發酵大題范圍1、紀律是管理關系的形式。——阿法納西耶夫2、改革如果不講紀律，就難以成功。3、道德行為訓練，不是通過語言影響，而是讓兒童練習良好道德行為，克服懶惰、輕率、不守紀律、頹廢等不良行為。4、學校沒有紀律便如磨房里沒有水。——夸美紐斯5、教導兒童服從真理、服從集體，養成兒童自覺的紀律性，這是兒童道德教育最重要的部分。——陳鶴琴發酵大題范圍發酵大題范圍1、紀律是管理關系的形式。——阿法納西耶夫2、改革如果不講紀律，就難以成功。3、道德行為訓練，不是通過語言影響，而是讓兒童練習良好道德行為，克服懶惰、輕率、不守紀律、頹廢等不良行為。4、學校沒有紀律便如磨房里沒有水。——夸美紐斯5、教導兒童服從真理、服從集體，養成兒童自覺的紀律性，這是兒童道德教育最重要的部分。——陳鶴琴參數檢測例：鳥苷生產在鳥苷發酵中，發現發酵到40小時后鳥苷合成速率下降，但糖耗速率并未下降，而且由于耗糖,使發酵過程pH下降，補入氨水增多。那么糖耗到哪里去了呢？于是進行以下一些測定與分析隨著新課程改革的不斷深入，歷史教學發生著巨大的變化，改變傳統的歷史教學模式，探索新的適合新課程理念的教學方法和手段，實現課堂教學的有效性，成為歷史教師們孜孜以求的目標。筆者經過了多年的新課程教學實踐，對歷史教學的方法進行了探索和嘗試，期間有困惑、失敗，也有收獲的喜悅，在諸多的教學方法的嘗試中，筆者認為情境教學是提高歷史教學有效性的重要途徑。所謂情境教學，是指從教學需要和學生的實際出發，教師有目的地引入或創設具有一定情緒色彩的、以形象為主體的生動具體的場景，以引起學生一定的態度體驗，從而幫助學生理解教材，并使學生的心理機能得到發展的教學方法。那么如何創設情境提高歷史教學的有效性？筆者從以下幾個方面進行了總結：一、利用史料有效創設問題情境雖然歷史教科書是獲得歷史知識和培養歷史思維的基礎性資源，但由于其空間的局限，教科書呈現的內容過于簡練，語言抽象，并且結論性的內容太多，致使教師和學生固守教科書中的結論，創新、質疑的精神就被扼殺了，三維目標中的過程與方法也難以體現。如何優化三維目標，實現課堂教學的有效性，照本宣科是不行的。因此，課堂教學要根據學生實際和內容需要通，通過呈現一些材料情境，設置有思維性的問題來引導學生閱讀、分析、質疑、解決問題，用已有的經驗，結合材料構建自己的歷史認識和歷史知識，真正做到“論從史出，史論結合”。使學生真正成為歷史探究的主體，使課堂成為學生探索歷史的場所，促成學生的開放性思維和創新能力，從而提高學生運用知識等能力。歷史上的史料非常豐富，歷史著作、碑文、報紙雜志、詩歌、小說、戲劇、民謠、圖片、遺址等。老師要善于挖掘，搜集和整理，以此來拓寬學生的知識面。教材里提供的史料，教師也要充分利用，也可以借鑒和引用一些高考試題里的材料題。但史料的運用一定要有所選擇，要典型，要與課堂教學緊密結合起來，既要注重質又要注重量。所選史料、所提問題必須符合客觀規律，并遵循由淺入深、由易到難、循序漸進的原則。在歷史教學中運用史料創設情境，不僅能體現歷史的真實性、生動性，還可以培養學生歷史思維，拓寬學生的歷史視野。但是在史料的選擇上要慎重，選擇的史料要典型，對所選的史料要甄別，不能斷章取義，主觀臆斷。這就要求教師平時多讀書、多思考、多研究，不斷提高自身的專業素養。二、通過直觀形象的手段再現歷史情境歷史是豐富多彩的，在歷史事件發生的過程中，歷史人物有著豐富的情感、復雜的心理、生動的語言等等。但在現在的歷史教科書中，這些生動的歷史場景只剩下干癟的軀殼，失去了它原有的生命力。要激發學生的學習興趣、要增強學生對歷史的感性認識、要提高學生對歷史問題的理性分析、要在更高程度上實現歷史教學的有效性，有必要通過直觀形象的手段，再現歷史現場歷史的豐富性、生動性。再現歷史情境的手段有很多種，例如用歷史圖片再現歷史情境，歷史圖片包括人物圖片、實物圖片及歷史地圖等。利用圖片創設情境，可以豐富學生的感性認識，把較復雜的問題簡明化，抽象的問題形象化，便于學生理解。多媒體是一種現代化的教學手段，可以呈現文字、圖片、音樂、動畫、視頻、電影等。用多媒體輔助教學能夠直觀“再現”歷史，可以圖文并茂、聲情兼備地的創設歷史情境，學生有身臨其境之感，如《抗日戰爭》中日軍暴行的視頻、古代的書法繪畫作品欣賞、鄧小平的“南巡”談話……都能通過多媒體手段將抽象變為具體，有效地將形象和思維融為一體。利用多媒體創設情境起著事半功倍的效果。但不管哪種直觀的教學手段都是服務與教學目的，教學的目的不是用這些豐富多彩的圖片資料和影像資料吸引學生，而是讓學生對情境中蘊含的歷史信息和問題進行思考和探究。所以在用多媒體進行教學時，教師要對所呈現的情境的表達方式、時間、結合情境所產生的歷史問題精心設計，啟發學生進入主動探求、積極思考的狀態，從而達到最佳的教學效果。同時還要注意不能讓學生成為觀眾，教師成為解說員不斷點擊鼠標，連續演示媒體，喧賓奪主，沒有時間搜集學生反饋的信息，學生也來不及對知識內容做出深入細致的思考，不能參與其中，這樣的教學就成了無效教學。三、用角色扮演體驗情境角色扮演是通過扮演歷史人物、模仿歷史人物的所思、所想、所行，營造出特定的歷史時空，創設出一種身臨其境的氛圍，讓學生充分參與教學、體驗歷史的方法。這種方法既可以讓學生把自己放置在特定的歷史氛圍中去把握歷史人物的思想和情感，又能夠拉近學生與歷史的距離，充分調動學生的積極性和參與性，從而在內心體驗所扮演的歷史人物的心態及當時的歷史狀況。學生參與了整個教學過程，有助于他們更好地理解過去，更深刻地記住歷史、認識歷史、理解歷史、感悟歷史。角色扮演并不是為了表演而表演，背背臺詞，表演前對歷史人物的認識，表演中與同學的合作，表演后的評價更加重要，所以這一方法最好配合討論法同時進行，有助于培養學生的語言智能和合作精神。角色扮演準備的過程相對要復雜一些，要收集資料，選演員、編劇、導演，設計場景到最后的表演、評價、總結，要發揮學生的主體性，教師不能包辦代辦，也不能袖手旁觀，要發揮其主導作用，給予資料查找、主題的確定方面的指導，以及表演后的評價。情境教學可以為學生創設良好的學習氛圍，有利于激發學生的學習興趣和動機，培養學生的實踐能力，培養學生的合作意識和創造能力，無疑是提高歷史教學有效性的重要途徑。0前言隨著時代的發展和改革開放的不斷深入，我國與世界各國的交往越來越頻繁，英語在出入境邊防檢查中發揮著越來越重要的作用。多年來，通過積極開展邊檢英語培訓，邊檢人員英語水平有了很大提高，但一線檢查人員的英語水平與新時期的執勤執法要求仍不相適應，特別是對邊防檢查中的許多專業詞匯不知如何翻譯。由于邊檢英語明顯區別于其他文體，其涉外敏感性和翻譯現狀決定了翻譯時需遵循語言等效，譯名統一和專業表達的原則。1邊檢英語翻譯的三大原則1.1語言等效原則1.2譯名統一原則當前，口岸交流活動日益頻繁，在邊防檢查領域仍存在著譯名不規范、不統一現象，對邊檢英語的語言等效翻譯產生了一定影響。一般來說，譯名統一原則力求“一名一譯”，而不是“一名多譯”。概念和術語的唯一性和單義性決定了其在目的語中的譯文應是唯一的，而不是多個譯本。以“邊防檢查站”翻譯為例，在兩種譯法“FrontierInspectionStation”和“ImmigrationInspectionStation”中，筆者認為后者為最佳譯法。原因如下：從語境上來說，“immigration”系中性詞，泛指出入國境人員和交通運輸工具的出入國邊境行為，能最大限度地實現了譯文等效；它還能與“inspection”搭配，符合英語表達習慣。前者譯法則不夠貼切，原因如下：“frontier”一詞的語氣和情感色彩都比較強調“國土、邊境”意義，容易讓人聯想到國家主權含義，具有一定的“threatening”（威脅性）。