項目三：光學分析-紫外可見分光光度法分析任務2鄰二氮菲分光光度法測定微量鐵項目三：光學分析-紫外可見分光光度法分析任務2鄰二氮菲1

鄰二氮菲分光光度法測定微量鐵是屬于可見分光光度法測定無機離子的范疇。.本任務主要是測水樣中微量鐵。通過方法比較和本地自來水公司提供的含鐵量數據，選擇紫外可見分光光度方法。任務分析：鄰二氮菲分光光度法測定微量鐵是屬于可見分光光度法2任務實施（1）條件選擇1、繪制光吸收曲線，確定工作波長

取兩個50mL干凈比色管；移取10.00μgmL-1鐵標準溶液5.00mL于其中一個50mL容量瓶中，然后在兩比色管中各加入1mL100gL-1鹽酸羥胺溶液，搖勻。放置2min后，各加入2ml1.5g·L-1鄰二氮菲溶液，5mL醋酸鈉（1.0mol.L-1）溶液，用蒸餾水稀至刻線搖勻。用2cm吸收池，以試劑空白為參比，在440～540nm間，每隔10nm測量一次吸光度。在峰值附近每間隔5nm測量一次。任務實施（1）條件選擇1、繪制光吸收曲線，確定工作波長3任務實施（1）條件選擇2、顯色劑用量的選擇

取6只潔凈的50mL容量瓶，各加入10.00μg·mL-1鐵標準溶液5.00mL，1mL100g·L-1鹽酸羥胺溶液，搖勻。分別加入0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0mL1.5g·L-1鄰二氮菲，5mL醋酸鈉溶液，用蒸餾水稀至標線，搖勻。用2cm吸收池，以試劑空白溶液為參比溶液，在選定的波長下測定吸光度。任務實施（1）條件選擇2、顯色劑用量的選擇取64任務實施（1）條件選擇3、溶液酸度的選擇

在6只潔凈的50mL容量瓶中各加入10.00μg·mL-1鐵標準溶液5.00mL，1mL100g·L-1鹽酸羥胺溶液，搖勻。再分別加入2mL1.5g·L-1鄰二氮菲溶液，搖勻。用吸量管分別加入1mol·L-1NaOH溶液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL，用蒸餾水稀釋至標線，搖勻。用精密pH試紙（或酸度計）測定各溶液的pH值后，用2cm吸收池，以試劑空白為參比溶液，在選定波長下，測定各溶液吸光度。任務實施（1）條件選擇3、溶液酸度的選擇在6只潔5任務實施（1）條件選擇(4)有色配合物穩定性試驗取兩個潔凈的容量瓶，用步驟(3)方法配制鐵-鄰二氮菲有色溶液和試劑空白溶液，放置約2min，立即用2cm吸收池，以試劑空白溶液為參比溶液，在選定的波長下測定吸光度。以后隔10min、20min、30min、60min、120min測定一次吸光度并記錄吸光度和時間。任務實施（1）條件選擇(4)有色配合物穩定性試驗6任務實施（2）測定可見分光光度法測鐵操作步驟：1、配制1.000mg·mL-1鐵標準貯備溶液，再將其稀釋至10.0μg·mL-1鐵標準操作溶液。2、分別配制100g·L-1鹽酸羥胺溶液100mL、1.5g·L-1鄰二氮菲溶液100mL、1.0mol·L-1醋酸鈉溶液100mL。3、準備8個潔凈的50mL比色管；4、在6支比色管中各加入10.0μg·mL-1鐵標準溶液0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL；在另2支比色管中分別加入5ml未知試液。5、加入1mL100g·L-1鹽酸羥胺溶液，再分別加入2mL1.5g·L-1鄰二氮菲，5mL1.0mol·L-1醋酸鈉溶液，用蒸餾水稀釋至標線，搖勻；6、用2cm吸收池，以試劑空白為參比溶液，在510nm下，測定并記錄各溶液吸光度。任務實施（2）測定可見分光光度法測鐵操作步驟：2、分別配制7實訓過程思考在鐵標準液和試液中加入鹽酸羥胺溶液、鄰二氮菲溶液、醋酸鈉溶液有何現象產生？它們各自的作用是什么？為什么選擇試劑空白？其作用是什么？工作波長為什么選擇為510nm？在配制溶液的時候，未知試液與標準溶液同時配制的目的是什么?實訓過程思考在鐵標準液和試液中加入鹽酸羥胺溶液、鄰二氮菲8數據處理問題：如何定量？利用光吸收定律A=εbc直接計算已知：εFe=1.1×104,b=2cm，λ=510nm請同學們根據公式計算出試樣中鐵的濃度該水試樣中鐵的準確濃度為10.0μg·mL-1。數據處理問題：如何定量？利用光吸收定律A=εbc直接計算9利用一個標樣的含量進行比較計算Cx=AxCS/Ax比較法:特點是操作簡單，適用于個別樣品的測定，要求所配制標樣的濃度與試樣濃度相當。結果處理利用一個標樣的含量進行比較計算Cx=AxCS/Ax比較法:特10由公式A=εbc，在測量條件一致的條件下(λ、b不變），吸光度A與濃度c呈正比關系，若以A為縱坐標，以c為橫坐標，可得一條直線利用繪制工作曲線進行計算設想如果橫坐標c的濃度已知,則通過測量就可知道與c一一對應的縱坐標A值,如:利用工作曲線計算試樣中被測組分的含量。計算公式：ρ試=V×ρ標/V移，結果處理由公式A=εbc，在測量條件一致的條件下(λ、b不變），吸11請同學們根據所測鐵標準溶液以A為縱坐標，c為橫坐標，繪制相應工作曲線，并根據曲線計算試樣中鐵的濃度，并對各種結果進行比較。不同濃度標準溶液在配制時存在偶然誤差，利用繪制的工作曲線可在一定程度上消除這種誤差繪制工作曲線的隨意性會導致線性不好,所得數據計算結果的差別也就大，結果的相對誤差也無法控制。結果處理請同學們根據所測鐵標準溶液以A為縱坐標，c為橫坐標，繪制相應121、顯色劑用量確定方法配制一系列被測元素濃度相同不同顯色劑用量的溶液，分別測其吸光度，作A-CR曲線，找出曲線平臺部分，選擇一合適用量即可。

