分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)理論考試(總7頁(yè))--本頁(yè)僅作為文檔封面，使用時(shí)請(qǐng)直接刪除即可內(nèi)頁(yè)可以根據(jù)需求調(diào)整合適字體及大小--PAGE2013學(xué)年第二學(xué)期分子生物實(shí)驗(yàn)考試題庫(kù)1、PCR原理是什么？答：PCR技術(shù)是一種在體外快速擴(kuò)增特定基因或DNA序列的方法。它的特異性是由兩個(gè)人工合成的引物序列決定。引物就是與待擴(kuò)增DNA片段兩側(cè)互補(bǔ)的寡核苷酸。雙鏈DNA是在臨近沸點(diǎn)的溫度下加熱時(shí)便會(huì)分離成兩條單鏈DNA分子（變性），兩引物分別與兩條DNA聚合酶以單鏈DNA45'→3'方向復(fù)制互補(bǔ)DNA種熱變性→復(fù)性→延伸的過(guò)程不斷循環(huán)重復(fù)，前一個(gè)循環(huán)的產(chǎn)物DNADNADNADNA2^n2、PCR一般體系應(yīng)加入哪些試劑？答：10*PCR（含Mg+）、模板DNAdNTP、一對(duì)引物、耐熱Taq合酶。3、PCR防止其它DNA污染，應(yīng)注意哪些問(wèn)題？答：標(biāo)本放置時(shí)密封要嚴(yán)避免溢于容器外，容器要清潔避免造成相互間交叉污染；移液器使用要規(guī)范避免污標(biāo)本間污染;無(wú)菌工作臺(tái)操作，避免氣體中有雜菌。4、影響PCR產(chǎn)物產(chǎn)量的因素主要有哪些？答：引物、酶的種類及濃度、dNTP的質(zhì)量（優(yōu)劣）與濃度、模板核酸的量與純化程度、Mg2+濃度、溫度與時(shí)間、循環(huán)次數(shù)。5、引物設(shè)計(jì)應(yīng)注意哪些問(wèn)題？20bp200-500為宜；③引物堿基的中G+C40-60%為宜，G+C3'3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。6、簡(jiǎn)述克隆某一原核生物基因片段一般操作步驟？答：克隆某一原核生物基因片段是可用PCR備好實(shí)驗(yàn)材料大體為：需擴(kuò)增的模板DNA、DNAdNTPPCR3DNA板雙螺旋鏈解離為單鏈，第二步：退火：當(dāng)溫度突然降低時(shí)。由于模板DNADNA物結(jié)合到模板上DNADNADNA3擴(kuò)增的目的片段。7、什么是質(zhì)粒質(zhì)粒的基本性質(zhì)有哪些答：a(DNA)分子。現(xiàn)在習(xí)慣上用來(lái)專指細(xì)菌、酵母菌和放線菌等生物中染色體以外的DNAb8、質(zhì)粒抽提實(shí)驗(yàn)中溶液I、II、III各有什么作用？I,EDTA,TrisClDNA;EDTA的作用是絡(luò)和掉Mg2二價(jià)金屬離子,防止DNA;TrisCl菌作用的最適PHII:由SDSNaOH.SDS;NaOH(pH>12)的作用是破壞氫鍵,使DNAIII:由KAc與HAc組成,是pHIIDNADNA.K+離子會(huì)與SDSDNA-SDS成相互纏繞的大分子物質(zhì),很容易與小分子的質(zhì)粒DNA9、堿裂解法抽提質(zhì)粒DNA的基本原理是什么？答：堿裂解法提取質(zhì)粒是根據(jù)共價(jià)閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNAPH~時(shí)，線性DNADNAPHDNADNA10、在堿裂解法提取質(zhì)粒DNA操作中應(yīng)注意哪些問(wèn)題？答：（1）正確使用移液器。溶液ll加入酚-氯仿后必須充分混勻。混勻的過(guò)程不能太過(guò)劇烈。用移液器吸去管壁上黏附的水珠。吸取酚-氯仿溶液時(shí)要將Tip11、在堿裂解法提取質(zhì)粒DNA時(shí)，酚/氯仿的作用是什么？答：酚是強(qiáng)烈的蛋白質(zhì)變性劑，能有效使蛋白質(zhì)變性而除去，氯仿有強(qiáng)烈的脂=25：24：1白質(zhì)12DNADNA＞線性DNA＞開環(huán)DNA13、提取植物基因組DNA的基本原理是什么在操作過(guò)程中應(yīng)該注意什么SDSEDTADNADNA14、在植物基因組提取過(guò)程中，DNA降解的可能原因？答：原因:⑴從植物中提取DNA時(shí)沒(méi)對(duì)細(xì)胞內(nèi)的DNA酶進(jìn)行滅活；⑵操作過(guò)程中被細(xì)菌污染了；⑶口水等含酶物質(zhì)飛入樣品中；⑷溫度、PH等變化過(guò)于劇烈。