天然藥物化學主講人：趙雪梅提取分離的方法與技術天然藥物化學主講人：趙雪梅提取分離的方法與技術提取分離的兩種情況：1、目的物為已知成分或化學結構類型2、從天然藥物中尋找未知有效成分或有效部位研究有效成分的程序提取分離鑒定提取分離的兩種情況：1、目的物為已知成分或化學結構類型2、從第一節提取方法及技術一、溶劑提取法1、概念根據天然藥物中各種化學成分的溶解性能，選擇對有效成分溶解度大而對其他成分溶解度小的溶劑，用適當的方法將所需化學成分盡可能完全的從藥材組織中溶解提出的方法。第一節提取方法及技術一、溶劑提取法1、概念2、基本原理（1）粉碎（2）苷類防止酶的水解3、提取前的預處理是在滲透擴散作用下，溶劑滲入藥材組織細胞內部，溶解可溶性物質，造成細胞內外溶質的濃度差，從而帶動溶質做不斷往返的運動，直至細胞內外溶液中被溶解的化學成分的濃度達到平衡，提出所需的化學成分。2、基本原理（1）粉碎3、提取前的預處理4、影響提取的因素溶劑的選擇、提取的方法、藥材的粉碎度、溫度、時間、濃度差等。

溶劑提取法的關鍵：選擇合適溶劑的溶劑。溶劑的選擇：遵循“相似相溶”的規律，根據溶劑的極性，被提取成分及共存的其他成分的性質來決定，同時兼顧考慮溶劑是否使用安全、易得、廉價、濃縮方便等問題4、影響提取的因素溶劑的選擇、提取的方法、藥5、溶劑的極性常用溶劑的極性大小的順序排列如下：石油醚<苯<無水乙醚<三氯甲烷<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇<水表2-1常用溶劑的介電常數5、溶劑的極性常用溶劑的極性大小的順序排列如下：石油醚<按極性大小順序將溶劑的分類：（1）水（2）親水性有機溶劑（3）親脂性有機溶劑極性較大且能與水相互混溶的有機溶劑。甲醇、乙醇、丙酮等。極性較小，與水不能混溶的有機溶劑。石油醚、苯、乙醚、三氯甲烷、乙酸乙酯等。按極性大小順序將溶劑的分類：（1）水（2）親水性有機溶劑（3提取溶劑性能特點適宜提取成分提取方法強極性溶劑溶解范圍廣（酸水、堿水）生物堿鹽穿透能力強苷類浸漬法價廉易得、安全鞣質煎煮法糖類滲漉法水有些脂溶性成分溶解不完全氨基酸（酸水）有些苷類成分的酶解蛋白質水提液易發霉、變質水溶性雜質多，過濾困難沸點高，濃縮困難

常用提取溶劑性能特點

提取溶劑性能特點提取溶劑性能特點適宜提取成分提取方法

除去多糖、溶解范圍廣（不同濃度乙醇）蛋白質外滲漉法（稀醇）水溶性雜質溶出少的大多數浸漬法乙醇可抑制酶的活性

化學成分回流法提取液不易發霉、變質均可

連續回流法大部分可回收利用但有揮發性、易燃燒甲醇溶解特點與乙醇相似，但有毒丙酮溶解性能同乙醇，但沸點低、易揮發，作為提取溶劑不常用；但對色素溶解性能好，在分離、精制時常用。親水性有機溶劑（和水可任意混溶）提取溶劑性能特點提取溶劑性能特點適宜提取成分提取方法

對化合物溶解選擇性較強;水溶性雜質少、易純化;游離生物堿回流法揮發性大、易燃燒、有毒;苷元連續回流法價格昂貴，對提取設備要求高;某些苷類穿透力較弱，提取時間長;作為提取溶劑不常用。

如:乙醚

極易燃氯仿

不易燃，毒性大,對生物堿溶解性好苯

毒性大石油醚沸程30~60℃、60~90℃、90~120℃脫脂、脫色常用

與甲醇、乙醇不能任意混溶。親脂性有機溶劑提取溶劑性能特點【提取方法與技術】（一）浸漬法[含義]

將藥材用適當的溶劑在常溫或溫熱的條件下浸泡一定時間，浸出有效成分的一種方法。[操作技術]冷浸法室溫溫浸法40~60℃[適用范圍]適用于有效成分遇熱易破壞及含淀粉、果膠、黏液質、樹膠等多糖物質較多的天然藥物。[特點]方便、簡單，時間長，效率低，易霉變[提示]加防腐劑：甲苯、甲醛、三氯甲烷【提取方法與技術】（一）浸漬法[含義]將藥材用適當的（二）滲漉法[含義][操作技術]

粉碎—浸潤—裝筒—排氣—浸漬—滲漉—收集滲漉液

將藥材粗粉置滲漉裝置中，連續添加溶劑使滲過藥粉，自上而下流動，浸出有效成分的一種動態浸提方法。（二）滲漉法[含義][操作技術]將藥材粗[適用范圍]

適用于提取遇熱易破壞的成分。[特點]

因能保持良好的濃度差，效率高。

溶劑消耗多，時間長[提示]常溫進行，溶劑為水、酸液、堿液及不同濃度的乙醇[適用范圍]適用于提取遇熱易破（三）煎煮法[含義]

將藥材加水加熱煮沸，濾過去渣后取煎煮液的一種傳統提取方法。[操作技術][適用范圍]

適應于有效成分能溶于水且不易被水、熱破壞的天然藥物的提取。（三）煎煮法[含義]將藥材加水加熱煮沸，[特點]

操作簡單、效率高。[提示]

不宜用于提取含揮發油成分、遇熱易

破壞、含糖類豐富的天然藥物。[特點]操作簡單、效率高。

使用低沸點的溶劑如乙醇、氯仿等加熱提取天然藥物中有效成分時，為減少溶劑的揮發損失，保持藥材與溶劑持久地接觸，通過加熱浸出液，使溶劑受熱蒸發，經冷凝后變為液體流回浸出器，如此反復至浸出完全的一種熱提取方法。（四）回流提取法[含義]使用低沸點的溶劑如乙醇、氯仿等加熱提取天[適用范圍]

[操作技術]適用于脂溶性較強成的分提取。[特點]效率高、溶劑消耗大，操作較麻煩。[提示]