雖然邊檢機關曾對多個譯名進行過統一，但因語言習慣和約定俗成等原因，仍存在譯名翻譯和使用不統一、不規范的問題，給口岸對外交流帶來了不同程度的影響和困擾。1.3專業表達原則2邊檢英語翻譯三大原則之間的關系當翻譯原則之間出現沖突、一個對應詞翻譯無法滿足以上所有原則時，語言等效原則是最重要、最基本的原則，其他原則可以做出讓步和犧牲。如在涉及地名翻譯時，應堅持以語言等效為主、其他翻譯原則為輔，常采取音譯為主的譯法。以“藏南地區”為例，應音譯為“ZangnanArea”，或直譯為“SouthTibet”。絕不能譯成印度或西方國家的慣用語“ArunachalPradesh”（阿魯納恰爾邦），它是英國殖民時期的舊稱，象征英印的版圖。再如“口岸開放政策”一詞，英語里沒有“openpolicy”這種固定表達方式，但不能簡單地對譯為“portopen-doorpolicy”。這種譯法容易讓人聯想起近代的“門戶開放政策”。應從我國獨立自主的外交政策出發，將之直譯為“openpolicy”（opening-uppolicy），不能因為一味地迎合西方讀者的語言習慣，而犧牲譯文的語言等效含義。3結束語邊檢英語是出入境邊防檢查工作必不可少的工具，是邊檢人員與服務對象溝通交流的重要橋梁和紐帶。由于培訓機制和個人基礎參差不齊等原因，部分一線檢查人員英語運用和翻譯能力尚未達到當前對外開放口岸執勤執法工作的需要，也不能順利完成與外籍服務對象的溝通和交流。因此，在今后的英語學習培訓中，筆者認為可充分考慮運用先進信息化技術設備（網路學習室、投影儀、聲像資料等），引入計算機輔助教學、多媒體課件應用等，把文字、聲音、圖像等多種信息融合于一體，全面培養邊檢人員的學習意識和聽、說、讀、寫，尤其是翻譯能力。同時，建立英語培訓長效機制，通過開設“英語角”、每周選定一天作為“英語日”和開展邊檢英語翻譯競賽等形式，營造濃厚的語言學習氛圍，提高人員英語學習的趣味性和有效性，推動整體英語語言能力和翻譯水平的提升，強化邊檢人員的服務素質與基礎，為駐地口岸開放和經濟發展做出貢獻。【發酵大題范圍1、紀律是管理關系的形式。——阿法納西耶夫發酵大1參數檢測參數檢測2例：鳥苷生產在鳥苷發酵中，發現發酵到40小時后鳥苷合成速率下降，但糖耗速率并未下降，而且由于耗糖,使發酵過程pH下降，補入氨水增多。那么糖耗到哪里去了呢？于是進行以下一些測定與分析例：鳥苷生產在鳥苷發酵中，發現發酵到40小時后鳥苷合成速率下3什么因素導致pH下降？1、有機酸的積累有機酸積累pH下降補加氨水在正常代謝情況下，細胞通過EMP途徑和TCA循環的過程是為細胞合成提供前體和能量的，按照細胞經濟學的原則不會供過于求，即不會出現有機酸的積累若發酵后期有機酸積累會引起加入的[NH4+]積累，相應出現產苷速率下降。——代謝不正常什么因素導致pH下降？1、有機酸的積累4測定以下中間物發酵后期丙酮酸積累測定以下中間物發酵后期丙酮酸積累52、氨基酸的積累在有機酸分析的基礎上進一步通過HPLC測定發酵過程中不同時間發酵液中氨基酸，結果發現總氨基酸積累并且其積累晚于有機酸和[NH4+]積累。2、氨基酸的積累6氨基酸成分分析表明，初始發酵液中谷氨酸濃度比較高，其它氨基酸濃度都較低，隨著發酵過程的進行谷氨酸很快被用于菌體合成，在8小時之前已經降到很低水平，并始終維持在低水平，而在48小時左右丙氨酸開始出現明顯的積累，發酵液中積累量達到初始量的12.6倍之多，其它十余種氨基酸濃度則變化不大，并且在整個發酵過程中都維持在較低水平。因此，丙氨酸濃度變化可能是導致代謝流遷移所致。氨基酸成分分析表明，初始發酵液中谷氨酸濃度比較高，其它氨基酸73、分析原因發酵過程中積累的氨基酸主要是丙氨酸，而丙氨酸的合成可以直接由丙酮酸轉化而來，因此可以推斷由于EMP途徑代謝流的增加造成了丙酮酸的積累，丙酮酸隨后轉化為丙氨酸丙氨酸本身又會對谷氨酸合成酶（GS）造成反饋抑制和阻遏，使產苷速率降低。3、分析原因8惡性循環激活磷酸果糖激酶丙酮酸積累氨水補加增加[NH4+]積累抑制GS抑制TCA循環丙酮酸積累EMP流量增加丙氨酸積累惡性循環激活磷酸果糖激酶丙酮酸積累氨9（二）代謝流遷移的酶學證明糖代謝途徑關鍵酶糖酵解途徑（EMP）在糖酵解途徑中有兩個不可逆的步驟的酶：磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶磷酸果糖激酶的時序分析（二）代謝流遷移的酶學證明1012小時時由于生長處于對數生長初期，代謝活力較低，所以PFK的活力相對較低。24小時后隨著發酵過程進入平穩產物形成期和細胞生長期，磷酸果糖激酶的活力也基本保持平穩。但是到40小時以后，鳥苷形成速率減慢甚至停止，同時觀察到氨基酸和有機酸積累，PFK相對酶活增加，這表明此時通過EMP途徑的糖代謝通量已有了明顯的增加。12小時時由于生長處于對數生長初期，代謝活力較低，所以PFK11丙酮酸激酶時序分析丙酮酸激酶時序分析12丙酮酸激酶沒有表現出明顯的酶活增加，而是在24小時就基本上達到其最大值，隨后維持在恒定的水平，這表明在糖代謝時EMP途徑代謝流增加中丙酮酸激酶所起的作用不大，不是造成代謝流遷移的主要因素磷酸戊糖途徑（HMP）關鍵酶磷酸戊糖途徑中主要的限速酶是6－磷酸葡萄糖脫氫酶，該酶催化6－磷酸葡萄糖脫氫生成6－磷酸葡萄糖酸內酯。丙酮酸激酶沒有表現出明顯的酶活增加，而是在24小時就基本上達136－磷酸葡萄糖脫氫酶時序分析由圖可以看到，早期6－磷酸葡萄糖脫氫酶活力很高，這可能是前期菌體合成代謝比較活躍，通過HMP途徑合成用于細胞成分的核酸等組成物質；隨后基本不變，從而保持EMP和HMP途徑通量的平衡，此時穩定持續的形成產物；但是到40小時后，6－磷酸葡萄糖脫氫酶已經表現出明顯的下降趨勢，并且隨著后期發酵過程的進行而持續下降。根據物料平衡原則，有可能糖代謝在HMP途徑通量下降而EMP途徑通量增加。6－磷酸葡萄糖脫氫酶時序分析由圖可以看到，早期6－磷酸葡萄糖14三羧酸(TCA)循環的關鍵酶三羧酸循環是“消耗”丙酮酸的途徑，三羧酸流量大丙酮酸不會積累。三羧酸循環中的關鍵酶為檸檬酸合成酶，其催化乙酰輔酶A與草酰乙酸縮合形成檸檬酸，是三羧酸循環的啟動步驟，也是三羧酸循環中的主要控制點，由檸檬酸合成酶所催化的反應是三羧酸循環中的第一個限速步驟。三羧酸(TCA)循環的關鍵酶三羧酸循環是“消耗”丙酮酸的途徑15檸檬酸合成酶時序分析檸檬酸合成酶時序分析16從圖可以看到，TCA循環的關鍵酶檸檬酸合成酶在整個發酵過程中，尤其是在后期產苷速率下降的過程中都維持比較平穩的水平，這表明在發酵過程后期所發生的代謝流遷移時，TCA循環的通量并沒有發生明顯的增加。即代謝流遷移發生在EMP和HMP之間，主要是由于EMP和HMP途徑之間的分配平衡被打破所造成的。EMP途徑代謝流的增加造成了一種代謝流的溢流現象。從圖可以看到，TCA循環的關鍵酶檸檬酸合成酶在整個發酵過程中17丙氨酸脫氫酶的時序分析丙氨酸脫氫酶的時序分析18在發酵中后期，丙氨酸脫氫酶活力出現了明顯的增加。丙氨酸脫氫酶催化由丙酮酸生成丙氨酸，該酶活性增加與丙酮酸和丙氨酸的時序增加相吻合，這些數據表明代謝流的溢流現象發生在檸檬酸合成酶之前的丙酮酸節點，通過丙氨酸脫氫酶生成丙氨酸，從而緩解了EMP途徑代謝流增加造成的代謝不平衡。結果加入EMP途徑的抑制劑，克服了代謝流遷移的問題，提高了鳥苷的產量在發酵中后期，丙氨酸脫氫酶活力出現了明顯的增加。丙氨酸脫氫酶19基因工程菌基因工程菌20（三）基因不穩定性生產的目標是得到最大量的外源蛋白，但是大量外源蛋白的形成對宿主細胞是有損害的，通常是致死的，失去制造外源蛋白的能力的細胞一般生長得快得多，從而能替代有生產能力的菌株，這就導致基因的不穩定性。基因的不穩定性原因：分離丟失結構不穩定性宿主細胞調節突變（三）基因不穩定性生產的目標是得到最大量的外源蛋白，但是大量211、分離丟失

