第六章、非特異性免疫學習目標：掌握非特異性免疫的概念;掌握非特異性免疫的構成;了解影響非特異性免疫的的因素。第一節、非特異性免疫的構成

第二節、影響非特異性免疫的因素非特異性免疫:又稱先天性免疫,是個體出生后就具有的天然免疫力,是動物長期進化過程中形成的,可以和其他性狀一起遺傳給后代。非特異性免疫的作用范圍廣,能識別與清除一般性異物,但不能區別異物之間的差異,沒有特殊性,所以稱為非特異性免疫。在抗傳染免疫中,非特異性免疫發揮作用最快,起著第一線的防御作用,是特異性免疫的基礎和條件。第一節、非特異性免疫的構成血腦屏障非特異性免疫因素皮膚和黏膜屏障防御屏障胎盤屏障吞噬作用補體體液中非特異性物質備解素溶菌酶機體的不感受性炎癥反應一、防御屏障是生理狀態下具有的正常組織結構,包括皮膚和黏膜構成的外部屏障和多種重要器官中的內部屏障。（一）皮膚和黏膜屏障結構完整的皮膚和黏膜能阻擋大多數病原微生物的侵入;腺體分泌的酸、酶等具有抑菌和殺菌作用;氣管、支氣管的纖毛有利于異物的排出;正常菌群對病原微生物的侵入也有抑制作用。（二）血腦屏障是防止中樞神經系統發生感染的重要防衛機構。由腦毛細血管壁、軟腦膜、和膠質細胞等組成。能阻止病原體和大分子毒性物質隨血液進入腦組織和腦脊液。（三）胎盤屏障保護胎兒在母體子宮內免受感染的一種防衛機構。反芻獸胎盤呈結締組織絨毛膜型,胎兒與母體之間組織層次為5層;馬、驢和豬的胎盤則為上皮絨毛膜型,胎兒與母體之間的組織層次為6層;犬和貓的胎盤是內皮絨毛膜型的,胎兒與母體之間組織層次為4層;人和其他靈長類動物的胎盤是血絨毛膜型的,母體血液可以直接和滋養層接觸,母體和胎兒之間的組織層次是3層。都能有效地阻止絕大多數病原微生物的入侵。二、吞噬作用在病原體侵入的局部,通常表現為炎癥反應,局部的血管擴張、血流減慢,中性粒細胞等吞噬細胞被吸引至病原體存在部位,這種吸引吞噬細胞至炎癥部位的現象叫趨化作用。（一）吞噬細胞的種類吞噬細胞是吞噬作用的基礎。主要包括嗜中性粒細胞和單核吞噬細胞兩類。單核巨噬細胞中性粒細胞（二）吞噬過程當吞噬細胞與病原菌或其他異物接觸后,能伸出偽足將其包圍,并吞入細胞漿內形成吞噬體。然后吞噬體向溶酶體靠近,并相互融合成吞噬溶酶體。接著溶酶體中的各種水解酶和其他殺菌物質釋放,即可發揮消化和破壞異物的作用。巨噬細胞伸出偽足(P)巨噬細胞對吞噬的細菌進行處理示意圖巨噬細胞胞對吞噬噬的細菌菌進行處處理巨噬細胞胞伸出偽偽足吞噬噬侵入的的大腸桿桿菌（三）吞吞噬的結結果一般細菌菌在吞噬噬后1-2h內內便可被被殺滅、、消化并并排出殘殘渣。這這種吞噬噬稱為完全吞噬噬。有些細菌菌如結核核桿菌、、布氏桿桿菌等細細胞內寄寄生菌及及一些病病毒被吞吞噬后,不但不不能殺滅滅,反而而可在吞吞噬細胞胞內生長長、繁殖殖,甚至至隨吞噬噬細胞的的游走而而擴散,引起更更廣泛的的感染。。這種吞吞噬稱為為不完全吞吞噬。過度的吞吞噬,由由于釋放放出溶酶酶體酶,往往造造成周圍圍組織的的損傷。。三、體液液中的非非特異性性物質正常體液液中含有有多種非非特異性性的物質質,具有有廣泛的的抑菌、、殺菌及及協助和和加強吞吞噬的作作用。（一）補補體1.補體體的概念念是正常人人和動物物血清中中一組不不耐熱的的具有酶酶活性的的球蛋白白。由9大類近近20種種球蛋白白組成,又稱為為補體系系統。2.補體體系統的的生物學學活性在正常生生理情況況下,血血清中的的補體呈呈無活性性狀態。。只有被被激活后,才能能發揮一一些列的的生物活活性作用用。補體的激激活物主主要是抗原抗體體復合物物(EA)以及其他他一些可溶性激激活因子子。補體能能與任何何一種EA結合合,沒有特異異性。補體激激活后,可使細細菌出現現不可逆逆地損傷傷并使細細菌細胞胞發生溶溶解,起起到殺菌菌、溶菌菌或溶血血作用。。3.補體體的功能能(1)溶菌作用用:動物的的紅細胞胞、血小小板、淋淋巴細胞胞等組織織細胞、、G-菌、有囊囊膜病毒毒等都能能被補體體破壞,而G+菌、酵母母、霉菌菌、癌細細胞等對對補體不不敏感。。動物缺乏乏補體時時易發生生細菌感感染。(2)抗病毒作作用:C1、、C2、、C3和和C4有有增強抗抗體對病病毒的中中和作用用。(3)調理作用用:補體激激活過程程中,產產生許多多具有生生物活性性的片段段,具有有增強吞吞噬細胞胞的吞噬噬作用及及免疫反反應。(4)炎癥介質質作用:吸引吞吞噬細胞胞到達炎炎癥區域域,加劇劇局部炎炎癥反應應。（二）備備解素正常血清清中的備備解素是是一種球蛋白,在補體體和鎂離離子存在在的條件件下,具具有溶解G-菌的作用用。（三）溶溶菌酶一種不耐熱的的堿性蛋蛋白質,廣泛分分布于血血清和多多種外分分泌體液液中,能能水解G+菌。若有抗抗體和補補體存在在，使G-菌的脂多多糖和脂脂蛋白受受到破壞壞，則破壞G-菌的細胞胞。四、炎癥癥反應組織釋放放溶菌酶酶、白細細胞介素素等抗感感染物質質，局部部產生大大量有機機酸。五、機體體的不感感受性機體生來來就對某某種微生生物或毒毒素缺乏乏感受性性。第二節、、影響非非特異性性免疫的的因素影響因素素遺傳因素素年齡因素素環境因素素種品種個體氣象因素素地理因素素飼養管理理因素第七章、、特異性性免疫學習目標標:掌握握特異性性免疫的的概念及及其發生生的條件件;掌握握抗原、、抗體的的概念,掌握構構成抗原原的條件件;掌握握免疫應應答過程程及影響響特異性性免疫應應答的因因素,了了解免疫疫應答獲獲得的途途徑。