不宜用于對熱不穩定的成分的提取。[適用范圍][操作技術]適（五）連續回流提取法

[含義]

能用少量溶劑進行連續循環回流提取，充分將有效成分浸出完全的方法。[操作技術]

常用索氏提取器[適用范圍]

適用于脂溶性成的分提取。

[特點]

效率高、溶劑用量少，不適用于對熱不穩定的成分的提取。[提示]

更換溶劑。（五）連續回流提取法[含義]能用少量溶劑進（六）超聲提取法[含義]是一種利用超聲波浸提有效成分的方法。[基本原理]利用超聲波的空化作用，破壞植物藥材的細胞，使溶劑易于滲入細胞內，同時超聲波的強烈震動能傳遞巨大能量給浸提的藥材和溶劑，使他們做高速運動，加強了胞內物質的釋放、擴散和溶解，加速有效成分的浸出，極大地提高提取效率。（六）超聲提取法[含義]是一種利用超聲波[操作技術][適用范圍]

適應于遇熱不穩定成分的提取，適應于各種溶劑的提取。[特點]

時間短、效率高、無需加熱。[提示]要求高。【知識鏈接】二、其他提取方法[操作技術][適用范圍]第二章天然藥物化學成分提取分離和鑒定的方法與技術課件（一）水蒸氣蒸餾法[含義][基本原理]水蒸氣蒸餾法是利用某些揮發成分與水或水蒸氣共同加熱，能隨水蒸氣一并蒸餾出，經冷凝后分取獲得的性質，從天然藥物中提出的方法。是當水和與水不相溶的液體成分共存時，根據道爾頓分壓定律，整個體系的總蒸氣壓等于兩個組分蒸氣壓之和。當總蒸氣壓等于外界大氣壓時，混合物開始沸騰并被蒸餾出來。P總=PA+PB（一）水蒸氣蒸餾法[含義][基本原理]水蒸[操作技術][適用范圍]適用于提取具有揮發性，能隨水蒸氣蒸餾出而不被破壞，不溶或難溶于水，與水不發生化學反應的天然藥物化學成分。

[特點]簡單、方便、實用，宜推廣[提示]保溫、與大氣壓相通后，關熱源。可再蒸餾[操作技術][適用范圍]適用于提取具有揮發性，能隨水蒸氣第二章天然藥物化學成分提取分離和鑒定的方法與技術課件（二）升華法[含義]

是利用某些固體物質具有在低于其熔點的溫度下受熱后，不經熔融就直接轉化為蒸氣，遇冷后又凝固為原來的固體的性質，使之從天然藥物中提出的方法。[操作技術][適用范圍]適用于具有升華性成分的提取。[特點]時間長、損失大，易炭化、分解。[提示]

水浴、油浴加熱（二）升華法[含義]是利用某些固體物質具有在低于其熔點

（三）超臨界流體萃取技術

超臨界流體萃取（SupercriticalFluidExtraction,SFE）是一種利用某物質在超臨界區域形成流體，對天然藥物中有效成分進行萃取分離的新型技術，集提取和分離于一體。超臨界流體：某物質處于臨界溫度（Tc）和臨界壓力(Pc)以上時，形成一種既非液體又非氣體的特殊相態。常用的超臨界流體物質：二氧化碳、氧化亞氮、乙烷、乙烯和甲苯等。1、概念（三）超臨界流體萃取技術超臨界流體萃取氣體、超臨界流體和液體的物理性質【超臨界流體特性】具有液體和氣體的雙重特性，如：密度與液體近似，黏度與氣體近似，擴散力和滲透能均大大強于液體（擴散速度比液體快約兩個數量級），對很多物質有很強的溶解能力。

氣體、超臨界流體和液體的物理性質【超臨界流體特性】具有液體和2、基本原理

SF的溶解度直接與其密度相關，通過改變萃取壓力和溫度很容易改變SF的溶解能力3、操作技術4、適用范圍適用于提取分離揮發油、脂溶性、高熱敏性及易氧化分解成分。[超臨界流體]最常見的是二氧化碳，其臨界溫度為(Tc

=31.4℃)，臨界壓力為(Pc=

7.37MPa)2、基本原理SF的溶解度直接與其密度相關，通第二節分離精制和鑒定的方法與技術[濃縮方法]

蒸發水提取液薄膜蒸發

水、稀醇提取液蒸發器、冷凝管、真空泵蒸餾

常壓蒸餾：低沸點有機溶劑提取液的濃縮回收減壓蒸餾：高沸點有機溶劑及有效成分遇熱不穩定的提取液的濃縮回收旋轉蒸發儀反滲透法、超濾法第二節分離精制和鑒定的方法與技術[濃縮方法]第二章天然藥物化學成分提取分離和鑒定的方法與技術課件一、系統溶劑分離法[含義]按極性由小到大的順序選用不同極性的溶劑組成溶劑系統，依次提取分離提取液中各種不同的成分，使各溶解度有差異的成分得到分離。[操作技術][適用范圍]適用于有效成分尚未明確的天然藥物提取液的分離。一、系統溶劑分離法[含義][操作技術][適用范圍]適用【特點】操作繁瑣【提示】研究不明成分的方法

【特點】操作繁瑣【知識鏈接】

溶劑系統及其提取分離成分【知識鏈接】溶劑系統及其提取分離成分1、概念

是指往提取液中加入一種與其互不相溶的溶劑配成兩相溶劑系統，利用混合物中各種成分分配系數的差異而將所需成分萃取出來的分離方法。2、基本原理

利用混合物中各種成分在兩相不相溶的溶劑分配系數的差異而達到分離的目的二、兩相溶劑萃取法1、概念二、兩相溶劑萃取法[分配系數]

K=Cu/CL[分離因子]

兩種溶質在同一溶劑系統中分配系數的比值。

β=KA/KB(注KA>KB)[分配系數][分離因子]3、萃取溶劑的選擇①從水提液中萃取親脂性成分：一般選用苯、三氯甲烷或乙醚②萃取偏親水性成分：需用乙酸乙酯、丁醇等③對于堿性、酸性、兩性成分的萃取分離：常用PH梯度萃取法即利用混合物中各成分的酸（或堿）性強弱不同，相應改變溶劑PH值使之相繼成鹽或游離，改變成分在溶劑系統中的分配系數而與其他成分分離的一種方法。3、萃取溶劑的選擇①從水提液中萃取親脂性成分：②萃取偏親水性（一）簡單萃取法[提示]1、水體液的濃度最好在相對密度1.1-1.2之間。2、選用的萃取溶劑第一次用量一般為水提液的1/2-1/3，以后的用量可適當減少為水提液的1/4-1/6。3、一般萃取3-4次即可。4、若用氯仿萃取，易產生乳化現象。5、形成乳化，破乳。【適用范圍】分配系數差異較大的成分的分離（一）簡單萃取法[提示]2、選用的萃取溶劑第一次用量一般為水（二）逆流連續萃取法[含義]