吸光度與顯色劑濃度的關系曲線

知識鏈接--顯色條件的選擇

1、顯色劑用量確定方法配制一系列被測元素濃度相同不同顯色劑用132、溶液酸度確定方法選擇合適的酸度，可以在不同pH值緩沖溶液中，加入等量的被測離子和顯色劑，測其吸光度，作A-pH曲線，由曲線上選擇合適的pH范圍。吸光度A與pH關系曲線

知識鏈接

--顯色條件的選擇

2、溶液酸度確定方法選擇合適的酸度，可以在不同pH值緩沖溶液14繪制A對t的曲線，選擇吸光度平坦的部分確定最佳的顯色時間。干擾的消除3、穩定性實驗改變酸度、氧化劑、掩蔽劑消除；改變入射波長；改變合適的參比溶液。知識鏈接--顯色條件的選擇

繪制A對t的曲線，選擇吸光度平坦的部分確定最佳的顯色時間。干15大多數顯色反應是在常溫下進行的，有些反應必須在較高溫度下。繪制工作曲線和進行樣品測定時應該使溶液溫度保持一致。4、顯色溫度5、溶劑有機溶劑常常可以降低有色物質的離解度，增加有色物質的溶解，從而提高了測定的靈敏度知識鏈接--顯色條件的選擇

大多數顯色反應是在常溫下進行的，有些反應必須在較高溫度下。繪16入射光波長一般情況下，應選擇被測物質的最大吸收波長的光為入射光。干擾物質存在時，依據“吸收最大，干擾最小”。選擇方法：繪制光的吸收曲線確定最佳波長。知識鏈接—測量條件的選擇

入射光波長一般情況下，應選擇被測物質的最大吸收波長的光為入射17知識拓展利用Excel做工作曲線（1）將數據整理好輸入Excel，并選取完成的數據區，并點擊圖表向導，如圖3-21所示。