指工程菌分裂時出現一定比例不含質粒子代菌的現象。為什么會出現質粒丟失呢？質粒可分為高拷貝質粒（>20拷貝/細胞）和低拷貝質粒（有時低到每個細胞一至二個拷貝）。低拷貝質粒有專門的機制保證在子代細胞中有相等的分配，高拷貝質粒通常很少遵循二分法分配到子代細胞。對于高拷貝質粒，絕大多數子細胞接受一些質粒，也有可能有的細胞沒有接受質粒，出現質粒丟失。雖然形成無質粒細胞的可能性是低的（每百萬細胞分裂中一個）。1、分離丟失指工程菌分裂時出現一定比例不含質粒子代菌的現象22在大的反應器中含有非常多的細胞，總會存在無質粒細胞，例如1000L發酵液，每毫升有109個細胞，總共就有1015個細胞，那么在這個反應器中就含有109個無質粒細胞。質粒的分離丟失受許多環境因素影響，如溶氧、溫度、培養基組成和恒化器中的稀釋速率。許多質粒也會形成多聚體，它是相同質粒附著在一起形成一個單位。在大的反應器中含有非常多的細胞，總會存在無質粒細胞，例如1023分離丟失示意圖分離丟失示意圖242、質粒結構不穩定性

指外源基因從質粒上丟失或堿基重排、缺失所致工程菌性能的改變。如果質粒發生突變，仍保留了抗生素抗性基因，但不合成外源蛋白，那么這些突變株仍能在含有抗生素的培養基中生長。而且由于不合成外源蛋白，生長得比原來的工程菌更快，使得在這種培養物中帶有突變質粒的菌占統治地位，這種培養情況就是結構不穩定性。2、質粒結構不穩定性指外源基因從質粒上丟失或堿基重排、缺失253、宿主細胞突變