利用兩相互不相溶的溶劑相對密度的不同，使相對密度小的相液作為移動相（或分散相），逆流連續穿過相對密度大的作為固定相（或連續相）的相液，借以交換溶質而達到分離的一種連續萃取技術。【適用范圍】

適用于各種密度的萃取溶劑（二）逆流連續萃取法[含義]【適用范圍】（三）逆流分溶法（四）液滴逆流分配法【適用范圍】

適用于分離中等極性、分離因子較小及不穩定的物質。【適用范圍】

適用于皂苷類化學成分的分離。（三）逆流分溶法（四）液滴逆流分配法【適用范圍】【適用范圍】[破壞乳化現象的方法] ①放置較長時間⑧其他破壞乳化的物質如乙醇、黃化蓖麻油等②攪動③乳化層抽濾④將乳化層加熱或冷凍⑤分出乳化層，再用新溶劑萃取⑥加入少量電解質（如氯化鈉）⑦滴加數滴醇類如戊醇改變表面張力，破壞乳狀液[破壞乳化現象的方法]⑧其他破壞乳化的物質如乙醇、黃化蓖麻油三、沉淀法[含義]是指在天然藥物的提取液中加入某些試劑，使產生沉淀或降低溶解性而從溶液中析出，從而獲得有效成分或去除雜質的方法。[分類]（一）酸堿沉淀法是利用某些成分能在酸（或堿）中溶解，繼而又在堿（或酸）中生成沉淀的性質達到分離的辦法。三、沉淀法[含義][分類]是利用某些成分能1、操作技術2、適用范圍酸性、堿性或兩性化合物的分離。3、特點沉淀反應可逆4、提示分離生物堿、內酯結構化合物具酸性的化合物1、操作技術（二）試劑沉淀法[含義]利用一些成分能與某些試劑產生沉淀的性質，或利用某些成分在不同溶劑中溶解度的差異，通過加入特定試劑或溶液，使生成沉淀，與其他成分分離。1、操作技術2、適用范圍適用于能與某些試劑產生沉淀或在不同溶劑中溶解度有差異的化學成分的分離3、特點沉淀反應可逆或不可逆（二）試劑沉淀法[含義]1、操作技術四、結晶與重結晶法[含義]利用混合物中各成分在溶劑中溶解度的差別，使所需成分以結晶狀態析出，達到分離精制的目的分離方法。[結晶]

將物質由非結晶狀通過處理得到結晶狀物的過程。[重結晶]

將粗結晶用適當的溶劑處理純化為較純的結晶狀物質。四、結晶與重結晶法[含義][結晶]將物質由非結晶狀通過1、結晶溶劑的選擇選擇合適的溶劑是結晶法的關鍵。[溶劑具備條件]1）不與結晶物質發生化學物質2）對結晶物質的溶解度隨溫度不同有顯著差異熱時溶解度大，冷時溶解度小3）對雜質溶解度非常大或非常小4）沸點適中5）能給出較好的結晶1、結晶溶劑的選擇選擇合適的溶劑是結晶法的關鍵。[溶劑具備條結晶法常用的溶劑有水、冰醋酸、甲醇、乙醇、丙酮、醋酸乙酯、氯仿等。當不能選擇一種合適的試劑時，通常選用兩種以上溶劑組成的混合溶劑。

以兩種能以任意比例互溶的溶劑組成，要求低沸點溶劑對被提純物質的溶解度大，而高沸點溶劑對被提純物的溶解度小。結晶法常用的溶劑有水、冰醋酸、甲醇、乙醇、丙3、結晶的條件雜質的去除有效成分的含量溶液的濃度合適的溫度、時間3、結晶的條件雜質的去除有效成分的含量溶液的濃度合適的溫度、3、結晶純度的判斷1）晶形和色澤2）熔點和熔距3）紙色譜或薄層色譜技術4）高效薄層色譜、氣相色譜、高效液相色譜3、結晶純度的判斷1）晶形和色澤2）熔點和熔距3）紙色譜或薄4、操作技術1）制備結晶溶液。2）趁熱過濾，除去不溶性雜質。3）將濾液放冷，使析出結晶。4）抽氣濾過，將結晶從母液中分出。5）重結晶6）晶體的干燥紅外燈烘干真空恒溫干燥器干燥4、操作技術1）制備結晶溶液。2）趁熱過濾，除去不溶性雜質。5、適用范圍適用于分離純化固體化學成分6、特點分離純化固體成分的重要方法之一。7、提示選擇合適的溶劑注意結晶條件5、適用范圍五、透析法[含義]

利用提取液中小分子物質可通過透析膜，而大分子物質不能通過透析膜的性質使分子量差異較大的物質達到分離的方法。1、操作技術2、適用范圍適用于分離純化天然藥物化學成分中的大分子物質3、特點操作簡單、分離較完全4、提示關鍵是膜孔的選擇五、透析法[含義]六、分餾法[含義]利用各沸點不同的化合物組成混合物，在分餾過程中產生高低不同的蒸氣壓，從而收集到不同沸點溫度的餾分，達到分離的目的的方法。1、操作技術2、適用范圍適用于分離純化天然藥物中沸點相差較小的液體混合物。六、分餾法[含義]3、特點操作簡單、加熱可破壞某些成分4、提示保持柱內適當的溫度梯度，嚴格控制熱源的溫度。

3、特點七、色譜法[基本原理]利用混合物中各成分在固定相和移動相中吸附、分配及其親和力的差異而達到分離。[分類]按固定相和支持劑種類:氧化鋁色譜、硅膠色譜、聚酰胺色譜、凝膠色譜等。按移動相種類：氣相色譜、液相色譜。按操作方式：柱色譜、紙色譜和薄層色譜。按色譜原理：吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、凝膠色譜等。七、色譜法[基本原理]利用混合物中各成分在固表2-3被分離化合物與相應選擇的色譜方法表2-3被分離化合物與相應選擇的色譜方法1、吸附柱色譜法