第一節、、特異性性免疫發發生的條條件特異性免免疫的概概念第二節、、免疫應應答第三節、、免疫應應答的效效應物質質及作用用第四節、、特異性性免疫的的抗感染染作用第五節、、特異性性免疫獲獲得途徑徑本章主要要學習內內容特異性免免疫的概概念特異性免免疫:又又稱獲得得性免疫疫,是機機體在出出生后受受抗原刺刺激后獲獲得的免免疫力。。這種免疫疫力能對對該抗原原物質的的再次刺刺激產生生強烈的的排斥、、清除效效應。具有有高高度度的的特特異異性性,并并且且隨隨同同抗抗原原接接觸觸的的次次數數增增多多而而加加強強。。一、、免免疫疫系系統統免疫疫器器官官免疫疫系系統統免疫疫細細胞胞中樞樞免免疫疫器器官官外周周免免疫疫器器官官T細細胞胞B細細胞胞K細細胞胞NK細細胞胞單核核吞吞噬噬細細胞胞粒細細胞胞免疫疫器器官官是是指指淋淋巴巴細細胞胞和和其其他他免免疫疫細細胞胞發發生生、、分分化化成成熟熟、、定定居居和和增增殖殖以以及及產產生生免免疫疫應應答答的的場場所所。。免疫疫器器官官中樞樞免免疫疫器器官官外周周免免疫疫器器官官骨髓髓胸腺腺腔上上囊囊脾臟臟淋巴巴結結哈德德氏氏腺腺其他他淋淋巴巴組組織織中樞樞免免疫疫器器官官又又稱稱初初級級或或一一級級免免疫疫器器官官,是是淋淋巴巴細細胞胞等等免免疫疫細細胞胞發發生生、、分分化化和和成成熟熟的的場場所所。。骨髓髓:多多能能干干細細胞胞→→骨骨髓髓干干細細胞胞(粒粒、、單單核核細細胞胞前前身身)、、淋淋巴巴干干細細胞胞(T、、B細細胞胞前前身身),B細細胞胞成成熟熟的的場場所所。。K、、NK細細胞胞也也來來源源于于骨骨髓髓。。胸腺腺:T細細胞胞成成熟熟的的場場所所,來來自自骨骨髓髓的的淋淋巴巴干干細細胞胞→→具具有有免免疫疫活活性性的的胸胸腺腺依依賴賴細細胞胞(T)。。腔上上囊囊:禽禽類類特特有有,來來自自骨骨髓髓的的淋淋巴巴干干細細胞胞→→具具有有免免疫疫活活性性的的囊囊依依賴賴細細胞胞(B細細胞胞)。。外周周免免疫疫器器官官又又稱稱次次級級免免疫疫器器官官,是是成成熟熟的的T細細胞胞和和B細細胞胞定定居居、、增增殖殖和和對對抗抗原原刺刺激激進進行行免免疫疫應應答答的的場場所所。。脾臟臟:動動物物最最大大的的免免疫疫器器官官、、大大量量T、、B細細胞胞(B>T)、、豐豐富富的的網網狀狀細細胞胞、、巨巨噬噬細細胞胞等等。。淋巴巴結結:T、、B細細胞胞聚聚集集的的器器官官(T>B)、、巨巨噬噬細細胞胞、、樹樹突突細細胞胞等等哈德德氏氏腺腺:禽禽類類、、B細細胞胞為為主主、、獨獨立立分分泌泌抗抗體體。。其他他淋淋巴巴組組織織:扁扁桃桃體體、、腔腔性性器器官官內內壁壁及及全全身身的的淋淋巴巴組組織織。。尤尤其其消消化化、、呼呼吸吸、、泌泌尿尿生生殖殖道道凡參參與與免免疫疫應應答答或或與與免免疫疫應應答答有有關關的的細細胞胞統統稱稱為為免免疫疫細細胞胞,其其種種類類很很多多。。免疫細細胞T細胞胞B細胞胞K細胞胞NK細細胞單核吞吞噬細細胞粒細胞胞免疫活活性細細胞:免疫疫細胞胞中,接受受抗原原物質質刺激激后能能分化化增殖殖,產產生特特異性性免疫疫應答答的細細胞T細胞胞綿羊紅紅細胞胞受體體:T細胞胞+綿綿羊紅紅細胞胞→E玫瑰瑰花環環T細胞胞抗原原識別別受體體(TCR):TCR+抗原原→免免疫應應答1.殺殺傷T細胞胞(TK):細細胞毒毒性T細胞胞(TC),主主要的的效應應T細細胞、、殺傷傷作用用最強強。2.輔輔助T細胞胞(TH):幫幫助T、B細胞胞識別別抗原原、促促進B細胞胞分化化,提提高TC殺殺傷性性。3.抑抑制性性T細細胞(TS):抑制制TH而調調節T、B細胞胞的免免疫功功能(TH:TS)。4.記記憶T細胞胞(TM):記記憶,受同同種抗抗原刺刺激后后迅速速分化化出大大量TC。。B細胞胞具有表表面抗抗原受受體BCR,具具有抗抗原提提呈作作用。。一個個B細細胞只只能識識別一一種抗抗原,產生生一種種抗體體。B細胞漿細胞胞+記記憶細細胞漿細胞胞抗體再次刺刺激抗體抗原刺激K細胞胞殺傷細細胞，，單獨獨不能能殺傷傷靶細細胞、、表面面有與與IgG的的Fc段結結合的的受體體。K細胞胞+IgG→激激發K細胞胞活性性→釋釋放細細胞毒毒→破破壞靶靶細胞胞→ADCC作作用。。(抗抗體依依賴細細胞介介導的的細胞胞毒性性作用用)能夠介介導ADCC作作用的的還有有嗜中中性白白細胞胞、單單核細細胞和和嗜伊伊紅白白細胞胞?？梢詺⑺啦〔《靖懈腥镜牡乃拗髦骷毎?、惡惡性腫腫瘤細細胞、、移植植物中中的異異體細細胞及及大的的病原原體等等。NK細細胞自然殺殺傷細細胞,不需需要與與抗體體特異異結合合、非非特異異殺傷傷、也也能發發揮ADCC作作用(與結結合了了靶細細胞的的抗體體結合合,破破壞實實質性性組織織中的的靶細細胞)。能合成成和分分泌IFN-γγ,且且IFN-γ和和白細細胞介介素(IL-2)能能增強強其殺殺傷活活性。。NK細細胞(體外外)+IL-2→活活化增增殖→→能在在體外外殺傷傷自體體和異異體新新鮮腫腫瘤細細胞,而對對外周周淋巴巴細胞胞無殺殺傷作作用→→淋巴巴因子子活化化的殺殺傷細細胞(LAK)單核吞噬噬細胞血液中的的單核細細胞和組組織中的的各種巨巨噬細胞胞吞噬作用用:吞噬噬病原體體、腫瘤瘤細胞、、衰老細細胞參與免疫疫反應:吞噬、、濃集、、處理抗抗原,存存貯、傳傳遞抗原原信息參與免疫疫反應調調節:分分泌的活活性物質質能調節節作用粒細胞細胞漿中中含有顆顆粒的白白細胞統統稱為粒粒細胞。。