宿主細胞的突變也會造成生產能力的下降。這些突變通常改變細胞調節，結果減少目標蛋白的合成。例如，控制外源蛋白表達的啟動子，利用宿主細胞的啟動子，如果宿主細胞啟動子的改變，將大大改變質粒編碼蛋白的生產水平。乳糖操縱子是常用是操縱子，通過加入乳糖或它的結構類似物（如IPTG）來啟動表達，如果乳糖操縱子編碼半乳糖苷透酶的基因發生突變就會阻止乳糖或乳糖的結構類似物進入細胞，從而不能啟動細胞的表達。3、宿主細胞突變宿主細胞的突變也會造成生產能力的下降。這些264、生長速率占優勢的不穩定性所有這三種因素的關鍵是變異了的宿主載體系統和原宿主-載體系統的生長速率不同。如果變異了的宿主載體系統比原來的宿主-載體系統有生長優勢，那么變異了的系統將最終占優勢，基因不穩定性就出現。

（四）表達的誘導基因工程菌的產物表達需要誘導，誘因主要有：溫度誘導、乳糖或乳糖結構類似物誘導、氧饑餓誘導、葡萄糖饑餓誘導、甲醇誘導等。4、生長速率占優勢的不穩定性所有這三種因素的關鍵是變異了的宿27提高質粒穩定性的方法

1、兩階段培養法：第一階段使菌體生長至一定密度，第二階段誘導外源基因的表達。在培養基中加入選擇性壓力如抗生素等，以抑制質粒丟失菌的生長。2、通過控制環境參數（溫度、PH、培養基組分和溶解氧濃度），調節比生長速率，使工程菌生長具有優勢。有些含質粒的菌對發酵環境的改變比不含質粒的菌反應慢，因而間歇改變培養條件以改變這兩種菌的比生長速率，可以改善質粒的穩定性。提高質粒穩定性的方法28染菌染菌293、不同時間染菌對發酵的影響污染時間是指用無菌檢測方法確準的污染時間，不是雜菌竄入培養液的時間。雜菌進入培養液后，需有足夠的生長、繁殖的時間才能顯現出來，顯現的時間又與污染菌量有關。污染的菌量多，顯現染菌所需的時間就短，污染菌量少，顯現染菌的時間就長。3、不同時間染菌對發酵的影響污染時間是指用無菌檢測方法確準的30（1）種子培養期染菌由于接種量較小，生產菌生長一開始不占優勢，而且培養液中幾乎沒有抗生素（產物）或只有很少抗生素（產物）。因而它防御雜菌能力低，容易污染雜菌。如在此階段染菌，應將培養液全部廢棄。（1）種子培養期染菌由于接種量較小，生產菌生長一開始不占優勢31（2）發酵前期染菌發酵前期最易染菌，且危害最大。原因發酵前期菌量不很多，與雜菌沒有競爭優勢；且還未合成產物（抗生素）或產生很少，抵御雜菌能力弱。在這個時期要特別警惕以制止染菌的發生。染菌措施可以用降低培養溫度，調整補料量，用酸堿調pH值，縮短培養周期等措施予以補救。如果前期染菌，且培養基養料消耗不多，可以重新滅菌，補加一些營養，重新接種再用。（2）發酵前期染菌發酵前期最易染菌，且危害最大。32（3）發酵中期染菌

發酵中期染菌會嚴重干擾產生菌的代謝。雜菌大量產酸，培養液pH下降；糖、氮消耗快，發酵液發粘，菌絲自溶，產物分泌減少或停止，有時甚至會使已產生的產物分解。有時也會使發酵液發臭，產生大量泡沫。措施降溫培養，減少補料，密切注意代謝變化情況。如果發酵單位到達一定水平可以提前放罐，或者抗生素生產中可以將高單位的發酵液輸送一部分到染菌罐，抑制雜菌。（3）發酵中期染菌發酵中期染菌會嚴重干擾產生菌的代謝。雜菌33（4）發酵后期染菌發酵后期發酵液內已積累大量的產物，特別是抗生素，對雜菌有一定的抑制或殺滅能力。因此如果染菌不多，對生產影響不大。如果染菌嚴重，又破壞性較大，可以提前放罐。（4）發酵后期染菌發酵后期發酵液內已積累大量的產物，特別是抗34帶圖題帶圖題35谷氨酸正常發酵與異常發酵溶解氧變化谷氨酸正常發酵與異常發酵溶解氧變化36氧氣氧氣37實例一對黃色短桿菌生物合成氨基酸時發現：菌體的臨界溶氧濃度為0.01mg/L當溶氧濃度低于1.0時，谷氨酸和天冬氨酸族氨基酸合成受到影響，但苯丙氨酸，纈氨酸和亮氨酸最佳合成的溶氧濃度分別為0.55、0.60和0.85。實例一對黃色短桿菌生物合成氨基酸時發現：菌體的臨界溶氧濃度為38從合成途徑中可知，谷氨酸和天冬氨酸族的氨基酸來自于三羧酸循環(TCA)的中間體，而苯丙氨酸、纈氨酸和亮氨酸來自于糖酵解的中間體，即來自于丙酮酸和磷酸稀醇式丙酮酸。從合成途徑中可知，谷氨酸和天冬氨酸族的氨基酸來自于三羧酸循環39溫度溫度40在四環素發酵中，還發現生物熱和菌的呼吸強度的變化有對應關系，特別是在80小時以前。從此實驗中還可看到，當產生的生物熱達到高峰時，糖的利用速度也最大。另外也有人提出，可從菌體的耗氧率來衡量生物熱的大小。