利用作為固定相的吸附劑對混合物中各成分吸附能力的大小不同，使各成分得到相互分離的方法。（1）基本原理：

相似者易于吸附（2）吸附劑：①硅膠：是一種微呈酸性的多孔性物質。常用SiO2·xH2O表示。能與許多化合物形成氫鍵而產生吸附作用。適用于分離中性或酸性親脂性成分的分離。（一）柱色譜法1、吸附柱色譜法利用作為固定相的吸附劑對混合物②氧化鋁：是一種吸附性很強的親水性吸附劑，有酸性、堿性、中性三種規格。適用于分離堿性或中性的親脂性成分。③聚酰胺：是由酰胺聚合而成的一類高分子化合物。[基本原理]聚酰胺分子內存在的許多酰胺基能與酚類的羥基、酸類的羧基及醌類的醌基形成氫鍵而產生吸附。②氧化鋁：是一種吸附性很強的親水性吸附劑，有酸性、堿性、中性圖2-14聚酰胺吸附色譜的原理固定相移動相圖2-14聚酰胺吸附色譜的原理固定相移動相聚酰胺對化合物吸附里的強弱取決于形成氫鍵的能力，影響形成氫鍵能力的因素：

Ⅰ溶劑的種類：聚酰胺形成氫鍵的能力在水中最強，在有機溶劑中較弱，在堿性溶劑中最弱。常用溶劑的洗脫能力順序：水<甲醇或乙醇<丙酮<稀氫氧化鈉或稀氨溶液<甲酰胺或二甲基甲酰胺<尿素水溶液聚酰胺對化合物吸附里的強弱取決于形成氫鍵的能力，影響

Ⅱ化合物分子結構：

A化合物分子能形成氫鍵的基團數目越多，被聚酰胺吸附越強。

B成鍵基團所處的位置不同，被吸附的強弱也不同。

C分子中芳香核、共軛雙鍵多者被吸附強度大，少者則被吸附強度小。D能形成分子內氫鍵者被吸附強度減小。適用于化合物的制備性分離、除鞣質。Ⅱ化合物分子結構：A化合物分子能形成氫鍵

④活性炭：是一種非極性吸附劑影響吸附能力的因素：

A在水溶液中吸附力最強，在有機溶劑中較弱。

B對極性基團多的化合物的吸附力大于極性基團少的化合物。

C對芳香族化合物的吸附力大于脂肪族化合物。

D對分子量大的化合物的吸附力大于分子量小的化合物。適用于分離親水性成分（大量制備性分離）。④活性炭：是一種非極性吸附劑影響吸附能力的

3、移動相

4、被分離物質

RH（烷烴<烯烴<芳烴）<RX鹵烴<-OCH3<-COOR<-C=O<-CHO<-SH<-NH2<-OH<Ar-OH<-COOH溶劑和吸附劑的選擇：若被分離物質的極性較大，可選用活度較低的吸附劑，而移動相的極性較大；若被分離物質的極性較小，可選用活度較高的吸附劑，而移動相的極性較小。常見官能團極性大小順序：3、移動相4、被分離物質RH（烷烴<1）選擇色譜柱內徑與柱長之比1︰15~1︰202）裝柱吸附劑粒度均勻100目用量試樣︰吸附劑1︰30~1︰601︰100~1︰200（5）操作技術柱色譜裝置1）選擇色譜柱（5）操作技術柱色譜裝置【裝柱】干法濕法3）上樣濕法上樣：易溶性的試樣用洗脫劑溶解加樣干法上樣：難溶性的試樣加低沸點的極性有機溶劑再與吸附劑拌勻，揮干溶劑加樣4）洗脫

梯度洗脫，等份收集【裝柱】干法3）上樣濕法上樣：易溶性的試樣用洗脫劑溶解加樣4（6）特點（7）適用范圍（8）提示

聚酰胺吸附劑與試樣用量1︰10~1︰20洗脫劑為含水溶劑系統：以水裝柱，用水、乙醇（從低到高）依次洗脫洗脫劑為非極性溶劑系統：以系統中極性較低的溶劑裝柱。（6）特點2、分配色譜法

利用混合物中各成分在互不相溶的兩相溶劑中分配系數的不同，來達到分離的色譜分離方法。（1）基本原理分配系數的不同，達到分離2、分配色譜法利用混合物中各成分在互不相溶的兩相

（2）支持劑硅膠、硅藻土、纖維素粉、濾紙。反相分配色譜：-C18H37，

-C8H17，-C2H5鍵合硅膠正相分配色譜：硅膠表面鍵合氨基或腈基（3）溶劑系統復合兩相溶劑系統；紙色譜摸索；

（4）被分離物質正相分配色譜極性較小的成分移動速度快；反相分配色譜極性較大的成分移動速度快；（2）支持劑硅膠、硅藻土、纖維素粉、濾紙。（3）

（5）操作方式裝吸著固定相的支持劑裝入柱內；用適量固定相溶解試樣；固定相飽和后的移動相洗脫；1）裝柱固定相與支持劑用量0.5︰1~1︰12）加樣支持劑用量為試樣量的100~1000倍3）洗脫（8）提示必須固定相與移動相預飽和溫度恒定合理控制上樣量（5）操作方式

3.離子交換柱色譜法[含義]

是利用離子交換樹脂上的功能基在水溶液中與溶液的其他離子進行可逆性交換的性質，以離子交換樹脂作為固定相，使混合成分中離子型與非離子型物質或具有不同解離度的離子化合物得到分離的一種色譜法。（1）基本原理陽離子交換樹脂陰離子交換樹脂3.離子交換柱色譜法[含義]是利用離子

（2）離子交換樹脂的選擇電荷種類、解離能力、分子大小與數量交換容量、顆粒大小（3）操作方式：1）樹脂的預處理陽離子交換樹脂：按酸-堿-酸的步驟陰離子交換樹脂：按堿-酸-堿的步驟（4）特點（5）適用范圍具有解離能力的化合物（6）提示試樣用量交換容量決定

2）裝柱3）上樣4）洗脫5）再生（2）離子交換樹脂的選擇（3）操作方式：（4）4、凝膠濾過柱色譜法[含義]