用姬姆薩薩染色后后,根據據胞漿顆顆粒的染染色特性性將其分分為：嗜中性粒粒細胞:血液中中的主要要吞噬細細胞,高高度移動動性和吞吞噬功能能嗜堿性粒粒細胞和和肥大細細胞:表面有有IgGFc受受體,顆顆粒內有有組織胺胺等活性性介質,能引起起Ⅰ型變變態反應應嗜酸性粒粒細胞:抗寄生生蟲,吞吞噬抗原原抗體復復合物,釋放組組胺酶等等,在ⅠⅠ型變態態反應中中發揮調調節作用用二、抗原(antigen,Ag)抗原(免免疫原):凡能能刺激機機體產生生抗體和和致敏淋淋巴細胞胞并能與與之結合合引起特特異性反反應的物物質。（一）抗抗原的性性質免疫原性性指能刺激激機體產產生抗體體和致敏敏淋巴細細胞的特特性。反應原性性指抗原與與相應的的抗體或或致敏淋淋巴細胞胞發生反反應的特特性,又又稱為免免疫反應應性?？乖庖咭咴院秃头磻怨餐瑯嫵煽箍乖目乖?。完全抗原原：同時具具有免疫疫原性和和反應原原性的抗抗原。如如微生物物和異種種蛋白質質。不完全抗抗原(半抗原原)只有有反應原原性而沒沒有免疫疫原性的的抗原。。如多糖糖和某些些藥物。?？乖碳C體體抗體致敏淋巴細胞特異性結結合反應原性性免疫原性性抗原性（二）構構成抗原原的條件件1、異物物性抗原通常常是非自自身物質質。親緣關關系越遠遠,與自自身組織織結構差差異越大大的物質質,其抗抗原性越越強。自身組織織通常沒沒有免疫疫原性,但由于于燒傷、、感染、、電離輻輻射或某某些異物物的作用用而使一一些組織織蛋白質的的結構發發生改變變,從而成成為自身身抗原。。由于機體體的識別別功能紊紊亂,也也可把一一些本來來不具抗抗原性的的自身物物質視為為異物,而對之之發生免免疫反應應,導致致自身免疫疫病。2、大分分子膠體體抗原必須須是大分分子膠體體,分子子量通常常在1萬萬以上,在一定定條件下下,分子量越越大,抗抗原性越越強。分子量小小于5000的的物質其其免疫原原性較弱弱。分子子量在1000以下的的物質為為半抗原原,沒有有免疫原原性,但但與大分分子蛋白白質載體體結合后后可獲得得免疫原原性。3、化學學組成、、分子結結構和立立體構象象的復雜雜性分子結構構和空間間構象越越復雜,免疫原原性越強強?？乖瓫Q定定簇(抗原決決定基、、抗原表表位):抗原分分子表面面具有特特殊立體體構型和和免疫活活性的化化學基團團?？乖瓫Q定簇簇決定抗抗原的特特異性。?？乖Y合合價:抗原分分子表面面能與抗抗體結合合的決定定簇總數數。共同抗原原(交叉抗抗原、類類屬抗原原):兩兩種抗原原共有的的抗原決決定簇。。4、物理理狀態顆粒性抗抗原的免免疫原性性通常比比可溶性性抗原強強，可溶溶性抗原原分子聚聚合后或或吸附在在顆粒表表面可增增強其免免疫原性性。（三）抗抗原的類類型抗原性質質完全抗原原不完全抗抗原抗原來源源與機體體的親緣緣關系異種抗原原同種異型型抗原自身抗原原異嗜抗原原對T細胞胞的依賴賴性胸腺依賴賴性(TD)抗抗原非胸腺依依賴性(TI)抗原抗原分類類刺激機體體B細胞胞產生抗抗體的過過程中需需要T細細胞協助助,這種種抗原稱稱為胸腺腺或T細細胞依賴賴性抗原原。絕大大多數抗抗原都屬屬于此類類。不需要T細胞協協助就能能直接刺刺激B細細胞產生生抗體,這種抗抗原稱為為非胸腺腺依賴性性抗原。。如細菌菌的脂多多糖、莢莢膜多糖糖、鞭毛毛蛋白等等。（四）重重要的天天然抗原原1、微生生物抗原原細菌抗原原：菌體體抗原(O抗原原)、鞭鞭毛抗原原(H抗抗原)、、莢膜抗抗原或表表面抗原原(K抗抗原)。。病毒抗原原：毒素：細細菌的外外毒素抗抗原性很很強。2、高等等生物的的抗原動物血清清與組織織浸液、、各種酶酶。3、激素素第二節、、免疫應應答(Immuneresponse)概念:免疫應應答是指指動物機機體免疫疫系統受受到抗原原物質刺刺激后,免疫細細胞對抗抗原分子子的識別別并產生生一系列列復雜的的免疫連連鎖反應應和表現現出一定定的生物物學效應應的過程程。場所:主要為為外周免免疫器官官(淋巴巴結和脾脾臟)意義:及時清清除外來來異物,保持機機體內環環境的穩穩定,但但不適當當的免疫疫應答也也會造成成機體的的損傷或或生理功功能紊亂亂,表現現為免疫疫缺陷、、超敏反反應或自自身免疫疫性疾病病。一、免疫疫應答的的過程免疫應答答的基本本過程可可人為地地分為三個階段段致敏階段段又稱感應階段,是抗原物質進入體內,抗原遞呈細胞對其識別、捕獲、加工處理和遞呈以及抗原特異性淋巴對抗原的識別階段。反應階段段又稱增殖與分化階段,是抗原特異性淋巴細胞識別抗原后活化,進行增殖與分化,以及產生效應性淋巴細胞和效應分子的過程。效應階段段由活化的效應性細胞CTL與TD細胞和效應分子抗體與細胞因子發揮細胞免疫效應和體液免疫效應的過程。

(一)感感應階段段(識別別階段、、致敏階階段)抗原提呈呈細胞(APC):指指能捕捉捉、加工工、處理理抗原,并將抗抗原提呈呈給抗原原特異性性淋巴細細胞的一一類免疫疫細胞。。專職:樹樹突狀細細胞、單單核吞噬噬細胞系系統、B細胞。。兼職:內內皮細胞胞、上皮皮細胞和和激活的的T細胞胞AgAPCTB相互作用用活化TH分泌淋巴因因子(二)反反應階段段(應答答階段;活化、、增殖、、分化階階段)識別抗原原后的淋淋巴細胞胞在細胞胞因子的的作用下下發生活活化,形形成淋巴巴母細胞胞、母細細胞增殖殖、分化化為致敏敏淋巴細細胞和漿漿細胞及及少量的的記憶細細胞。AgTT淋巴母細胞致敏淋巴細胞效應T細胞TmAgB漿母細胞漿細胞BmAb（三）效效應階段段漿細胞分分泌的抗抗體和致致敏淋巴巴細胞釋釋放效應應性淋巴巴因子或或直接發發揮特異異性細胞胞殺傷作作用。效應T細胞漿細胞淋巴因子子直接殺傷傷Ab(IgM、G、、A、D、E)細胞免疫疫體液免疫疫二、免疫疫應答的的類型(一)體體液免疫疫(B細細胞介導導)概念:指指B細胞胞在抗原原刺激下下活化、、增殖、、分化為為漿細胞胞,產生生抗體而而完成的的免疫應應答。