知識拓展利用Excel做工作曲線18知識拓展（2）點擊圖表向導后會運行圖表向導（或者用插入-圖表也可），先在圖表類型中選“XY散點圖”，并選了圖表類型的“散點圖”。知識拓展（2）點擊圖表向導后會運行圖表向導（或者用插入-圖表19知識拓展（3）點擊“下一步”，出現如圖3-33界面。如果是輸入如本例橫向列表的就不用更改，如果是縱向列表就改選“列”。知識拓展（3）點擊“下一步”，出現如圖3-33界面。如果是輸20知識拓展（4）如果發現圖不理想，就要仔細察看是否數據區選擇有問題，如果有誤，可以點擊“系列”來更改。知識拓展（4）如果發現圖不理想，就要仔細察看是否數據區選擇有21知識拓展（5）如果是X值錯了就點擊它文本框右邊的小圖標，結果如圖。

知識拓展（5）如果是X值錯了就點擊它文本框右邊的小圖標，結果22知識拓展（6）然后，在表上選取正確的數據區域。然后點擊“下一步”出現圖表選項界面，調整選項，以滿足自己想要的效果。（7）點擊“下一步”，現在一張帶標準值的完整散點圖就已經完成，

知識拓展（6）然后，在表上選取正確的數據區域。然后點擊“下一23知識拓展（8）完成了散點圖，現在需要根據數據進行回歸分析，計算回歸方程，繪制出標準曲線。先點擊圖上的標準值點，然后按右鍵，點擊“添加趨勢線”。由于本例是線性關系，在類型中選“線性”。（9）點擊“確定”，標準曲線就回歸并畫好了。知識拓展（8）完成了散點圖，現在需要根據數據進行回歸分析，計24知識拓展（10）點擊趨勢線（也就是我們說的標準曲線）然后按右鍵，選趨勢線格式，（11）在顯示公式和顯示R平方值（直線相關系數）前點一下，勾上。再點確定。得到如圖。知識拓展（10）點擊趨勢線（也就是我們說的標準曲線）然后按右25曲線繪制不當的示例示例1：坐標比例不合適曲線繪制不當的示例示例1：坐標比例不合適26示例2：坐標軸上數據的有效數字不正確。曲線繪制不當的示例示例2：坐標軸上數據的有效數字不正確。曲線繪制不當的示例27示例3：工作曲線應為一條直線，不是折線或曲線；

工作曲線的繪制時,要注意直線上下兩側的實驗點數應相當。曲線繪制不當的示例示例3：工作曲線應為一條直線，不是折線或曲線；曲線繪制不當的28在測定樣品時，為保證顯色條件一致，操作時試樣與標樣同時顯色，再在相同測量條件下測量試樣與標樣溶液的吸光度使用工作曲線法的要點為保證測定準確度，標樣與試樣溶液的組成應保持一致，待測試液的濃度應在工作曲線線性范圍內，最好在工作曲線中部。工作曲線應定期校準，如果實驗條件變動（如更換標準溶液、所用試劑重新配制、儀器經過修理、更換光源等情況），工作曲線應重新繪制。如果實驗條件不變，那么每次測量只需帶一個標樣，校驗一下實驗條件是否符合，就可直接用此工作曲線測量試樣的含量。在測定樣品時，為保證顯色條件一致，操作時試樣與標樣同時顯色，29任務思考1、除了任務中列出的條件實驗，你認為還有哪些條件是要注意的？通過實驗，你認為任務中列出的條件實驗你認為哪個是可以不予考慮的？2、工作曲線法不僅僅應用在本任務中，在前述哪個任務中我們也應用到了工作曲線法做定量分析？以后也會用到你能融會貫通舉一反三嗎？任務思考1、除了任務中列出的條件實驗，你認為還有哪些條件是要30項目三：光學分析-紫外可見分光光度法分析任務2鄰二氮菲分光光度法測定微量鐵項目三：光學分析-紫外可見分光光度法分析任務2鄰二氮菲31

鄰二氮菲分光光度法測定微量鐵是屬于可見分光光度法測定無機離子的范疇。.本任務主要是測水樣中微量鐵。通過方法比較和本地自來水公司提供的含鐵量數據，選擇紫外可見分光光度方法。任務分析：鄰二氮菲分光光度法測定微量鐵是屬于可見分光光度法32任務實施（1）條件選擇1、繪制光吸收曲線，確定工作波長