15、在植物基因組提取過(guò)程中，提高DNA產(chǎn)量的措施？答：應(yīng)當(dāng)選取幼嫩的葉片，因?yàn)橛啄廴~片中的DNA存在液氮中，以免DNAEDTADNA減少抽提，減少DNADNADNA性，但不能太劇烈而打斷DNA；離心后應(yīng)該避免再次吸入有機(jī)相的苯酚—氯仿，盡量只取上清，不應(yīng)該讓苯酚最后仍有殘留，需抽提干凈。17DNADNA答：檢測(cè)：瓊脂糖凝膠電泳；保證DNA活性:用EDTA抑制DNADNA19、什么是限制性內(nèi)切酶？答：限制性內(nèi)切酶是一類能夠識(shí)別雙鏈DNADNA都有甲基化修飾功能和限制酶功能，Ⅱ類常用于分子克隆20、常見(jiàn)的Ⅱ型限制性內(nèi)切酶切割雙鏈DNA后會(huì)產(chǎn)生末端或末端。答：粘性，平21、下列有關(guān)限制性內(nèi)切酶的描述，錯(cuò)誤的是：（C）AB．限制性內(nèi)切酶的活性受溫度的影響C．限制性內(nèi)切酶能識(shí)別和切割RNAD．限制性內(nèi)切酶可以從原核中提取22、現(xiàn)有一長(zhǎng)度為l000bp的DNA分子，用限制性核酸內(nèi)切酶EcoRI酶切后得到的DNA分子仍是l000bp，用KpnI單獨(dú)酶切得到400bp和600bp2種長(zhǎng)度的DNA分子．用EcoRI，Kpnl同時(shí)酶切后得到200bp和600bp2種長(zhǎng)度的DNA分子。請(qǐng)畫出該DNA可能的酶切圖譜。答：這是個(gè)大小為1000bP的環(huán)形的DNA分子，在1bP處和400bP處分別有一個(gè)KpnⅠ位點(diǎn)，在200bP處有一個(gè)EcoRⅠ位點(diǎn)。23、一個(gè)限制性內(nèi)切酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)是5ˊ一G↓GATCC一3ˊ，上有該酶的一個(gè)切點(diǎn)，請(qǐng)畫出質(zhì)粒被該限制性內(nèi)切酶切割后所形成的黏性末端。答：--G GATCC--寫在上面，下面--CCTAGG-- 該酶為限制性內(nèi)酶I24、基因工程中，切割目的基因和載體所用的限制酶及切口必備的特點(diǎn)是A．可用不同的限制性內(nèi)切酶，露出的黏性末端必須相同B．必須用相同的限制性內(nèi)切酶，露出的黏性末端可不相同C．必須用相同的限制性內(nèi)切酶，露出的黏性末端必須相同D．可用不同的限制性內(nèi)切酶，露出不同的黏性末端25、在遺傳工程技術(shù)中，限制性內(nèi)切酶主要用于（D）目的基因的提取和導(dǎo)入目的基因的導(dǎo)入和檢測(cè)目的基因與運(yùn)載體結(jié)合和導(dǎo)入目的基因的提取和與運(yùn)載體結(jié)合26、在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，常使用微量移液器，請(qǐng)說(shuō)明在使用微量移液器時(shí)需要注意什么？3-5一定角度，要按到第二檔將液體全部壓出。④使用完畢后，打下tip27、現(xiàn)有量程為μl；1-10μl；μl；10-200μl；100-1000μl器各一支，請(qǐng)問(wèn)，當(dāng)吸取μl，μl，5μl，15μl，100μl，750μl答：分別是 ， ，1-10，，10-200， 100-1000。28、本學(xué)期我們學(xué)習(xí)了CaCl2

法制備大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞和熱休克法轉(zhuǎn)化質(zhì)粒DNA，你還知道哪些方法可以制備大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞和轉(zhuǎn)化的方法？答：氯化銣法，甘油—聚乙二醇法，一步法29、在質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化大腸桿菌時(shí)，是如何進(jìn)行篩選的？答：因?yàn)橘|(zhì)粒pETBlue-2帶有青霉素抗性基因,所以轉(zhuǎn)化成功的大腸桿菌細(xì)胞能在含羧芐青霉素的瓊脂糖平板上生長(zhǎng)形成菌落.所以用含羧芐青霉素的瓊脂糖平板可以篩選出轉(zhuǎn)化成功的大腸桿菌。30、藍(lán)白班篩選的原理是什么？答：見(jiàn)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)92面的實(shí)驗(yàn)原理的后半部分31DNA燃起火該如何處理？