬化癥的標記抗體SSA/Ro、SSB/La抗體干燥綜合征J0-1抗體多發(fā)性皮肌炎和皮肌炎的標記抗體抗體名稱檢測所用抗原105抗細胞漿成分抗體:抗線粒體抗體抗肌動蛋白抗體抗溶酶體抗體抗Jo-1抗體等方法:免疫組化意義:肝病的鑒別肌炎肺纖維化等抗細胞漿成分抗體:106抗組織細胞抗體:1、抗腎小球基底膜(anti-glomeularbasementmembran)抗體（肺出血腎炎綜合征,Goodpasture～）2、抗甲狀腺（anti-thyroid）抗體（甲狀腺炎thyroiditis,甲亢Graves病）3、抗胰島(insular)細胞抗體（胰島素依賴性糖尿病,IDDM）(insulindependentdiabetesmellitus)抗組織細胞抗體:107類風濕因子（rheumatoidfactor）：是變性IgG刺激機體產(chǎn)生的一種自身抗體，主要存在于類風濕關節(jié)炎患者的血清和關節(jié)液內(nèi)（分IgM/G～E型）。檢測：乳膠凝集測IgM型；速率法不分型參考值：乳膠法≤1:10;速率法＜30U/L意義:類風濕病,自身免疫病的輔助～類風濕因子（rheumatoidfactor）：108類風濕因子在病人和健康人中檢出情況70%～90%的RA患者RF呈陽性。但RF并不是RA獨有的特異性抗體。2健康人群20混合性結締組織病10皮肌炎24系統(tǒng)性硬皮病50結節(jié)性多動脈炎95干燥綜合征33～55SLE70～90RA陽性率（%）疾病類風濕因子在病人和健康人中檢出情況70%～90%的RA患者R109循環(huán)免疫復合物（CIC）測定【原理】利用濁度增強劑或促凝劑-聚乙二醇（PEG）、葡聚糖等，在一定濃度時可選擇性析出一定分子大小的抗原抗體復合物而形成濁度，其濁度的程度與抗原抗體復合物的量呈正比。由于濁度的形成可導致反射、散射以及吸收入射光線，使原入射光衰減。此時，通過測定透射光衰減（以A值表示）檢測免疫復合物的量。循環(huán)免疫復合物（CIC）測定110循環(huán)免疫復合物檢測流程(方法)

1、測定管+血清對照管+血清（4.166%PEG2.0ml）（硼酸緩沖液2.0ml）

2、混勻后4℃，60min

3、室溫預溫30min，A450nm比濁。

循環(huán)免疫復合物檢測流程(方法)

2、混勻后4℃，111【參考范圍】測定波長為450nm時，數(shù)值為0.015～0.05【臨床意義】CIC的量增高，反映血清中存在免疫復合物量增多。已知CIC增多與許多疾病相關，包括：自身免疫性疾病、傳染性疾病、腫瘤及某些超敏反應性疾病等………-------【參考范圍】112移植免疫的實驗室檢測移植(transplantation):是應用自體或異體的正常細胞、組織或器官置換病變的或功能缺損的細胞、組織和器官，以維持和重建機體生理功能的新型治療方法。移植排斥反應的防與治是關鍵(組織配型、供體選擇、免疫抑制劑用和術后的免疫學監(jiān)測～)移植免疫的實驗室檢測移植(transplantation):113免疫排斥（immunerejection）：指器官、組織或細胞移植后，受體發(fā)生免疫應答，引起針對移植物的免疫損傷而使其喪失功能的一個過程。表現(xiàn)：hyperacuterejectionacuterejectionchronicrejection免疫排斥（immunerejection）：指器官、組織或114移植的組織配型(matching):（一）選擇組織相匹配的供者1、一般情況:供物狀態(tài)、全身情況、年齡2、ABO血型相容（擬輸血）3、HLA相容性（受、供者HLA等位基因相合的數(shù)目越多越好）（二）HLA相容程度測試1、血清學(serological～)分型2、細胞學(cytological～)分型3、基因(gene)分型移植的組織配型(matching):（一）選擇組織相匹配的供1151、血清學分型(serologicaltyping)：原理—利用各種已知的HLA標準血清型，與檢測細胞反應，添加補體后觀察細胞反應（CDC）～micro-complementdependentcytotoxiciti

技術要點（keypoint）—分離淋巴細胞,與標準抗血清反應，添加補體，死細胞染色,記數(shù)、判斷。評價—較理想，找標準抗血清（antiseraofdefinedspecificity）難。