過程：TIAg直直接作作用于于B細細胞引引起B細胞胞活化化。TDAg被被巨噬噬細胞胞攝入入、處處理并并提呈呈給相相應的的TH、B細胞胞,TH細細胞識識別抗抗原后后活化化。在巨噬噬細胞胞分泌泌的IL-1協協同下下合成成并分分泌IL-2等等,與與TDAg共同同作用用與B細胞胞,引引起B細胞胞活化化。活化的的B細細胞增增殖分分化成成漿細細胞,合成成并分分泌抗抗體(二)細胞胞免疫疫(T細胞胞介導導)概念:T細細胞在在抗原原刺激激下活活化、、增殖殖、分分化,并產產生淋淋巴因因子而而完成成的免免疫應應答。。[由由TD(遲遲發型型超敏敏反應應T細細胞)、TC完完成]過程:TDAg進進入機機體后后,被被巨噬噬細胞胞捕獲獲、吞吞噬處處理，，將抗抗原提提呈給給TH細胞胞,引引起該該類細細胞的的活化化、增增殖、、分化化,合合成并并分泌泌細胞胞因子子。細胞因因子與與抗原原共同同作用用與無無活性性的TD、、TC細胞胞,導導致他他們活活化、、增殖殖、分分化為為能發發揮免免疫功功效的的TD和TC。。(三)免疫疫耐受受(特特異性性無應應答)免疫耐耐受是是機體體對抗抗原刺刺激表表現為為“免免疫不不應答答”的的現象象。免免疫耐耐受具具有免免疫特特異性性。自自身耐耐受可可以避避免自自身免免疫病病的發發生。。輔助細細胞（成熟熟的TH）活化的的輔助細細胞（效應應性TH）免疫應應答的的類型型和過過程示示意圖圖抗原TD輔輔佐佐抗原細細胞胞TI抗原呈遞抗抗原成熟的的TC、TD成熟的的B細細胞效應性性TC、TD淋巴因因子記憶性性T細細胞記憶性性B細細胞漿細胞胞執行細細胞免免疫功功能抗體（（執行行體液液(Ig)免免疫功功能））感應階階段增殖和和分化化階段段效應階階段活化階階段+第三節節、免免疫應應答的的效應應物質質及作作用免疫應應答中中的效效應物物質主主要包包括抗抗體和和淋巴巴因子子。一、抗抗體(antibody,Ab)概念：：機體體在抗抗原的的刺激激下產產生的的能與與相應應的抗抗原發發生特特異性性結合合的球球蛋白白稱為為抗體體，也也稱為為免疫疫球蛋蛋白（Ig）。種類：根據據抗體化學學結構和抗抗原性的差差異，免疫疫球蛋白可可分為：IgG、、IgM、、IgA、、IgE和IgD五種。（一）免疫疫球蛋白的的基本結構構任何一種免免疫球蛋白白都具有相相似的基本本結構,稱稱為單體Ig分子。一個單體Ig分子由2條重鏈(H鏈)和和2條輕鏈(L鏈)構構成四條多肽鏈鏈通過二硫硫鍵互相連連接,組成成一個“T”或“Y”形對稱的單單體Ig分分子。Ig單體分為兩個端：多肽鏈的氨基端(N端,L鏈的1/2與H鏈鏈的1/4)多肽鏈的羧基端(C端,L鏈的1/2和H鏈鏈的3/4)Ig單體分分為三個區域：可變區(V區):抗原結合合區或抗原原結合部。。L鏈的1/2和H鏈的1/4。穩定區(C區):氨基酸排排列順序比比較穩定。。L鏈的的1/2和和H鏈的3/4。樞紐區(絞鏈區):使抗體體分子由““T”字形形變成“Y”字形,暴露補體體結合點。。用木瓜酶處處理Ig,可將Ig分子從鉸鉸鏈區近N端切斷,使一個Ig單體形形成兩個抗抗原結合片片段(Fab段)及及一個可結結晶片段(Fc段)。每個Fab段可可結合一個個抗原,Fc段仍具具有單體Ig相應區區段的功能能。用胃蛋白酶酶處理Ig,則從鉸鉸鏈區近C端切斷,形成一個個(Fab’)2段及若干失失去生物活活性的Fc’碎片（二）各類類免疫球蛋蛋白的特性性及功能IgG:單體Ig,分子量最小小唯一能通過過胎盤屏障障的Ig人和動物血血清中含量量最高的免免疫球蛋白白抗感染的主主力,不僅僅含量高,而且持續續時間長。。多數抗菌菌、抗病毒毒、抗毒素素抗體都是是IgG。。能激活補體體、調理吞吞噬、引起起ADCC等。參與與Ⅱ、Ⅲ型型變態反應應。IgA有單體、二二聚體兩種種形式。單體IgA存在于血血清中,又又稱為血清清型IgA,作用較較弱;二聚體IgA主要存存在于動物物的唾液、、初乳及呼呼吸、消化化、泌尿生生殖道黏膜膜的分泌液液中,又稱稱為分泌型型IgA,是黏膜面面抗感染的的主要Ig。IgA不結結合補體,初生動物物只能從初初乳中獲得得IgM五聚體,分分子量最大大,又稱巨巨球蛋白胎兒唯一能能自身合成成的Ig,產生最早早,在感染染早期起著著重要的作作用,可作作為早期感感染的診斷斷依據體內持續時時間短,含含量較低具有較強的的激活補體體、調理吞吞噬等作用用參與Ⅱ、ⅢⅢ型變態反反應IgE單體Ig,血清中含含量甚微一種親細胞胞性抗體,易與肥大大細胞、嗜嗜堿性粒細細胞結合,引發Ⅰ型型變態反應應,故又叫叫致敏素對抵抗腸內內寄生蟲感感染具有重重要作用唯一不耐熱熱的Ig。。IgD單體Ig，，血清中含含量極低性質不穩定定，與B細細胞識別抗抗原有關。。可能與某些些過敏性疾疾病和自身身免疫病有有關。（三）抗體體產生的一一般規律1.初次應答:抗原第一一次進入機機體后,要要經過較長長誘導期血血清中才出出現抗體。。初次應答答的抗體含含量低,維維持時間短短。一般細細菌抗原誘誘導期為5-7天,病毒抗原原為3天,類毒素2-3周左左右。2.再次應答:間隔一定定時間后,機體受同同一種抗原原再次刺激激,則出現現抗體水平平迅速升高高現象。誘誘導期顯著著縮短,僅僅2-3天天,抗體產產量多,持持續時間長長。（四）影響響抗體產生生的因素1、抗原方方面（1）抗原原性質活抗原產生生抗體較快快,類毒素素及死抗原原產生抗體體較慢。