答：用水打濕的毛巾，著火時(shí)用毛巾蓋上就行了32、衛(wèi)星菌落出現(xiàn)的原因是什么該如何避免化過(guò)程出現(xiàn)的問(wèn)題就要進(jìn)一步考慮連接是否正確，連接時(shí)間12~16h6ul-10ul1:3~1:1012h-16h33、影響所制備感受態(tài)效率的因素有哪些？答：影響因素有（1）大腸桿菌生長(zhǎng)狀態(tài)（2）氯化鈣濃度（3）冰上放置時(shí)間（4）保存溫度34、轉(zhuǎn)化后為什么要溫育1小時(shí)為什么加入的是無(wú)抗培養(yǎng)基？答：第一問(wèn)：溫育就是讓感受態(tài)恢復(fù)一下狀態(tài)，以及一些相關(guān)抗性基因的表達(dá)。畢竟從-70℃環(huán)境中取出，需一段時(shí)間適應(yīng)才可轉(zhuǎn)化。第二問(wèn)：因?yàn)榧?xì)胞比較脆弱，加無(wú)抗培養(yǎng)基是為了讓細(xì)胞生長(zhǎng)，促使在轉(zhuǎn)化過(guò)程中獲得的新表型得到表達(dá)。35、如果實(shí)驗(yàn)中對(duì)照組本不該長(zhǎng)出菌落的平板上長(zhǎng)出了一些菌落，你將如何解釋這種現(xiàn)象？答：（1）操作過(guò)程儀器、器皿等不是無(wú)菌的，出現(xiàn)了一些雜菌和雜DNA的污染（2）細(xì)菌在感受態(tài)時(shí)發(fā)生了一些自然變異，對(duì)所加的抗生素有一定的抗性，所以長(zhǎng)出一些菌落（3）所加的抑菌抗生素濃度不夠，不能夠抑制住細(xì)菌的生長(zhǎng)（4）一些實(shí)驗(yàn)誤差，錯(cuò)將菌液放錯(cuò)36、在轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)中，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照平皿應(yīng)有什么樣的結(jié)果如何解釋這個(gè)結(jié)果答：實(shí)驗(yàn)組中長(zhǎng)出菌落而對(duì)照組中無(wú)任何菌落生長(zhǎng)。37、在學(xué)習(xí)制備感受態(tài)細(xì)胞時(shí)，為什么要保證細(xì)胞密度ml什么答：細(xì)胞生長(zhǎng)密度以剛進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)為宜，密度過(guò)高或不足均會(huì)影響轉(zhuǎn)化效率，一次要保證細(xì)胞密度<10^8/ml。甘油的目的是為了防止水在凍結(jié)過(guò)程中產(chǎn)生過(guò)大的冰晶損傷細(xì)胞，抑制大腸桿菌生長(zhǎng)，以便保存。38、通過(guò)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，你認(rèn)為自己掌握了哪些實(shí)驗(yàn)技能你對(duì)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)有哪些建議與意見(jiàn)答：此為主觀題，可結(jié)合所學(xué)知識(shí)發(fā)揮，言之有理即可。（比如凝膠電泳，PCR擴(kuò)增等。）這門課程將分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)操作的理論與實(shí)踐相結(jié)合，不僅使我在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技能方面得到系統(tǒng)的訓(xùn)練，而且讓我對(duì)具體實(shí)驗(yàn)操作的原理有了清晰地認(rèn)識(shí)。作為一門實(shí)驗(yàn)課，它還鍛煉了我運(yùn)用已學(xué)到的理論知識(shí)和已掌握的實(shí)驗(yàn)技能綜合解決科學(xué)問(wèn)題的能力。39DNA答：DNADNA答：瓊脂糖凝膠電泳時(shí)戴一次性手套能夠有效阻止EBEB41、DNA分子在電泳緩沖液中帶正電荷還是負(fù)電荷它在電場(chǎng)中的移動(dòng)方向如何電泳中你觀察到哪些現(xiàn)象答：DNA帶負(fù)電荷，在電場(chǎng)中向正極移動(dòng)42、影響瓊脂糖凝膠DNA遷移速率的因素有哪些分別有何種影響⑥電泳緩沖液4360kb～100kbDNA型的電泳方法才能進(jìn)行有效分離為什么答：恒定電場(chǎng)強(qiáng)度下的瓊脂糖凝電泳。糖凝膠可以制成不同大小的孔隙度，具有分子篩的效應(yīng)，所以恒定場(chǎng)的瓊脂糖凝膠