1、血清學分型(serologicaltyping)：1162、細胞學(cytological)分型—采用淋巴細胞混合培養(yǎng)（MLC）,(twoway)/oneway)雙向MLC—受、供體淋巴細胞混合體外培養(yǎng)，彼此作用，觀察細胞形態(tài)與細胞增殖，互不影響示受、供體間HLA型相匹配否則～技術要點(keypoint)—分離計數(shù)彼此淋巴細胞，共孵育，染色計數(shù)轉(zhuǎn)化細胞～評價(evalu)—用于移植前的交叉配合試驗，但不能判定HLA-D型～2、細胞學(cytological)分型—采用淋巴1173、基因(gene)分型①限制性片段長度多態(tài)性（RFLP）分型②聚合酶鏈反應-序列特異性寡核苷酸探針（PCR-SSOP）③PCR-序列特異性引物（PCR-SSP）分型④PCR-單鏈構象多態(tài)性（PCR-SSCP）分型⑤PCR指紋圖譜技術⑥其他3、基因(gene)分型118（三）交叉配型(crossmatching)試驗

目的：檢測受者體內(nèi)是否存在抗供者的特異性抗體,避免移植物的超急排斥(HVGR)～技術要點：供者淋巴細胞+受者血清+補體方法：1、微量細胞毒試驗，2、流式細胞術.（三）交叉配型(crossmatching)試驗

目的：檢測119排斥反應的免疫學監(jiān)測

(immunologicalmonitoringofrejection)1、細胞免疫學監(jiān)測①T淋巴細胞數(shù)量、功能以及亞群比例等，②殺細胞活性（CTL和NK）。2、細胞因子監(jiān)測：Th1型/Th2型Th1型包括IL-2、TNF-a、IFN-r等Th2型包括IL-4、IL-10等3、抗HLA抗體檢測4、蛋白、酶類、補體檢測排斥反應的免疫學監(jiān)測

(immunological120抗HLA抗體檢測：原理—與異體排斥反應有關的體液、細胞免疫效應主要是針對HLA抗原的～因為測得血清中PRA的水平更有助于移植時受者對移植物的敏感程度包括群體反應性抗體(PRA)意義：移植術前后的PRA高低與術后急性排斥反應明顯有關。抗HLA抗體檢測：121Whymonitoringtheconcentration

ofdruges?藥物應用的臨床特征:病人不同時期狀況變化個體差異身高體重年齡個人吸收狀況懷孕肝，腎等代謝功能其他疾病Whymonitoringtheconcentrati122目的與手段通過測定血液中藥物濃度,并利用藥代動力學的原理和公式使給藥方案即時個體化,以提高藥效效,避免或減少毒性反應。檢測:fluorescencepolarizationimmunoassay(FPIA)

;microgranularenzyme-linkedimmunoassay,(MEIA)和Enzyme-linkedimmunoassay(ELISA)檢測的藥物：環(huán)孢霉素（CsA);他克莫司(FK506);霉酚酸（MPA）目的與手段通過測定血液中藥物濃度,并利用藥代動力學的原理和公123

其他免疫檢測感染免疫相關檢測超敏反應性檢測皮試其他免疫檢測感染免疫相關檢測124超敏反應性檢測1、血清IgE測定測定方法：ELISA正常參考值：總IgE＜100IU/ml意義：超敏反應性疾病的輔助指標自身免疫病、腫瘤或炎癥預測兒童是否易發(fā)超敏反應性疾病。超敏反應性檢測1252、人嗜堿性粒細胞脫顆粒試驗【原理】嗜堿性粒細胞內(nèi)顆粒能被堿性染料著色，當加入過敏原，其與結合在細胞表面的IgE形成橋連反應，導致該細胞脫顆粒，結果該細胞不被染料著色，記數(shù)著色細胞并以其減少程度判斷結果。目前已漸被淘汰。2、人嗜堿性粒細胞脫顆粒試驗1263、皮試：3、皮試：1271、Ⅰ型變態(tài)反應:皮試后15min產(chǎn)生結果（青霉素、多種變應原如花粉、塵螨等）2、Ⅲ（Arthus）反應:為5～12h后產(chǎn)生～（異種血清接種含Ag，多次刺激產(chǎn)生Ab）（再次注射，出現(xiàn)局部過敏反應～）3、Ⅳ型變態(tài)反應:皮試后24～48h后產(chǎn)生（結核菌素試驗、等）。1、Ⅰ型變態(tài)反應:128感染性疾病的免疫學檢測包括(including)：1、病毒(viral)感染（病毒性肝炎,ToRCH感染,HIV感