是以凝膠為固定相，選擇適當的溶劑進行洗脫，使混合物中分子量大小不同的化合物得到分離的方法。（1）基本原理代表凝膠顆粒代表大分子物質代表小分子物質代表凝膠顆粒

代表大分子物質代表小分子物質4、凝膠濾過柱色譜法[含義]是以凝膠為固定相，選擇（2）凝膠的種類及性能

1）葡聚糖凝膠

2）葡聚糖凝膠LH-20

3）聚丙烯酰胺凝膠4）瓊脂糖凝膠（3）操作方式

1）凝膠的選擇

2）浸泡溶脹3）裝柱4）加樣5）洗脫6）再生（4）特點（5）適用范圍大小分子化合物的分離（6）提示（2）凝膠的種類及性能1）葡聚糖凝膠2）葡聚糖凝膠L

大孔吸附色譜法不含交換基團，具有大孔結構的有機高聚物吸附劑。

1、基本原理吸附性能及分子篩作用。

2、影響分離的因素（1）樹脂本身的化學結構（2）被分離成分的性質（3）溶劑的影響

大孔吸附色譜法1、基本原理吸附性（二）薄層色譜法具體操作：制板、活化：點樣：展開：上行、下行、近水平、環形、單向二次、雙向二次顯色：紫外線照射法、噴霧顯色法、碘蒸氣顯色法測定比移值。Rf值=原點至色譜斑點中心的距離/原點至溶劑前沿的距離（二）薄層色譜法具體操作：Rf值=原點至色（三）紙色譜法

是以濾紙為支持劑，濾紙上吸著的水為固定相，用一定的溶劑系統為移動相進行展開，而使試樣中各組分達到分離的一種分配色譜法。具體操作：點樣、展開、顯色、計算比移值（三）紙色譜法具體操作：點樣、展開、顯色、計（四）高效液相色譜法高效液相色譜法（HPLC）又稱高壓液相色譜、高速液相色譜法（1）基本原理根據被分離物質中各組分在固定相及流動相中的吸附能力、分配系數、離子交換作用或分子量大小的差異而獲得分離。（2）操作技術（3）特點：高壓、高速、高分離效能、高靈敏度、操作自動化、檢測范圍廣。（4）適用范圍廣泛（5）提示色譜純度（四）高效液相色譜法高效液相色譜法（HPLC）又稱高壓液相色（五）氣相色譜法氣相色譜法是一種以氣體作為流動相的色譜分離方法。（1）基本原理利用混合物中各組分在氣體與固定相之間吸附能力的不同或分配系數的差異而獲得分離。（2）操作技術（3）特點：效率高、分析速度快、試樣用量少、選擇性好、應用范圍廣（4）適用范圍適用于具有沸點低、易揮發特性的揮發油成分的分離、鑒定和定量分析。（5）提示色譜純度（五）氣相色譜法氣相色譜法是一種以氣體作為流動相的色譜分離方天然藥物化學主講人：趙雪梅提取分離的方法與技術天然藥物化學主講人：趙雪梅提取分離的方法與技術提取分離的兩種情況：1、目的物為已知成分或化學結構類型2、從天然藥物中尋找未知有效成分或有效部位研究有效成分的程序提取分離鑒定提取分離的兩種情況：1、目的物為已知成分或化學結構類型2、從第一節提取方法及技術一、溶劑提取法1、概念根據天然藥物中各種化學成分的溶解性能，選擇對有效成分溶解度大而對其他成分溶解度小的溶劑，用適當的方法將所需化學成分盡可能完全的從藥材組織中溶解提出的方法。第一節提取方法及技術一、溶劑提取法1、概念2、基本原理（1）粉碎（2）苷類防止酶的水解3、提取前的預處理是在滲透擴散作用下，溶劑滲入藥材組織細胞內部，溶解可溶性物質，造成細胞內外溶質的濃度差，從而帶動溶質做不斷往返的運動，直至細胞內外溶液中被溶解的化學成分的濃度達到平衡，提出所需的化學成分。2、基本原理（1）粉碎3、提取前的預處理4、影響提取的因素溶劑的選擇、提取的方法、藥材的粉碎度、溫度、時間、濃度差等。

溶劑提取法的關鍵：選擇合適溶劑的溶劑。溶劑的選擇：遵循“相似相溶”的規律，根據溶劑的極性，被提取成分及共存的其他成分的性質來決定，同時兼顧考慮溶劑是否使用安全、易得、廉價、濃縮方便等問題4、影響提取的因素溶劑的選擇、提取的方法、藥5、溶劑的極性常用溶劑的極性大小的順序排列如下：石油醚<苯<無水乙醚<三氯甲烷<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇<水表2-1常用溶劑的介電常數5、溶劑的極性常用溶劑的極性大小的順序排列如下：石油醚<按極性大小順序將溶劑的分類：（1）水（2）親水性有機溶劑（3）親脂性有機溶劑極性較大且能與水相互混溶的有機溶劑。甲醇、乙醇、丙酮等。極性較小，與水不能混溶的有機溶劑。石油醚、苯、乙醚、三氯甲烷、乙酸乙酯等。按極性大小順序將溶劑的分類：（1）水（2）親水性有機溶劑（3提取溶劑性能特點適宜提取成分提取方法強極性溶劑溶解范圍廣（酸水、堿水）生物堿鹽穿透能力強苷類浸漬法價廉易得、安全鞣質煎煮法糖類滲漉法水有些脂溶性成分溶解不完全氨基酸（酸水）有些苷類成分的酶解蛋白質水提液易發霉、變質水溶性雜質多，過濾困難沸點高，濃縮困難

常用提取溶劑性能特點

提取溶劑性能特點提取溶劑性能特點適宜提取成分提取方法

除去多糖、溶解范圍廣（不同濃度乙醇）蛋白質外滲漉法（稀醇）水溶性雜質溶出少的大多數浸漬法乙醇可抑制酶的活性

化學成分回流法提取液不易發霉、變質均可

連續回流法大部分可回收利用但有揮發性、易燃燒甲醇溶解特點與乙醇相似，但有毒丙酮溶解性能同乙醇，但沸點低、易揮發，作為提取溶劑不常用；但對色素溶解性能好，在分離、精制時常用。親水性有機溶劑（和水可任意混溶）提取溶劑性能特點提取溶劑性能特點適宜提取成分提取方法