莢膜多糖等等TI抗原原——短期期保護力,不產生免免疫記憶病毒、細菌菌的蛋白質質等TD抗抗原——長長期保持免免疫記憶。。（2）抗原原用量、次次數及時間間間隔抗原用量超超過一定限限度,抗體體的產反而而受到抑制制,稱為免免疫麻痹。。為了獲得再再次免疫應應答,可在在一定時間間間隔內,連續接種種2-3次次。一般細細菌、病毒毒抗原間隔隔7-10天,類毒毒素則間隔隔6周左右右。（3）免疫疫途徑應選擇能刺刺激機體產產生良好免免疫應答為為原則。分分泌型IgA抗體與與免疫途徑徑關系密切切。（4）佐劑劑與抗原合并并使用能增增強抗原的的免疫原性性的物質稱稱為佐劑。。如氫氧化化鋁、明礬礬、白油等等。2、機體方方面（1）年齡齡因素初生或出生生不久的動動物對許多多抗原的刺刺激常不能能激起有效效的免疫反反應。免疫系統尚尚未成熟；；母源抗體影影響;動物物通過胎盤盤、初乳、、卵黃等途途徑從母體體獲得的抗抗體,稱為為母源抗體體。老齡動物物,由于于免疫功功能退化化,影響響抗體產產生。（2）其其他因素素遺傳因素素,營養養因素,免疫器器官、免免疫細胞胞受損等等,影響響抗體產產生。（五）單單克隆抗抗體（McAb）克隆:一一個細胞胞無性增增殖的一一個細胞胞群體。。單克隆抗抗體:由由一個B細胞分分化增殖殖的子代代細胞(漿細胞胞)產生生針對單單一抗原原決定簇簇的抗體體。由于B細細胞壽命命很短,使它的的實際應應用受到到限制。。采用淋淋巴細胞胞雜交瘤瘤技術,將產生生特定抗抗體的B細胞與與能無限限生長的的骨髓瘤瘤細胞融融合,形形成B細細胞雜交交瘤。這這樣,既既能產生生抗體,又能無無限增殖殖。通常常所說的的單克隆隆抗體,就是這這種克隆隆化的B細胞雜雜交瘤細細胞所產產生的抗抗體。抗原脾B淋巴細細胞腫瘤細胞胞(缺乏HGPRT酶)融合HAT培培養基B淋巴細細胞死亡亡腫瘤細胞胞死亡雜交生存存雜交瘤細細胞A雜交瘤細細胞B雜交瘤細細胞C培養克隆隆單一細細胞利用ELISA篩選分分泌抗體體株雜交瘤細細胞分泌泌單克隆隆抗體（六）抗抗體的抗抗原性抗體是一一種動物物針對某某種抗原原產生的的。為免免疫球蛋蛋白,結結構復雜雜,分子子量大,對第二二種動物物來說就就能構成成抗原。。用一種動動物的抗抗體免疫疫異種動動物,就就能獲得得抗這種種抗體的的抗體,這種抗抗體稱為為抗抗體體或二級級抗體。。二、細胞胞因子機體的免免疫細胞胞和非免免疫細胞胞合成和和分泌的的多種能能調節細細胞生理理功能的的小分子子多肽物物質(糖糖蛋白)統稱為為細胞因因子。能夠產生生細胞因因子細胞胞主要有有三類：：活化的免免疫細胞胞；基質細胞胞類,包括血血管內皮皮細胞、、成纖維維細胞、、上皮細細胞等；；某些腫瘤瘤細胞。抗原刺激激、感染染、炎癥癥等許多多因素都都可刺激激細胞因因子的產產生,且且各細胞胞因子之之間也可可彼此促促進合成成和分泌泌。(一)淋淋巴因子子淋巴細胞胞產生的的細胞因因子,又又稱淋巴巴因子(LK)目前發現現的淋巴巴因子有有20多多種,分分別作用用于巨噬噬細胞、、淋巴細細胞、粒粒細胞、、血管壁壁等,有有的還直直接作用用于靶細細胞或病病毒。(二)白白細胞介介素(IL)介導白細細胞間相相互作用用的細胞胞因子稱稱為白細細胞介素素目前發現現的已有有18種種,用IL-1……IL-18等表表示?；罨疶H細胞、、B細胞胞、單核核巨噬細細胞等產產生。有有的增強強細胞免免疫功能能,有有的促進進體液免免疫,有有的對兩兩者均有有促進作作用。巨噬細胞胞趨化因因子(MCF)移動抑制制因子(MIF)特異性巨巨噬細胞胞武裝因因子(SMAF)促有絲分分裂因子子(MF)轉移因子子(TF)淋巴毒素素(LT)腫瘤壞死死因子(TNF)干擾素(IFN)皮膚反應應因子(SRF)穿孔素集落刺激激因子(CSF)第四節、、特異性性免疫的的抗感染染作用體液免疫疫的抗感感染作用用特異性免免疫抗感感染作用用細胞免疫疫的抗感感染作用用1.中和和作用:病毒、、毒素中中和2.調理理作用:抗體Fc段與與吞噬細細胞Fc段受體體結合促促進對抗抗原物的的吞噬清清除。3.溶菌菌及溶細細胞作用用:補體體介導4.ADCC作作用:5.變態態反應:抗體介介導IgE→ⅠⅠ,IgA、M、A→→Ⅱ、ⅢⅢ1.抗細細胞內細細菌感染染:細胞胞外細菌菌感染,主要依依靠體液液免疫;細胞內內寄生菌菌,主要要依靠細細胞免疫疫。T細細胞活化化,釋放放多種淋淋巴因子子,破壞壞細胞內內寄生菌菌。2.抗病病毒感染染:Tc細胞特特異性殺殺傷病毒毒或裂解解感染病病毒的細細胞。效效應T細細胞釋放放淋巴因因子第五節、、特異性性免疫獲獲得途徑徑特異性免免疫主動獲得得被動獲得得天然主主動:患傳傳染病病、隱隱性傳傳染獲獲得人工主主動:接種種疫苗苗、類類毒素素獲得得天然被被動:經胎胎盤、、初乳乳或卵卵黃獲獲得人工被被動:接種種抗毒毒素、、高免免血清清、卵卵黃獲獲得第八章章、變變態反反應學習目目標：：掌握握變態態反應應的概概念及及變態態反應應的類類型；；了解解各型型變態態反應應的發發病機機制；；了解解臨床床常見見疾病病及防防治方方法。。變態反反應(超敏敏反應應或過過敏反反應):指指機體體對某某些抗抗原初初次應應答后后,再再次接接受相相同抗抗原刺刺激時時,發發生的的一種種以機機體生生理功功能紊紊亂或或組織織細胞胞損傷傷為主主的特特異性性免疫疫應答答。變應原原:引起起變態態反應應的抗抗原物物質。?？梢砸允峭晖耆箍乖?也可可以是是半抗抗原。。反應應具有有免疫疫學反反應的的特異異性和和記憶憶性的的特征征,可可涉及及細胞胞和體體液免免疫的的整個個過程程,但但以某某一種種類型型的反反應為為主。。