四環素生物合成過程中系列參數的動態變化過程1：效價；2：呼吸強度；3：生物熱；4：糖濃度在四環素發酵中，還發現生物熱和菌的呼吸強度的變化有對應關系，41第二題第二題421、微生物對溫度的要求不同與它們的膜結構物理化學性質有密切關系根據細胞膜的液體鑲嵌模型，細胞在正常生理條件下，膜中的脂質成分應保持液晶狀態，只有當細胞膜處于液晶狀態，才能維持細胞的正常生理功能，使細胞處于最佳生長狀態微生物的生長溫度與細胞膜的液晶溫度范圍相一致。二、微生物與溫度相關性的原理1、微生物對溫度的要求不同與它們的膜結構物理化學性質有密切關432、蛋白質結構人們采用二種方案來研究酶在低溫條件下的結構完整性和催化功能：(1)通過自然或誘導突變，將特定殘基發生改變的蛋白與其天然結構進行對比；(2)對比同屬嗜熱、嗜溫及嗜冷菌的蛋白結構通過對嗜冷酶的蛋白質模型和x一射線衍射分析表明，嗜冷酶分子間的作用力減弱，與溶劑的作用加強，酶結構的柔韌性增加，使酶在低溫下容易被底物誘導產生催化作用2、蛋白質結構人們采用二種方案來研究酶在低溫條件下的結構完整44

嗜冷菌具有在0℃合成蛋白質的能力。這是由于其核糖體、酶類以及細胞中的可溶性因子等對低溫的適應，蛋白質翻譯的錯誤率最低。許多中溫菌不能在O0C合成蛋白質，一方面是由于其核糖體對低溫的不適應，翻譯過程中不能形成有效的起始復合物，另一方面是由于低溫下細胞膜的破壞導致氨基酸等內容物的泄露。3、蛋白質合成嗜冷菌具有在0℃合成蛋白質的能力。這是由于其核糖體、酶類454、合成冷休克蛋白低溫微生物適應低溫的另一機制是合成冷休克蛋白將大腸桿菌從370C突然轉移到100C條件時細胞中會誘導合成一組冷休克蛋白，它們對低溫的生理適應過程中發揮著重要作用，檢測嗜冷酵母的冷休克反應，發現冷刺激后冷休克蛋白在很短時間內大量產生。耐冷菌由于生活在溫度波動的環境中，它們必須忍受溫度的快速降低，這與它們產生的冷休克蛋白是密切相關的。4、合成冷休克蛋白466、最大的驕傲于最大的自卑都表示心靈的最軟弱無力。——斯賓諾莎