對化合物溶解選擇性較強;水溶性雜質少、易純化;游離生物堿回流法揮發性大、易燃燒、有毒;苷元連續回流法價格昂貴，對提取設備要求高;某些苷類穿透力較弱，提取時間長;作為提取溶劑不常用。

如:乙醚

極易燃氯仿

不易燃，毒性大,對生物堿溶解性好苯

毒性大石油醚沸程30~60℃、60~90℃、90~120℃脫脂、脫色常用

與甲醇、乙醇不能任意混溶。親脂性有機溶劑提取溶劑性能特點【提取方法與技術】（一）浸漬法[含義]

將藥材用適當的溶劑在常溫或溫熱的條件下浸泡一定時間，浸出有效成分的一種方法。[操作技術]冷浸法室溫溫浸法40~60℃[適用范圍]適用于有效成分遇熱易破壞及含淀粉、果膠、黏液質、樹膠等多糖物質較多的天然藥物。[特點]方便、簡單，時間長，效率低，易霉變[提示]加防腐劑：甲苯、甲醛、三氯甲烷【提取方法與技術】（一）浸漬法[含義]將藥材用適當的（二）滲漉法[含義][操作技術]

粉碎—浸潤—裝筒—排氣—浸漬—滲漉—收集滲漉液

將藥材粗粉置滲漉裝置中，連續添加溶劑使滲過藥粉，自上而下流動，浸出有效成分的一種動態浸提方法。（二）滲漉法[含義][操作技術]將藥材粗[適用范圍]

適用于提取遇熱易破壞的成分。[特點]

因能保持良好的濃度差，效率高。

溶劑消耗多，時間長[提示]常溫進行，溶劑為水、酸液、堿液及不同濃度的乙醇[適用范圍]適用于提取遇熱易破（三）煎煮法[含義]

將藥材加水加熱煮沸，濾過去渣后取煎煮液的一種傳統提取方法。[操作技術][適用范圍]

適應于有效成分能溶于水且不易被水、熱破壞的天然藥物的提取。（三）煎煮法[含義]將藥材加水加熱煮沸，[特點]

操作簡單、效率高。[提示]

不宜用于提取含揮發油成分、遇熱易

破壞、含糖類豐富的天然藥物。[特點]操作簡單、效率高。

使用低沸點的溶劑如乙醇、氯仿等加熱提取天然藥物中有效成分時，為減少溶劑的揮發損失，保持藥材與溶劑持久地接觸，通過加熱浸出液，使溶劑受熱蒸發，經冷凝后變為液體流回浸出器，如此反復至浸出完全的一種熱提取方法。（四）回流提取法[含義]使用低沸點的溶劑如乙醇、氯仿等加熱提取天[適用范圍]

[操作技術]適用于脂溶性較強成的分提取。[特點]效率高、溶劑消耗大，操作較麻煩。[提示]

不宜用于對熱不穩定的成分的提取。[適用范圍][操作技術]適（五）連續回流提取法

[含義]

能用少量溶劑進行連續循環回流提取，充分將有效成分浸出完全的方法。[操作技術]

常用索氏提取器[適用范圍]

適用于脂溶性成的分提取。

[特點]

效率高、溶劑用量少，不適用于對熱不穩定的成分的提取。[提示]

更換溶劑。（五）連續回流提取法[含義]能用少量溶劑進（六）超聲提取法[含義]是一種利用超聲波浸提有效成分的方法。[基本原理]利用超聲波的空化作用，破壞植物藥材的細胞，使溶劑易于滲入細胞內，同時超聲波的強烈震動能傳遞巨大能量給浸提的藥材和溶劑，使他們做高速運動，加強了胞內物質的釋放、擴散和溶解，加速有效成分的浸出，極大地提高提取效率。（六）超聲提取法[含義]是一種利用超聲波[操作技術][適用范圍]

適應于遇熱不穩定成分的提取，適應于各種溶劑的提取。[特點]

時間短、效率高、無需加熱。[提示]要求高。【知識鏈接】二、其他提取方法[操作技術][適用范圍]第二章天然藥物化學成分提取分離和鑒定的方法與技術課件（一）水蒸氣蒸餾法[含義][基本原理]水蒸氣蒸餾法是利用某些揮發成分與水或水蒸氣共同加熱，能隨水蒸氣一并蒸餾出，經冷凝后分取獲得的性質，從天然藥物中提出的方法。是當水和與水不相溶的液體成分共存時，根據道爾頓分壓定律，整個體系的總蒸氣壓等于兩個組分蒸氣壓之和。當總蒸氣壓等于外界大氣壓時，混合物開始沸騰并被蒸餾出來。P總=PA+PB（一）水蒸氣蒸餾法[含義][基本原理]水蒸[操作技術][適用范圍]適用于提取具有揮發性，能隨水蒸氣蒸餾出而不被破壞，不溶或難溶于水，與水不發生化學反應的天然藥物化學成分。

[特點]簡單、方便、實用，宜推廣[提示]保溫、與大氣壓相通后，關熱源。可再蒸餾[操作技術][適用范圍]適用于提取具有揮發性，能隨水蒸氣第二章天然藥物化學成分提取分離和鑒定的方法與技術課件（二）升華法[含義]

是利用某些固體物質具有在低于其熔點的溫度下受熱后，不經熔融就直接轉化為蒸氣，遇冷后又凝固為原來的固體的性質，使之從天然藥物中提出的方法。[操作技術][適用范圍]適用于具有升華性成分的提取。[特點]時間長、損失大，易炭化、分解。[提示]

水浴、油浴加熱（二）升華法[含義]是利用某些固體物質具有在低于其熔點

（三）超臨界流體萃取技術

超臨界流體萃取（SupercriticalFluidExtraction,SFE）是一種利用某物質在超臨界區域形成流體，對天然藥物中有效成分進行萃取分離的新型技術，集提取和分離于一體。超臨界流體：某物質處于臨界溫度（Tc）和臨界壓力(Pc)以上時，形成一種既非液體又非氣體的特殊相態。常用的超臨界流體物質：二氧化碳、氧化亞氮、乙烷、乙烯和甲苯等。1、概念（三）超臨界流體萃取技術超臨界流體萃取氣體、超臨界流體和液體的物理性質【超臨界流體特性】具有液體和氣體的雙重特性，如：密度與液體近似，黏度與氣體近似，擴散力和滲透能均大大強于液體（擴散速度比液體快約兩個數量級），對很多物質有很強的溶解能力。