取兩個50mL干凈比色管；移取10.00μgmL-1鐵標準溶液5.00mL于其中一個50mL容量瓶中，然后在兩比色管中各加入1mL100gL-1鹽酸羥胺溶液，搖勻。放置2min后，各加入2ml1.5g·L-1鄰二氮菲溶液，5mL醋酸鈉（1.0mol.L-1）溶液，用蒸餾水稀至刻線搖勻。用2cm吸收池，以試劑空白為參比，在440～540nm間，每隔10nm測量一次吸光度。在峰值附近每間隔5nm測量一次。任務實施（1）條件選擇1、繪制光吸收曲線，確定工作波長33任務實施（1）條件選擇2、顯色劑用量的選擇

取6只潔凈的50mL容量瓶，各加入10.00μg·mL-1鐵標準溶液5.00mL，1mL100g·L-1鹽酸羥胺溶液，搖勻。分別加入0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0mL1.5g·L-1鄰二氮菲，5mL醋酸鈉溶液，用蒸餾水稀至標線，搖勻。用2cm吸收池，以試劑空白溶液為參比溶液，在選定的波長下測定吸光度。任務實施（1）條件選擇2、顯色劑用量的選擇取634任務實施（1）條件選擇3、溶液酸度的選擇

在6只潔凈的50mL容量瓶中各加入10.00μg·mL-1鐵標準溶液5.00mL，1mL100g·L-1鹽酸羥胺溶液，搖勻。再分別加入2mL1.5g·L-1鄰二氮菲溶液，搖勻。用吸量管分別加入1mol·L-1NaOH溶液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL，用蒸餾水稀釋至標線，搖勻。用精密pH試紙（或酸度計）測定各溶液的pH值后，用2cm吸收池，以試劑空白為參比溶液，在選定波長下，測定各溶液吸光度。任務實施（1）條件選擇3、溶液酸度的選擇在6只潔35任務實施（1）條件選擇(4)有色配合物穩定性試驗取兩個潔凈的容量瓶，用步驟(3)方法配制鐵-鄰二氮菲有色溶液和試劑空白溶液，放置約2min，立即用2cm吸收池，以試劑空白溶液為參比溶液，在選定的波長下測定吸光度。以后隔10min、20min、30min、60min、120min測定一次吸光度并記錄吸光度和時間。任務實施（1）條件選擇(4)有色配合物穩定性試驗36任務實施（2）測定可見分光光度法測鐵操作步驟：1、配制1.000mg·mL-1鐵標準貯備溶液，再將其稀釋至10.0μg·mL-1鐵標準操作溶液。2、分別配制100g·L-1鹽酸羥胺溶液100mL、1.5g·L-1鄰二氮菲溶液100mL、1.0mol·L-1醋酸鈉溶液100mL。3、準備8個潔凈的50mL比色管；4、在6支比色管中各加入10.0μg·mL-1鐵標準溶液0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mL；在另2支比色管中分別加入5ml未知試液。5、加入1mL100g·L-1鹽酸羥胺溶液，再分別加入2mL1.5g·L-1鄰二氮菲，5mL1.0mol·L-1醋酸鈉溶液，用蒸餾水稀釋至標線，搖勻；6、用2cm吸收池，以試劑空白為參比溶液，在510nm下，測定并記錄各溶液吸光度。任務實施（2）測定可見分光光度法測鐵操作步驟：2、分別配制37實訓過程思考在鐵標準液和試液中加入鹽酸羥胺溶液、鄰二氮菲溶液、醋酸鈉溶液有何現象產生？它們各自的作用是什么？為什么選擇試劑空白？其作用是什么？工作波長為什么選擇為510nm？在配制溶液的時候，未知試液與標準溶液同時配制的目的是什么?實訓過程思考在鐵標準液和試液中加入鹽酸羥胺溶液、鄰二氮菲38數據處理問題：如何定量？利用光吸收定律A=εbc直接計算已知：εFe=1.1×104,b=2cm，λ=510nm請同學們根據公式計算出試樣中鐵的濃度該水試樣中鐵的準確濃度為10.0μg·mL-1。數據處理問題：如何定量？利用光吸收定律A=εbc直接計算39利用一個標樣的含量進行比較計算Cx=AxCS/Ax比較法:特點是操作簡單，適用于個別樣品的測定，要求所配制標樣的濃度與試樣濃度相當。結果處理利用一個標樣的含量進行比較計算Cx=AxCS/Ax比較法:特40由公式A=εbc，在測量條件一致的條件下(λ、b不變），吸光度A與濃度c呈正比關系，若以A為縱坐標，以c為橫坐標，可得一條直線利用繪制工作曲線進行計算設想如果橫坐標c的濃度已知,則通過測量就可知道與c一一對應的縱坐標A值,如:利用工作曲線計算試樣中被測組分的含量。計算公式：ρ試=V×ρ標/V移，結果處理由公式A=εbc，在測量條件一致的條件下(λ、b不變），吸41請同學們根據所測鐵標準溶液以A為縱坐標，c為橫坐標，繪制相應工作曲線，并根據曲線計算試樣中鐵的濃度，并對各種結果進行比較。不同濃度標準溶液在配制時存在偶然誤差，利用繪制的工作曲線可在一定程度上消除這種誤差繪制工作曲線的隨意性會導致線性不好,所得數據計算結果的差別也就大，結果的相對誤差也無法控制。結果處理請同學們根據所測鐵標準溶液以A為縱坐標，c為橫坐標，繪制相應421、顯色劑用量確定方法配制一系列被測元素濃度相同不同顯色劑用量的溶液，分別測其吸光度，作A-CR曲線，找出曲線平臺部分，選擇一合適用量即可。