7、自知之明是最難得的知識。——西班牙

8、勇氣通往天堂，怯懦通往地獄。——塞內加

9、有時候讀書是一種巧妙地避開思考的方法。——赫爾普斯

10、閱讀一切好書如同和過去最杰出的人談話。——笛卡兒Thankyou拯畏怖汾關爐烹霉躲渠早膘岸緬蘭輛坐蔬光膊列板哮瞥疹傻俘源拯割宜跟三叉神經痛-治療三叉神經痛-治療6、最大的驕傲于最大的自卑都表示心靈的最軟弱無力。——斯賓諾47發酵大題范圍1、紀律是管理關系的形式。——阿法納西耶夫2、改革如果不講紀律，就難以成功。3、道德行為訓練，不是通過語言影響，而是讓兒童練習良好道德行為，克服懶惰、輕率、不守紀律、頹廢等不良行為。4、學校沒有紀律便如磨房里沒有水。——夸美紐斯5、教導兒童服從真理、服從集體，養成兒童自覺的紀律性，這是兒童道德教育最重要的部分。——陳鶴琴發酵大題范圍發酵大題范圍1、紀律是管理關系的形式。——阿法納西耶夫2、改革如果不講紀律，就難以成功。3、道德行為訓練，不是通過語言影響，而是讓兒童練習良好道德行為，克服懶惰、輕率、不守紀律、頹廢等不良行為。4、學校沒有紀律便如磨房里沒有水。——夸美紐斯5、教導兒童服從真理、服從集體，養成兒童自覺的紀律性，這是兒童道德教育最重要的部分。——陳鶴琴參數檢測例：鳥苷生產在鳥苷發酵中，發現發酵到40小時后鳥苷合成速率下降，但糖耗速率并未下降，而且由于耗糖,使發酵過程pH下降，補入氨水增多。那么糖耗到哪里去了呢？于是進行以下一些測定與分析隨著新課程改革的不斷深入，歷史教學發生著巨大的變化，改變傳統的歷史教學模式，探索新的適合新課程理念的教學方法和手段，實現課堂教學的有效性，成為歷史教師們孜孜以求的目標。筆者經過了多年的新課程教學實踐，對歷史教學的方法進行了探索和嘗試，期間有困惑、失敗，也有收獲的喜悅，在諸多的教學方法的嘗試中，筆者認為情境教學是提高歷史教學有效性的重要途徑。所謂情境教學，是指從教學需要和學生的實際出發，教師有目的地引入或創設具有一定情緒色彩的、以形象為主體的生動具體的場景，以引起學生一定的態度體驗，從而幫助學生理解教材，并使學生的心理機能得到發展的教學方法。那么如何創設情境提高歷史教學的有效性？筆者從以下幾個方面進行了總結：一、利用史料有效創設問題情境雖然歷史教科書是獲得歷史知識和培養歷史思維的基礎性資源，但由于其空間的局限，教科書呈現的內容過于簡練，語言抽象，并且結論性的內容太多，致使教師和學生固守教科書中的結論，創新、質疑的精神就被扼殺了，三維目標中的過程與方法也難以體現。如何優化三維目標，實現課堂教學的有效性，照本宣科是不行的。因此，課堂教學要根據學生實際和內容需要通，通過呈現一些材料情境，設置有思維性的問題來引導學生閱讀、分析、質疑、解決問題，用已有的經驗，結合材料構建自己的歷史認識和歷史知識，真正做到“論從史出，史論結合”。使學生真正成為歷史探究的主體，使課堂成為學生探索歷史的場所，促成學生的開放性思維和創新能力，從而提高學生運用知識等能力。歷史上的史料非常豐富，歷史著作、碑文、報紙雜志、詩歌、小說、戲劇、民謠、圖片、遺址等。老師要善于挖掘，搜集和整理，以此來拓寬學生的知識面。教材里提供的史料，教師也要充分利用，也可以借鑒和引用一些高考試題里的材料題。但史料的運用一定要有所選擇，要典型，要與課堂教學緊密結合起來，既要注重質又要注重量。所選史料、所提問題必須符合客觀規律，并遵循由淺入深、由易到難、循序漸進的原則。在歷史教學中運用史料創設情境，不僅能體現歷史的真實性、生動性，還可以培養學生歷史思維，拓寬學生的歷史視野。但是在史料的選擇上要慎重，選擇的史料要典型，對所選的史料要甄別，不能斷章取義，主觀臆斷。這就要求教師平時多讀書、多思考、多研究，不斷提高自身的專業素養。二、通過直觀形象的手段再現歷史情境歷史是豐富多彩的，在歷史事件發生的過程中，歷史人物有著豐富的情感、復雜的心理、生動的語言等等。但在現在的歷史教科書中，這些生動的歷史場景只剩下干癟的軀殼，失去了它原有的生命力。要激發學生的學習興趣、要增強學生對歷史的感性認識、要提高學生對歷史問題的理性分析、要在更高程度上實現歷史教學的有效性，有必要通過直觀形象的手段，再現歷史現場歷史的豐富性、生動性。再現歷史情境的手段有很多種，例如用歷史圖片再現歷史情境，歷史圖片包括人物圖片、實物圖片及歷史地圖等。利用圖片創設情境，可以豐富學生的感性認識，把較復雜的問題簡明化，抽象的問題形象化，便于學生理解。多媒體是一種現代化的教學手段，可以呈現文字、圖片、音樂、動畫、視頻、電影等。用多媒體輔助教學能夠直觀“再現”歷史，可以圖文并茂、聲情兼備地的創設歷史情境，學生有身臨其境之感，如《抗日戰爭》中日軍暴行的視頻、古代的書法繪畫作品欣賞、鄧小平的“南巡”談話……都能通過多媒體手段將抽象變為具體，有效地將形象和思維融為一體。利用多媒體創設情境起著事半功倍的效果。但不管哪種直觀的教學手段都是服務與教學目的，教學的目的不是用這些豐富多彩的圖片資料和影像資料吸引學生，而是讓學生對情境中蘊含的歷史信息和問題進行思考和探究。所以在用多媒體進行教學時，教師要對所呈現的情境的表達方式、時間、結合情境所產生的歷史問題精心設計，啟發學生進入主動探求、積極思考的狀態，從而達到最佳的教學效果。同時還要注意不能讓學生成為觀眾，教師成為解說員不斷點擊鼠標，連續演示媒體，喧賓奪主，沒有時間搜集學生反饋的信息，學生也來不及對知識內容做出深入細致的思考，不能參與其中，這樣的教學就成了無效教學。三、用角色扮演體驗情境角色扮演是通過扮演歷史人物、模仿歷史人物的所思、所想、所行，營造出特定的歷史時空，創設出一種身臨其境的氛圍，讓學生充分參與教學、體驗歷史的方法。這種方法既可以讓學生把自己放置在特定的歷史氛圍中去把握歷史人物的思想和情感，又能夠拉近學生與歷史的距離，充分調動學生的積極性和參與性，從而在內心體驗所扮演的歷史人物的心態及當時的歷史狀況。學生參與了整個教學過程，有助于他們更好地理解過去，更深刻地記住歷史、認識歷史、理解歷史、感悟歷史。角色扮演并不是為了表演而表演，背背臺詞，表演前對歷史人物的認識，表演中與同學的合作，表演后的評價更加重要，所以這一方法最好配合討論法同時進行，有助于培養學生的語言智能和合作精神。角色扮演準備的過程相對要復雜一些，要收集資料，選演員、編劇、導演，設計場景到最后的表演、評價、總結，要發揮學生的主體性，教師不能包辦代辦，也不能袖手旁觀，要發揮其主導作用，給予資料查找、主題的確定方面的指導，以及表演后的評價。情境教學可以為學生創設良好的學習氛圍，有利于激發學生的學習興趣和動機，培養學生的實踐能力，培養學生的合作意識和創造能力，無疑是提高歷史教學有效性的重要途徑。0前言隨著時代的發展和改革開放的不斷深入，我國與世界各國的交往越來越頻繁，英語在出入境邊防檢查中發揮著越來越重要的作用。多年來，通過積極開展邊檢英語培訓，邊檢人員英語水平有了很大提高，但一線檢查人員的英語水平與新時期的執勤執法要求仍不相適應，特別是對邊防檢查中的許多專業詞匯不知如何翻譯。由于邊檢英語明顯區別于其他文體，其涉外敏感性和翻譯現狀決定了翻譯時需遵循語言等效，譯名統一和專業表達的原則。1邊檢英語翻譯的三大原則1.1語言等效原則1.2譯名統一原則當前，口岸交流活動日益頻繁，在邊防檢查領域仍存在著譯名不規范、不統一現象，對邊檢英語的語言等效翻譯產生了一定影響。一般來說，譯名統一原則力求“一名一譯”，而不是“一名多譯”。概念和術語的唯一性和單義性決定了其在目的語中的譯文應是唯一的，而不是多個譯本。以“邊防檢查站”翻譯為例，在兩種譯法“FrontierInspectionStation”和“ImmigrationInspectionStation”中，筆者認為后者為最佳譯法。原因如下：從語境上來說，“immigration”系中性詞，泛指出入國境人員和交通運輸工具的出入國邊境行為，能最大限度地實現了譯文等效；它還能與“inspection”搭配，符合英語表達習慣。