氣體、超臨界流體和液體的物理性質【超臨界流體特性】具有液體和2、基本原理

SF的溶解度直接與其密度相關，通過改變萃取壓力和溫度很容易改變SF的溶解能力3、操作技術4、適用范圍適用于提取分離揮發油、脂溶性、高熱敏性及易氧化分解成分。[超臨界流體]最常見的是二氧化碳，其臨界溫度為(Tc

=31.4℃)，臨界壓力為(Pc=

7.37MPa)2、基本原理SF的溶解度直接與其密度相關，通第二節分離精制和鑒定的方法與技術[濃縮方法]

蒸發水提取液薄膜蒸發

水、稀醇提取液蒸發器、冷凝管、真空泵蒸餾

常壓蒸餾：低沸點有機溶劑提取液的濃縮回收減壓蒸餾：高沸點有機溶劑及有效成分遇熱不穩定的提取液的濃縮回收旋轉蒸發儀反滲透法、超濾法第二節分離精制和鑒定的方法與技術[濃縮方法]第二章天然藥物化學成分提取分離和鑒定的方法與技術課件一、系統溶劑分離法[含義]按極性由小到大的順序選用不同極性的溶劑組成溶劑系統，依次提取分離提取液中各種不同的成分，使各溶解度有差異的成分得到分離。[操作技術][適用范圍]適用于有效成分尚未明確的天然藥物提取液的分離。一、系統溶劑分離法[含義][操作技術][適用范圍]適用【特點】操作繁瑣【提示】研究不明成分的方法

【特點】操作繁瑣【知識鏈接】

溶劑系統及其提取分離成分【知識鏈接】溶劑系統及其提取分離成分1、概念

是指往提取液中加入一種與其互不相溶的溶劑配成兩相溶劑系統，利用混合物中各種成分分配系數的差異而將所需成分萃取出來的分離方法。2、基本原理

利用混合物中各種成分在兩相不相溶的溶劑分配系數的差異而達到分離的目的二、兩相溶劑萃取法1、概念二、兩相溶劑萃取法[分配系數]

K=Cu/CL[分離因子]

兩種溶質在同一溶劑系統中分配系數的比值。

β=KA/KB(注KA>KB)[分配系數][分離因子]3、萃取溶劑的選擇①從水提液中萃取親脂性成分：一般選用苯、三氯甲烷或乙醚②萃取偏親水性成分：需用乙酸乙酯、丁醇等③對于堿性、酸性、兩性成分的萃取分離：常用PH梯度萃取法即利用混合物中各成分的酸（或堿）性強弱不同，相應改變溶劑PH值使之相繼成鹽或游離，改變成分在溶劑系統中的分配系數而與其他成分分離的一種方法。3、萃取溶劑的選擇①從水提液中萃取親脂性成分：②萃取偏親水性（一）簡單萃取法[提示]1、水體液的濃度最好在相對密度1.1-1.2之間。2、選用的萃取溶劑第一次用量一般為水提液的1/2-1/3，以后的用量可適當減少為水提液的1/4-1/6。3、一般萃取3-4次即可。4、若用氯仿萃取，易產生乳化現象。5、形成乳化，破乳。【適用范圍】分配系數差異較大的成分的分離（一）簡單萃取法[提示]2、選用的萃取溶劑第一次用量一般為水（二）逆流連續萃取法[含義]

利用兩相互不相溶的溶劑相對密度的不同，使相對密度小的相液作為移動相（或分散相），逆流連續穿過相對密度大的作為固定相（或連續相）的相液，借以交換溶質而達到分離的一種連續萃取技術。【適用范圍】

適用于各種密度的萃取溶劑（二）逆流連續萃取法[含義]【適用范圍】（三）逆流分溶法（四）液滴逆流分配法【適用范圍】

適用于分離中等極性、分離因子較小及不穩定的物質。【適用范圍】

適用于皂苷類化學成分的分離。（三）逆流分溶法（四）液滴逆流分配法【適用范圍】【適用范圍】[破壞乳化現象的方法] ①放置較長時間⑧其他破壞乳化的物質如乙醇、黃化蓖麻油等②攪動③乳化層抽濾④將乳化層加熱或冷凍⑤分出乳化層，再用新溶劑萃取⑥加入少量電解質（如氯化鈉）⑦滴加數滴醇類如戊醇改變表面張力，破壞乳狀液[破壞乳化現象的方法]⑧其他破壞乳化的物質如乙醇、黃化蓖麻油三、沉淀法[含義]是指在天然藥物的提取液中加入某些試劑，使產生沉淀或降低溶解性而從溶液中析出，從而獲得有效成分或去除雜質的方法。[分類]（一）酸堿沉淀法是利用某些成分能在酸（或堿）中溶解，繼而又在堿（或酸）中生成沉淀的性質達到分離的辦法。三、沉淀法[含義][分類]是利用某些成分能1、操作技術2、適用范圍酸性、堿性或兩性化合物的分離。3、特點沉淀反應可逆4、提示分離生物堿、內酯結構化合物具酸性的化合物1、操作技術（二）試劑沉淀法[含義]利用一些成分能與某些試劑產生沉淀的性質，或利用某些成分在不同溶劑中溶解度的差異，通過加入特定試劑或溶液，使生成沉淀，與其他成分分離。1、操作技術2、適用范圍適用于能與某些試劑產生沉淀或在不同溶劑中溶解度有差異的化學成分的分離3、特點沉淀反應可逆或不可逆（二）試劑沉淀法[含義]1、操作技術四、結晶與重結晶法[含義]利用混合物中各成分在溶劑中溶解度的差別，使所需成分以結晶狀態析出，達到分離精制的目的分離方法。[結晶]

將物質由非結晶狀通過處理得到結晶狀物的過程。[重結晶]

將粗結晶用適當的溶劑處理純化為較純的結晶狀物質。四、結晶與重結晶法[含義][結晶]將物質由非結晶狀通過1、結晶溶劑的選擇選擇合適的溶劑是結晶法的關鍵。[溶劑具備條件]1）不與結晶物質發生化學物質2）對結晶物質的溶解度隨溫度不同有顯著差異熱時溶解度大，冷時溶解度小3）對雜質溶解度非常大或非常小4）沸點適中5）能給出較好的結晶1、結晶溶劑的選擇選擇合適的溶劑是結晶法的關鍵。[溶劑具備條結晶法常用的溶劑有水、冰醋酸、甲醇、乙醇、丙酮、醋酸乙酯、氯仿等。當不能選擇一種合適的試劑時，通常選用兩種以上溶劑組成的混合溶劑。