吸光度與顯色劑濃度的關系曲線

知識鏈接--顯色條件的選擇

1、顯色劑用量確定方法配制一系列被測元素濃度相同不同顯色劑用432、溶液酸度確定方法選擇合適的酸度，可以在不同pH值緩沖溶液中，加入等量的被測離子和顯色劑，測其吸光度，作A-pH曲線，由曲線上選擇合適的pH范圍。吸光度A與pH關系曲線

知識鏈接

--顯色條件的選擇

2、溶液酸度確定方法選擇合適的酸度，可以在不同pH值緩沖溶液44繪制A對t的曲線，選擇吸光度平坦的部分確定最佳的顯色時間。干擾的消除3、穩定性實驗改變酸度、氧化劑、掩蔽劑消除；改變入射波長；改變合適的參比溶液。知識鏈接--顯色條件的選擇

繪制A對t的曲線，選擇吸光度平坦的部分確定最佳的顯色時間。干45大多數顯色反應是在常溫下進行的，有些反應必須在較高溫度下。繪制工作曲線和進行樣品測定時應該使溶液溫度保持一致。4、顯色溫度5、溶劑有機溶劑常常可以降低有色物質的離解度，增加有色物質的溶解，從而提高了測定的靈敏度知識鏈接--顯色條件的選擇

大多數顯色反應是在常溫下進行的，有些反應必須在較高溫度下。繪46入射光波長一般情況下，應選擇被測物質的最大吸收波長的光為入射光。干擾物質存在時，依據“吸收最大，干擾最小”。選擇方法：繪制光的吸收曲線確定最佳波長。知識鏈接—測量條件的選擇

入射光波長一般情況下，應選擇被測物質的最大吸收波長的光為入射47知識拓展利用Excel做工作曲線（1）將數據整理好輸入Excel，并選取完成的數據區，并點擊圖表向導，如圖3-21所示。

知識拓展利用Excel做工作曲線48知識拓展（2）點擊圖表向導后會運行圖表向導（或者用插入-圖表也可），先在圖表類型中選“XY散點圖”，并選了圖表類型的“散點圖”。知識拓展（2）點擊圖表向導后會運行圖表向導（或者用插入-圖表49知識拓展（3）點擊“下一步”，出現如圖3-33界面。如果是輸入如本例橫向列表的就不用更改，如果是縱向列表就改選“列”。知識拓展（3）點擊“下一步”，出現如圖3-33界面。如果是輸50知識拓展（4）如果發現圖不理想，就要仔細察看是否數據區選擇有問題，如果有誤，可以點擊“系列”來更改。知識拓展（4）如果發現圖不理想，就要仔細察看是否數據區選擇有51知識拓展（5）如果是X值錯了就點擊它文本框右邊的小圖標，結果如圖。

知識拓展（5）如果是X值錯了就點擊它文本框右邊的小圖標，結果52知識拓展（6）然后，在表上選取正確的數據區域。然后點擊“下一步”出現圖表選項界面，調整選項，以滿足自己想要的效果。（7）點擊“下一步”，現在一張帶標準值的完整散點圖就已經完成，

知識拓展（6）然后，在表上選取正確的數據區