根據變變態反反應發發病機機制不不同,可將變態態反應應分為為I(速發發)型型、II(細胞胞毒)型、、III(免疫疫復合合物型型)、、IV(遲遲發)型,其中中前三三型均均由體體液免免疫介介導,第IV型型由細細胞免免疫介介導。。一、ⅠⅠ型變變態反反應（（速發發型））(一)主要要特點點1.發發生快快、消消退快快,一一般不不易造造成組組織細細胞的的損傷傷,多多表現現為功功能的的紊亂亂；2.參參與的的抗體體為IgE和IgG4,參與與的細細胞為為肥大大細胞胞、嗜嗜堿性性粒細細胞和和嗜酸酸性粒粒細胞胞等；；3.補補體不不直接接參與與其反反應；；4.有有明顯顯的個個體差差異和和遺傳傳傾向向；5.可可經血血清被被動轉轉移。。IgE與肥肥大細細胞、、嗜堿堿性粒粒細胞胞表面面的Fc受受體結結合變應原原與細細胞表表面的的IgE特特異性性結合合細胞脫脫顆粒粒,膜膜磷脂脂代謝謝(降降解)平滑肌肌收縮縮,腺腺體分分泌增增加,血管管擴張張,血血管通通透性性增加加,嗜嗜酸性性粒細細胞浸浸潤變應原原初次再次消化道(過敏性胃腸炎)全身性(過敏性休克)呼吸道(哮喘、變應性鼻炎)皮膚(蕁麻疹)致敏階階段發敏階階段機體IgE組胺、、LTs、、PGE2、PAF、激激肽原原酶、、ECF-A等等橋聯反應產生(二)Ⅰ型型變態態反應應發生生機制制過敏原原處理和和表達達抗原表表達產生IgE激活肥肥大細細胞釋放介介質（三））常見見疾病病常見的的過敏敏反應應有兩兩類:一是因因大量量過敏敏原(如靜靜脈注注射)進人人體內內而引引起的的急性性全身身性反反應,比如如青霉霉素過過敏反反應;二是局局部過過敏反反應,這類類反應應盡管管較廣廣泛,但易易被臨臨床獸獸醫忽忽視。。主要要有由由飼料料、霉霉菌、、花粉粉等。。過敏癥癥、花花粉癥癥、支支氣管管哮喘喘、蕁蕁麻疹疹、過過敏性性胃腸腸炎等等。二、ⅡⅡ型超超敏反反應(細胞胞毒型型)II型型超敏敏反應應是由由IgG或或IgM類類抗體體與靶靶細胞胞表面面相應應抗原原結合合后,在補補體、、吞噬噬細胞胞和NK細細胞參參與作作用下下,引引起的的以細細胞溶溶解或或組織織損傷傷為主主的病病理性性免疫疫反應應(一)主要要特點點1.IgG、IgM類抗抗體直直接作作用于于細胞胞表面面的抗抗原或或半抗抗原；；2.激激活補補體系系統、、單核核吞噬噬細胞胞及其其它細細胞3.表表現為為細胞胞損傷傷和溶溶解。。(二)Ⅱ型型超敏敏反應應發發生機機制細胞表表面固固有抗抗原或或吸附附于細細胞表表面的的抗原原、半半抗原原相應抗抗體(IgG、、IgM)激活補補體調理吞吞噬NK細細胞吞噬細細胞刺激或或阻斷斷作用用溶解靶靶細胞胞吞噬破破壞靶細胞胞ADCC作作用靶細胞胞損傷傷靶細胞胞功能能改變變Ⅱ型變變態反反應造造成細細胞損損傷的的各種種方式式（三））常見見疾病病1.血血型不不合的的輸血血反應應；2.新新生兒兒溶血血癥；；3.自自身免免疫性性溶血血性貧貧血,因感感染或或藥物物引起起的血血細胞胞減少少癥；；4.藥藥物過過敏性性血小小板減減少癥癥；5.鏈鏈球菌菌感染染后引引起的的腎炎炎等。。三、ⅢⅢ型超超敏反反應(免疫疫復合合物型型)由中中等等大大小小可可溶溶性性免免疫疫復復合合物物沉沉積積于于局局部部或或全全身身毛毛細細血血管管基基底底膜膜后后,通通過過激激活活補補體體和和血血小小板板、、嗜嗜堿堿性性、、嗜嗜中中性性粒粒細細胞胞參參與與作作用用下下,引引起起的的以以充充血血水水腫腫、、局局部部壞壞死死和和中中性性粒粒細細胞胞浸浸潤潤為為主主要要特特征征的的炎炎癥癥反反應應和和組組織織損損傷傷。。(一一)主主要要特特點點1.可可溶溶性性抗抗原原與與相相應應IgG、、IgM類類抗抗體體結結合合形形成成中中等等大大小小可可溶溶性性復復合合物物,沉沉積積于于全全身身或或局局部部血血管管的的基基底底膜膜；；2.激激活活補補體體系系統統,吸吸引引白白細細胞胞和和血血小小板板聚聚集集；；3.復復合合物物沉沉積積部部位位出出現現一一系系列列的的炎炎癥癥反反應應,病病程程較較長長。。(二二)ⅢⅢ型型超超敏敏反反應應發發病病機機制制中等大小可溶性免疫復合物沉積于組織結合并激活補體系統嗜堿性粒細胞、肥大細胞、血小板激活血管活性胺類毛細血管通透性增加局部充血水腫中性粒細胞侵潤吞噬免疫復合物,釋放溶酶體酶局部充血破壞局部缺血、出血微血栓形成激活內源性凝血系統、血小板凝集催化作用釋放血管炎免疫疫復復合合物物引引起起的的組組織織損損傷傷（三）常常見疾病病急性血清清病、鏈鏈球菌感感染后的的腎小球球腎炎、、過敏性性休克樣樣反應、、自身免免疫復合合物病(犬天皰皰瘡、全全身性紅紅斑狼瘡瘡)等疾疾病。四、IV型超敏敏反應(遲發型型)Ⅳ型超敏敏反應是是由效應應T細胞胞與相應應抗原作作用后，，引起的的以單核核細胞浸浸潤和組組織細胞胞損傷為為主要特特征的炎炎癥反應應。(一）主主要特點點1.致敏敏T細胞胞與相應應致敏原原作用而而引起的的以單核核細胞（（巨噬細細胞和淋淋巴細胞胞）浸潤潤和細胞胞變性壞壞死為主主要特征征；2.發生生較慢（（一般在在抗原刺刺激后24-72h發發生），，消退特特慢；3.與抗抗體和補補體無關關。（二）IV型超超敏反應應發生機機制（三）常常見疾病病1.傳染染性變態態反應：：某些胞胞內寄生生菌、病病毒(麻麻疹病毒毒等)、、真菌(念珠菌菌等)及及血吸蟲蟲等引起起的感染染2.接觸觸性皮炎炎3.器官官抑制排排斥反應應和某些些自身免免疫病等等。上述四型型變態反反應可部部分同時時存在于于同一個個體,同同一種變變應原亦亦可能引引起不同同型的變變態反應應。