前者譯法則不夠貼切，原因如下：“frontier”一詞的語氣和情感色彩都比較強調“國土、邊境”意義，容易讓人聯想到國家主權含義，具有一定的“threatening”（威脅性）。雖然邊檢機關曾對多個譯名進行過統一，但因語言習慣和約定俗成等原因，仍存在譯名翻譯和使用不統一、不規范的問題，給口岸對外交流帶來了不同程度的影響和困擾。1.3專業表達原則2邊檢英語翻譯三大原則之間的關系當翻譯原則之間出現沖突、一個對應詞翻譯無法滿足以上所有原則時，語言等效原則是最重要、最基本的原則，其他原則可以做出讓步和犧牲。如在涉及地名翻譯時，應堅持以語言等效為主、其他翻譯原則為輔，常采取音譯為主的譯法。以“藏南地區”為例，應音譯為“ZangnanArea”，或直譯為“SouthTibet”。絕不能譯成印度或西方國家的慣用語“ArunachalPradesh”（阿魯納恰爾邦），它是英國殖民時期的舊稱，象征英印的版圖。再如“口岸開放政策”一詞，英語里沒有“openpolicy”這種固定表達方式，但不能簡單地對譯為“portopen-doorpolicy”。這種譯法容易讓人聯想起近代的“門戶開放政策”。應從我國獨立自主的外交政策出發，將之直譯為“openpolicy”（opening-uppolicy），不能因為一味地迎合西方讀者的語言習慣，而犧牲譯文的語言等效含義。3結束語邊檢英語是出入境邊防檢查工作必不可少的工具，是邊檢人員與服務對象溝通交流的重要橋梁和紐帶。由于培訓機制和個人基礎參差不齊等原因，部分一線檢查人員英語運用和翻譯能力尚未達到當前對外開放口岸執勤執法工作的需要，也不能順利完成與外籍服務對象的溝通和交流。因此，在今后的英語學習培訓中，筆者認為可充分考慮運用先進信息化技術設備（網路學習室、投影儀、聲像資料等），引入計算機輔助教學、多媒體課件應用等，把文字、聲音、圖像等多種信息融合于一體，全面培養邊檢人員的學習意識和聽、說、讀、寫，尤其是翻譯能力。同時，建立英語培訓長效機制，通過開設“英語角”、每周選定一天作為“英語日”和開展邊檢英語翻譯競賽等形式，營造濃厚的語言學習氛圍，提高人員英語學習的趣味性和有效性，推動整體英語語言能力和翻譯水平的提升，強化邊檢人員的服務素質與基礎，為駐地口岸開放和經濟發展做出貢獻。【發酵大題范圍1、紀律是管理關系的形式。——阿法納西耶夫發酵大48參數檢測參數檢測49例：鳥苷生產在鳥苷發酵中，發現發酵到40小時后鳥苷合成速率下降，但糖耗速率并未下降，而且由于耗糖,使發酵過程pH下降，補入氨水增多。那么糖耗到哪里去了呢？于是進行以下一些測定與分析例：鳥苷生產在鳥苷發酵中，發現發酵到40小時后鳥苷合成速率下50什么因素導致pH下降？1、有機酸的積累有機酸積累pH下降補加氨水在正常代謝情況下，細胞通過EMP途徑和TCA循環的過程是為細胞合成提供前體和能量的，按照細胞經濟學的原則不會供過于求，即不會出現有機酸的積累若發酵后期有機酸積累會引起加入的[NH4+]積累，相應出現產苷速率下降。——代謝不正常什么因素導致pH下降？1、有機酸的積累51測定以下中間物發酵后期丙酮酸積累測定以下中間物發酵后期丙酮酸積累522、氨基酸的積累在有機酸分析的基礎上進一步通過HPLC測定發酵過程中不同時間發酵液中氨基酸，結果發現總氨基酸積累并且其積累晚于有機酸和[NH4+]積累。2、氨基酸的積累53氨基酸成分分析表明，初始發酵液中谷氨酸濃度比較高，其它氨基酸濃度都較低，隨著發酵過程的進行谷氨酸很快被用于菌體合成，在8小時之前已經降到很低水平，并始終維持在低水平，而在48小時左右丙氨酸開始出現明顯的積累，發酵液中積累量達到初始量的12.6倍之多，其它十余種氨基酸濃度則變化不大，并且在整個發酵過程中都維持在較低水平。因此，丙氨酸濃度變化可能是導致代謝流遷移所致。氨基酸成分分析表明，初始發酵液中谷氨酸濃度比較高，其它氨基酸543、分析原因發酵過程中積累的氨基酸主要是丙氨酸，而丙氨酸的合成可以直接由丙酮酸轉化而來，因此可以推斷由于EMP途徑代謝流的增加造成了丙酮酸的積累，丙酮酸隨后轉化為丙氨酸丙氨酸本身又會對谷氨酸合成酶（GS）造成反饋抑制和阻遏，使產苷速率降低。3、分析原因55惡性循環激活磷酸果糖激酶丙酮酸積累氨水補加增加[NH4+]積累抑制GS抑制TCA循環丙酮酸積累EMP流量增加丙氨酸積累惡性循環激活磷酸果糖激酶丙酮酸積累氨56（二）代謝流遷移的酶學證明糖代謝途徑關鍵酶糖酵解途徑（EMP）在糖酵解途徑中有兩個不可逆的步驟的酶：磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶磷酸果糖激酶的時序分析（二）代謝流遷移的酶學證明5712小時時由于生長處于對數生長初期，代謝活力較低，所以PFK的活力相對較低。24小時后隨著發酵過程進入平穩產物形成期和細胞生長期，磷酸果糖激酶的活力也基本保持平穩。但是到40小時以后，鳥苷形成速率減慢甚至停止，同時觀察到氨基酸和有機酸積累，PFK相對酶活增加，這表明此時通過EMP途徑的糖代謝通量已有了明顯的增加。12小時時由于生長處于對數生長初期，代謝活力較低，所以PFK58丙酮酸激酶時序分析丙酮酸激酶時序分析59丙酮酸激酶沒有表現出明顯的酶活增加，而是在24小時就基本上達到其最大值，隨后維持在恒定的水平，這表明在糖代謝時EMP途徑代謝流增加中丙酮酸激酶所起的作用不大，不是造成代謝流遷移的主要因素磷酸戊糖途徑（HMP）關鍵酶磷酸戊糖途徑中主要的限速酶是6－磷酸葡萄糖脫氫酶，該酶催化6－磷酸葡萄糖脫氫生成6－磷酸葡萄糖酸內酯。丙酮酸激酶沒有表現出明顯的酶活增加，而是在24小時就基本上達606－磷酸葡萄糖脫氫酶時序分析由圖可以看到，早期6－磷酸葡萄糖脫氫酶活力很高，這可能是前期菌體合成代謝比較活躍，通過HMP途徑合成用于細胞成分的核酸等組成物質；隨后基本不變，從而保持EMP和HMP途徑通量的平衡，此時穩定持續的形成產物；但是到40小時后，6－磷酸葡萄糖脫氫酶已經表現出明顯的下降趨勢，并且隨著后期發酵過程的進行而持續下降。根據物料平衡原則，有可能糖代謝在HMP途徑通量下降而EMP途徑通量增加。6－磷酸葡萄糖脫氫酶時序分析由圖可以看到，早期6－磷酸葡萄糖61三羧酸(TCA)循環的關鍵酶三羧酸循環是“消耗”丙酮酸的途徑，三羧酸流量大丙酮酸不會積累。三羧酸循環中的關鍵酶為檸檬酸合成酶，其催化乙酰輔酶A與草酰乙酸縮合形成檸檬酸，是三羧酸循環的啟動步驟，也是三羧酸循環中的主要控制點，由檸檬酸合成酶所催化的反應是三羧酸循環中的第一個限速步驟。三羧酸(TCA)循環的關鍵酶三羧酸循環是“消耗”丙酮酸的途徑62檸檬酸合成酶時序分析檸檬酸合成酶時序分析63從圖可以看到，TCA循環的關鍵酶檸檬酸合成酶在整個發酵過程中，尤其是在后期產苷速率下降的過程中都維持比較平穩的水平，這表明在發酵過程后期所發生的代謝流遷移時，TCA循環的通量并沒有發生明顯的增加。即代謝流遷移發生在EMP和HMP之間，主要是由于EMP和HMP途徑之間的分配平衡被打破所造成的。EMP途徑代謝流的增加造成了一種代謝流的溢流現象。從圖可以看到，TCA循環的關鍵酶檸檬酸合成酶在整個發酵過程中64丙氨酸脫氫酶的時序分析丙氨酸脫氫酶的時序分析65在發酵中后期，丙氨酸脫氫酶活力出現了明顯的增加。丙氨酸脫氫酶催化由丙酮酸生成丙氨酸，該酶活性增加與丙酮酸和丙氨酸的時序增加相吻合，這些數據表明代謝流的溢流現象發生在檸檬酸合成酶之前的丙酮酸節點，通過丙氨酸脫氫酶生成丙氨酸，從而緩解了EMP途徑代謝流增加造成的代謝不平衡。結果加入EMP途徑的抑制劑，克服了代謝流遷移的問題，提高了鳥苷的產量在發酵中后期，丙氨酸脫氫酶活力出現了明顯的增加。丙氨酸脫氫酶66基因工程菌基因工程菌67（三）基因不穩定性生產的目標是得到最大量的外源蛋白，但是大量外源蛋白的形成對宿主細胞是有損害的，通常是致死的，失去制造外源蛋白的能力的細胞一般生長得快得多，從而能替代有生產能力的菌株，這就導致基因的不穩定性。基因的不穩定性原因：分離丟失結構不穩定性宿主細胞調節突變（三）基因不穩定性生產的目標是得到最大量的外源蛋白，但是大量681、分離丟失