以兩種能以任意比例互溶的溶劑組成，要求低沸點溶劑對被提純物質的溶解度大，而高沸點溶劑對被提純物的溶解度小。結晶法常用的溶劑有水、冰醋酸、甲醇、乙醇、丙3、結晶的條件雜質的去除有效成分的含量溶液的濃度合適的溫度、時間3、結晶的條件雜質的去除有效成分的含量溶液的濃度合適的溫度、3、結晶純度的判斷1）晶形和色澤2）熔點和熔距3）紙色譜或薄層色譜技術4）高效薄層色譜、氣相色譜、高效液相色譜3、結晶純度的判斷1）晶形和色澤2）熔點和熔距3）紙色譜或薄4、操作技術1）制備結晶溶液。2）趁熱過濾，除去不溶性雜質。3）將濾液放冷，使析出結晶。4）抽氣濾過，將結晶從母液中分出。5）重結晶6）晶體的干燥紅外燈烘干真空恒溫干燥器干燥4、操作技術1）制備結晶溶液。2）趁熱過濾，除去不溶性雜質。5、適用范圍適用于分離純化固體化學成分6、特點分離純化固體成分的重要方法之一。7、提示選擇合適的溶劑注意結晶條件5、適用范圍五、透析法[含義]

利用提取液中小分子物質可通過透析膜，而大分子物質不能通過透析膜的性質使分子量差異較大的物質達到分離的方法。1、操作技術2、適用范圍適用于分離純化天然藥物化學成分中的大分子物質3、特點操作簡單、分離較完全4、提示關鍵是膜孔的選擇五、透析法[含義]六、分餾法[含義]利用各沸點不同的化合物組成混合物，在分餾過程中產生高低不同的蒸氣壓，從而收集到不同沸點溫度的餾分，達到分離的目的的方法。1、操作技術2、適用范圍適用于分離純化天然藥物中沸點相差較小的液體混合物。六、分餾法[含義]3、特點操作簡單、加熱可破壞某些成分4、提示保持柱內適當的溫度梯度，嚴格控制熱源的溫度。

3、特點七、色譜法[基本原理]利用混合物中各成分在固定相和移動相中吸附、分配及其親和力的差異而達到分離。[分類]按固定相和支持劑種類:氧化鋁色譜、硅膠色譜、聚酰胺色譜、凝膠色譜等。按移動相種類：氣相色譜、液相色譜。按操作方式：柱色譜、紙色譜和薄層色譜。按色譜原理：吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、凝膠色譜等。七、色譜法[基本原理]利用混合物中各成分在固表2-3被分離化合物與相應選擇的色譜方法表2-3被分離化合物與相應選擇的色譜方法1、吸附柱色譜法

利用作為固定相的吸附劑對混合物中各成分吸附能力的大小不同，使各成分得到相互分離的方法。（1）基本原理：

相似者易于吸附（2）吸附劑：①硅膠：是一種微呈酸性的多孔性物質。常用SiO2·xH2O表示。能與許多化合物形成氫鍵而產生吸附作用。適用于分離中性或酸性親脂性成分的分離。（一）柱色譜法1、吸附柱色譜法利用作為固定相的吸附劑對混合物②氧化鋁：是一種吸附性很強的親水性吸附劑，有酸性、堿性、中性三種規格。適用于分離堿性或中性的親脂性成分。③聚酰胺：是由酰胺聚合而成的一類高分子化合物。[基本原理]聚酰胺分子內存在的許多酰胺基能與酚類的羥基、酸類的羧基及醌類的醌基形成氫鍵而產生吸附。②氧化鋁：是一種吸附性很強的親水性吸附劑，有酸性、堿性、中性圖2-14聚酰胺吸附色譜的原理固定相移動相圖2-14聚酰胺吸附色譜的原理固定相移動相聚酰胺對化合物吸附里的強弱取決于形成氫鍵的能力，影響形成氫鍵能力的因素：

Ⅰ溶劑的種類：聚酰胺形成氫鍵的能力在水中最強，在有機溶劑中較弱，在堿性溶劑中最弱。常用溶劑的洗脫能力順序：水<甲醇或乙醇<丙酮<稀氫氧化鈉或稀氨溶液<甲酰胺或二甲基甲酰胺<尿素水溶液聚酰胺對化合物吸附里的強弱取決于形成氫鍵的能力，影響

Ⅱ化合物分子結構：

A化合物分子能形成氫鍵的基團數目越多，被聚酰胺吸附越強。

B成鍵基團所處的位置不同，被吸附的強弱也不同。

C分子中芳香核、共軛雙鍵多者被吸附強度大，少者則被吸附強度小。D能形成分子內氫鍵者被吸附強度減小。適用于化合物的制備性分離、除鞣質。Ⅱ化合物分子結構：A化合物分子能形成氫鍵

④活性炭：是一種非極性吸附劑影響吸附能力的因素：

A在水溶液中吸附力最強，在有機溶劑中較弱。

B對極性基團多的化合物的吸附力大于極性基團少的化合物。

C對芳香族化合物的吸附力大于脂肪族化合物。

D對分子量大的化合物的吸附力大于分子量小的化合物。適用于分離親水性成分（大量制備性分離）。④活性炭：是一種非極性吸附劑影響吸附能力的

3、移動相

4、被分離物質

RH（烷烴<烯烴<芳烴）<RX鹵烴<-OCH3<-COOR<-C=O<-CHO<-SH<-NH2<-OH<Ar-OH<-COOH溶劑和吸附劑的選擇：若被分離物質的極性較大，可選用活度較低的吸附劑，而移動相的極性較大；若被分離物質的極性較小，可選用活度較高的吸附劑，而移動相的極性較小。常見官能團極性大小順序：3、移動相4、被分離物質RH（烷烴<1）選擇色譜柱內徑與柱長之比1︰15~1︰202）裝柱吸附劑粒度均勻100目用量試樣︰吸附劑1︰30~1︰601︰100