如青青霉素可可引起過過敏性休休克(1型)、、溶血性性貧血(2型)、血清清病樣反反應(3型)、、接觸性性皮炎(4型)五、防治治原則（一）預預防原則則1.查明明變應原原并避免免接觸；；2.特異異性脫敏敏治療：：短期內內進行小小劑量、、多次注注射特異異性變應應原進行行脫敏治治療；3.減敏敏療法：：采用多多次、少少量、長長間隔（（5-7天）皮皮下注射射特異性性必要性性進行減減敏治療療；（二）藥藥物治療療1.抑制制活性介介質釋放放的藥物物：2.生物物活性介介質拮抗抗藥：3.改善善器官反反應性的的藥物：：4.某些些調節免免疫反應應的中藥藥。第九章、、血清學學試驗學習目標標：掌握握凝集試試驗、沉沉淀試驗驗、最適適比例和和帶現象象的概念念；掌握握血清學學試驗的的一般規規律；了了解補體體結合試試驗、中中和試驗驗、免疫疫標記技技術的原原理及應應用。使使學生能能夠運用用免疫學學方法鑒鑒定微生生物的感感染和對對病原微微生物進進行預防防。第一節、、血清學學試驗概概述抗原和相相應抗體體無論是是在體內內或體外外均能發發生特異異性結合合,由由于抗體體存在于于血清中中,所以以將體外外的抗原原抗體反反應統稱稱為血清學反反應。一、血清清學反應應的一般般規律（一）特特異性和和交叉性性抗原與抗抗體結合合具有高高度的特特異性。。一種抗抗原只能能與由此此決定簇簇所誘導導產生的的抗體結結合近緣種型型之間往往往含有有部分相相同的抗抗原成分分，因而而能引起起交叉反反應,次次種反應應特性稱稱為交叉性或或類屬性性。（二）最最適比例例和帶現現象抗原抗體體反應是是一種多多價相互互作用的的結合。?？乖箍贵w在比比例適當當時,抗抗原抗體體結合后后尚有未未飽和的的結合點點,可以以繼續與與游離的的抗原、、抗體或或與其相相鄰的未未飽和的的結合物物連接,逐漸形形成愈來來愈大的的復合物物,出現現肉眼可可見的反反應。當抗原抗抗體比例例最適時時,反應應物最多多、反應應最明顯顯、出現現最快。不論是抗抗原過剩剩,還是是抗體過過剩,聚聚合作用用均將被被阻滯而而無可見見反應,這種現現象稱為為帶現象。由于抗體體過剩所所引起的的抑制帶帶稱為前帶。凝集反反應往往往出現前前帶,故故通常固固定抗原原,稀釋釋抗體。。由于抗原原過剩所所引起的的抑制帶帶稱為后帶。沉淀反反應往往往出現后后帶。故故通常固固定抗體體,稀釋釋抗原。。（三）反反應的可可逆性抗原抗體體結合不不是化學學結合，，是分子子表面的的結合。。此種結結合易受受理化因因素的影影響，結結合的溫溫度在0~40℃，pH在4~9范范圍內。。如溫度超超過60℃，pH降到到3以下下時，則則抗原抗抗體復合合物又可可重新游游離。分分離后的的抗原抗抗體仍然然保留其其理化性性質與免免疫學活活性。利利用這一一特點，，可進行行免疫親親和層析析，以提提純抗原原或抗體體。（四）反應應的二階段段性第一階段是是抗原和抗抗體以各種種比例相互互結合,作作用進行快快,幾秒至至幾分鐘即即可,但無無可見反應應第二階段是是在參與反反應的介質質作用下出出現各種可可見反應,反應進行行較慢,需需幾分鐘、、幾十分鐘鐘或更久。。第二階段段反應易受受電解質、、溫度、pH等的影影響。（五）反應應的敏感性性抗原抗體不不僅有高度度的特異性性,還具有有極高的敏敏感性;不不僅可用于于定性,還還可用以檢檢測微量的的抗原或抗抗體,其靈靈敏程度大大大超過當當前所應用用的常規化化學方法。。(檢出抗抗體的最小小氮量0.0005ug氮/ml)血清學反應應可以用已已知的抗體體測未知的的抗原,也也可以用已已知的抗原原測未知的的抗體。二、影響抗抗原抗體反反應的因素素電解質:最常用的電電解質是NaCl,最適濃度度為0.85%-0.9%。有的需需要高滲的的NaCl(8%-10%),但過高高濃度的電電解質(15%NaCl)可可使抗原抗抗體復合物物離解。pH:最適pH為為6-8。。pH接近近蛋白質的的等電點(pH5-5.5)時,往往往招致抗原原抗體的非非特異性沉沉淀。在pH2-3時可使抗抗原抗體的的結合物離離解。溫度:最適溫度通通常為37℃,但亦亦有適于在在30℃或或室溫反應應。超過56℃時,反應速度度往往降低低。溫度升升高到56~60℃℃時,則抗抗原抗體的的結合物離離解。振蕩:適當振蕩能能加速反應應,強烈振振蕩可使抗抗原抗體結結合物離解解。雜質:往往抑制反反應的進行行或引起非非特異性反反應。第二節、凝凝集試驗細菌、紅細細胞等顆粒粒性抗原懸懸液與含有有相應抗體體的血清混混合，在電電解質的參參與下,形形成肉眼可可見的凝集集塊,這種種現象叫凝集試驗。參與反應應的抗原叫叫凝集原,抗體叫凝集素。一、直接凝凝集試驗顆粒性抗原原與相應抗抗體直接結結合所發生生的凝集反反應叫直接凝集試試驗。玻片法試管法在沒有特異異性抗體時時所發生的的凝集稱為為自家凝集。某些理化因因素也可以以引起非特特異性凝集集,如pH下降至3以下時,即可引起起抗原懸液液的自凝,稱為酸凝集。二、間接凝凝集試驗將可溶性抗抗原(或稱稱膠體性抗抗原)吸附附在與免疫疫無關的顆顆粒表面,再與相應應的抗體結結合,在電電解質的作作用下,發發生肉眼可可見的凝集集現象,稱稱為間接凝集試試驗。吸附抗原原所用的顆顆粒叫載體。最常用的的是紅細胞胞。吸附抗抗原的紅細細胞稱為致敏紅細胞胞。如先將抗原原與抗體結結合,在加加入致敏紅紅細胞,則則不發生紅紅細胞凝集集反應,稱稱為間接血凝抑抑制試驗。如將抗體吸吸附在紅細細胞上,再再與抗原進進行凝集試試驗，稱為為反向間接血血凝試驗。