指工程菌分裂時出現一定比例不含質粒子代菌的現象。為什么會出現質粒丟失呢？質粒可分為高拷貝質粒（>20拷貝/細胞）和低拷貝質粒（有時低到每個細胞一至二個拷貝）。低拷貝質粒有專門的機制保證在子代細胞中有相等的分配，高拷貝質粒通常很少遵循二分法分配到子代細胞。對于高拷貝質粒，絕大多數子細胞接受一些質粒，也有可能有的細胞沒有接受質粒，出現質粒丟失。雖然形成無質粒細胞的可能性是低的（每百萬細胞分裂中一個）。1、分離丟失指工程菌分裂時出現一定比例不含質粒子代菌的現象69在大的反應器中含有非常多的細胞，總會存在無質粒細胞，例如1000L發酵液，每毫升有109個細胞，總共就有1015個細胞，那么在這個反應器中就含有109個無質粒細胞。質粒的分離丟失受許多環境因素影響，如溶氧、溫度、培養基組成和恒化器中的稀釋速率。許多質粒也會形成多聚體，它是相同質粒附著在一起形成一個單位。在大的反應器中含有非常多的細胞，總會存在無質粒細胞，例如1070分離丟失示意圖分離丟失示意圖712、質粒結構不穩定性

指外源基因從質粒上丟失或堿基重排、缺失所致工程菌性能的改變。如果質粒發生突變，仍保留了抗生素抗性基因，但不合成外源蛋白，那么這些突變株仍能在含有抗生素的培養基中生長。而且由于不合成外源蛋白，生長得比原來的工程菌更快，使得在這種培養物中帶有突變質粒的菌占統治地位，這種培養情況就是結構不穩定性。2、質粒結構不穩定性指外源基因從質粒上丟失或堿基重排、缺失723、宿主細胞突變

宿主細胞的突變也會造成生產能力的下降。這些突變通常改變細胞調節，結果減少目標蛋白的合成。例如，控制外源蛋白表達的啟動子，利用宿主細胞的啟動子，如果宿主細胞啟動子的改變，將大大改變質粒編碼蛋白的生產水平。乳糖操縱子是常用是操縱子，通過加入乳糖或它的結構類似物（如IPTG）來啟動表達，如果乳糖操縱子編碼半乳糖苷透酶的基因發生突變就會阻止乳糖或乳糖的結構類似物進入細胞，從而不能啟動細胞的表達。3、宿主細胞突變宿主細胞的突變也會造成生產能力的下降。這些734、生長速率占優勢的不穩定性所有這三種因素的關鍵是變異了的宿主載體系統和原宿主-載體系統的生長速率不同。如果變異了的宿主載體系統比原來的宿主-載體系統有生長優勢，那么變異了的系統將最終占優勢，基因不穩定性就出現。

（四）表達的誘導基因工程菌的產物表達需要誘導，誘因主要有：溫度誘導、乳糖或乳糖結構類似物誘導、氧饑餓誘導、葡萄糖饑餓誘導、甲醇誘導等。4、生長速率占優勢的不穩定性所有這三種因素的關鍵是變異了的宿74提高質粒穩定性的方法

1、兩階段培養法：第一階段使菌體生長至一定密度，第二階段誘導外源基因的表達。在培養基中加入選擇性壓力如抗生素等，以抑制質粒丟失菌的生長。2、通過控制環境參數（溫度、PH、培養基組分和溶解氧濃度），調節比生長速率，使工程菌生長具有優勢。有些含質粒的菌對發酵環境的改變比不含質粒的菌反應慢，因而間歇改變培養條件以改變這兩種菌的比生長速率，可以改善質粒的穩定性。提高質粒穩定性的方法75染菌染菌763、不同時間染菌對發酵的影響污染時間是指用無菌檢測方法確準的污染時間，不是雜菌竄入培養液的時間。雜菌進入培養液后，需有足夠的生長、繁殖的時間才能顯現出來，顯現的時間又與污染菌量有關。污染的菌量多，顯現染菌所需的時間就短，污染菌量少，顯現染菌的時間就長。3、不同時間染菌對發酵的影響污染時間是指用無菌檢測方法確準的77（1）種子培養期染菌由于接種量較小，生產菌生長一開始不占優勢，而且培養液中幾乎沒有抗生素（產物）或只有很少抗生素（產物）。因而它防御雜菌能力低，容易污染雜菌。如在此階段染菌，應將培養液全部廢棄。（1）種子培養期染菌由于接種量較小，生產菌生長一開始不占優勢78（2）發酵前期染菌發酵前期最