間接血凝試試驗敏感性性很高,能能檢出少量量抗體三、協同凝凝集試驗某些葡萄球球菌含有一一種A蛋白白(SPA),能與與人和多種種哺乳動物物的IgG結合,利利用此種葡葡萄球菌作作載體,吸吸附抗體,與相應抗抗原混合時時即發生凝凝集反應,稱為協同凝集試試驗直接凝集試試驗顆粒性抗原原SPA協同同凝集試驗驗第三節、沉沉淀試驗可溶性抗原原,與相相應抗體混混合,在電電解質在參參與下,經經過一定時時間,形成成肉眼可見見的白色絮絮狀沉淀,稱為沉淀試驗。參與反應應的抗原稱稱為沉淀原;相應的抗抗體稱為沉淀素。一、液相沉沉淀試驗(一)環狀狀沉淀試驗驗在直徑3-4毫米的的小試管內內進行,將將抗血清加加于管底,再將抗原原疊加其上上,一定時時間后觀察察結果。如如Ascoli氏反反應。（二）絮狀狀沉淀試驗驗抗原抗體在在試管內混混合，比例例最合適者者出現須狀狀沉淀最快快，沉淀物物最多。多多用于毒素素和抗毒素素的測定。。二、瓊脂擴擴散試驗抗原抗體在在凝膠中相相遇并于比比例最適處處形成肉眼眼可見的沉沉淀線。（一）單相相單擴散在內徑3mm,長10cm小小試管內進進行。先將將0.6%-1%瓊瓊脂加熱融融化,待冷冷卻到56℃,加入入等量抗血血清(1:10稀釋釋),混合合后加0.5ml于于試管內,凝固后加加入0.5ml抗原原于其上,垂直置37℃?？煽捎糜诳乖俊＃ǘ﹩蜗嘞嚯p擴散與單相單擴擴散相似,在小管內內進行。但但在抗原和和抗體之間間加一層不不含抗體的的鹽水瓊脂脂,抗原抗抗體在中間間層內擴散散。（三）雙相相單擴散亦稱輻射擴擴散或環狀狀擴散。在在平皿或玻玻片上進行行。用2%瓊脂緩沖沖,融后冷冷卻至45℃,加入入等量預熱熱至相同溫溫度的抗血血清,混合合后制成平平板。打孔孔?？捎糜谟诳乖?。（四）雙相相雙擴散1%瓊脂平平板,按圖圖形打孔,在孔內分分別加入抗抗原、抗體體,置濕盒盒內37℃℃擴散一定定時間,觀觀察沉淀線線。每成分分出現一條條沉淀線。。二相鄰孔孔之間如抗抗原相同,則二條沉沉淀線相互互融合,抗抗原不同則則相互交叉叉,部分相相同則形成成分支。三、免疫電電泳在瓊脂擴散散的基礎上上結合電泳泳技術,可可極大地提提高免疫擴擴散的分辨辨力和敏感感性。（一）對流流免疫電泳泳將抗體置陽陽極,抗原原置陰極,電泳時兩兩者相向運運動,在相相遇處形成成沉淀線。。（二）火箭箭電泳將雙相單擴擴散與電泳泳結合起來來,其沉淀淀線如火箭箭,故名火箭電泳。配制含有有抗血清的的瓊脂凝膠膠板,在一一端打一列列小孔,孔孔徑3mm孔距8mm,孔內內加待檢抗抗原,22.5mA/cm電電流電泳2~10小小時?？捎糜糜诳乖ǘ?。第四節、補補體結合試試驗補體單獨存存在沒有活活性,但能能與任何抗抗原抗體復復合物結合合,并導致致溶解反應應?？扇苄孕钥乖c相相應抗體結結合后能結結合補體,但一般不不出現可見見反應,這這一現象被被稱為溶菌反應或或反應系統統。利用溶血系系統作為指指示劑來判判斷溶菌系系統中抗原原與抗體是是否對應的的試驗,稱稱為補體結合試試驗。參與補體結結合試驗的的有溶菌系系統(反應系統)和溶血系系統(指示系統)兩大系統,參與反應應的物質有有抗原、抗體體、補體、、溶血素和和紅細胞等等五種成分分。AgAb補體溶血素紅細胞AbAg補體紅細胞溶血素溶菌（指示示）系統陽陽性溶溶菌（指指示）系統統陰性溶血不溶血補體結合反反應陰性補體結合反反應陽性抗原、抗體體不對應抗原、抗體體對應第五節、中中和試驗病毒或外毒毒素與相應應抗體結合合后,可使使其失去毒毒力或喪失失對易感動動物的致病病作用,稱稱為中和試驗毒素和抗毒毒素中和試試驗:一般般是將一定定量的抗毒毒素與致死死量的毒素素混合,在在恒溫下經經一定時間間作用后,注射試驗驗動物,同同時設對照照組。做中中和試驗時時,首先對對外毒素進進行滴定確確定毒力標標準,過去去常用最小小致死量(MLD),現以逐逐漸為半數數致死量(LD50)所代替替。病毒中和試試驗:病毒毒免疫動物物所產生的的抗體,能能中和相應應病毒的致致病作用體內中和試試驗:亦稱保護護試驗。先先對動物進進行免疫,然后用一一定量病毒毒攻擊。體外中和試試驗:病毒與抗抗病血清按按一定比例例混合,并并在一定條條件下作用用一段時間間,然后接接種易感實實驗動物、、雞胚或細細胞培養物物,根據接接種后能否否保護和有有無病變來來判定結果果。第六節、免免疫標志技技術具有示蹤效效應的化學學物質與抗抗體結合后后，仍保持持其示蹤活活性和與相相應抗原特特異結合能能力，此種種結合物稱稱為標記抗抗體?？山杞枰允聚櫤秃蜋z測抗原原的存在及及其含量，，多用于鑒鑒定抗原和和診斷疾病病。常用的的標記物有有熒光素、、酶和放射射性同位素素。一、熒光抗抗體概念：是指指用熒光素素對抗體或或抗原進行行標記，然然后用熒光光顯微鏡觀觀察所標記記的熒光以以分析示蹤蹤相應的抗抗原或抗體體的方法。。1、直接染染色法將熒光素標標記的特異異抗體與相相應抗原結結合,直接接檢查未知知抗原。2、間接染染色法分兩步進行行,抗原與與相應抗體體(第一抗抗體)作用用后,再加加熒光標記記的抗球蛋蛋白抗體(第二抗體體)。如果果第一步發發生了抗原原抗體反應應，抗球蛋蛋白抗體就就會和已經經配合的抗抗體進一步步結合?？煽捎靡澡b定定未知抗原原或未知抗抗體。二、酶標記記抗體以與底物結結合后能顯顯色的酶與與抗體連接接后所制備備的結合物物稱為酶標標記抗體。?？膳c被檢檢抗原形成成酶標記的的免疫復合合物。結合合在免疫復復合物上的的酶，在遇遇到相應的的底物時，，催化無色色的底物，，使其水解解、氧化或或還原，生生成可溶性性或不溶性性的有色