肽類藥物的含量測定方法背景：多肽類藥物及其主要優(yōu)勢人體的生長和發(fā)育都離不開多肽，多肽是調(diào)節(jié)系統(tǒng)功能和細(xì)胞生長的基礎(chǔ)。多肽類藥物作為藥物開發(fā)的主要方向，它包括多種類型，常見的多肽類藥物有如下幾種.多肽類疫苗：多肽類疫苗的研制為人類攻克肝炎、艾滋病等疾病帶來了希望。.抗腫瘤多肽類藥物：腫瘤危害人類的生存，其產(chǎn)生是多方面因素共同作用的結(jié)果，但歸根到底是癌基因表達(dá)的問題。多肽類抗癌藥物由于其能夠成為腫瘤基因表達(dá)時(shí)的調(diào)控因子，因而成為了抗癌藥物研究的新希望。.抗病毒類多肽藥物：一般來說，病毒感染細(xì)胞的過程包括以下幾個(gè)主要階段：吸附、自我復(fù)制、重新組合、釋放病毒等。。抗病毒多肽通常作用于病毒吸附和病毒復(fù)制兩個(gè)階段，通過與宿主細(xì)胞特異性結(jié)合或者病毒蛋白酶結(jié)合來發(fā)揮作用。一、酸堿滴定法示例：苯酪酞的測定測定方法：取本品約0.5g精密稱定，加中性乙醇（對酚酞指示液呈中性）60ml，振搖，溶解后加酚酞指示液數(shù)滴，用氫氧化鈉滴定（0.1mol/L)，即可。二、

紫外分度光度法

示例：五肽胃泌素含量測定五肽胃泌素為白色或類白色粉末。本品能促進(jìn)胃酸、胃蛋白酶及內(nèi)因子的分泌，其促胃酸分泌作用相當(dāng)于內(nèi)源性胃泌素的1/4，作用可持續(xù)10~40分鐘。臨床上主要用于胃酸分泌機(jī)能的檢查。三、效價(jià)測定法實(shí)例（1）：抑肽酶效價(jià)的測定抑肽酶(Trasylol，別名：抑胰肽酶、屈來密多)能抑制胰蛋白酶及糜蛋白酶，阻止胰臟中其他活性蛋白酶原的激活及胰蛋白酶原的自身激活。臨床用于預(yù)防和治療急性胰腺炎、纖維蛋白溶解引起的出血及彌漫性血管內(nèi)凝血。還可用于抗休克治療。在腹腔手術(shù)后，直接注入腹腔可預(yù)防腸粘連。抑肽酶通過酶上的絲氨酸活性部分，形成抑肽酶-蛋白酶復(fù)合物而達(dá)到抑制作用。然而與不同的蛋白酶結(jié)合，顯示出不同的離解常數(shù)。與胰蛋白酶的結(jié)合最牢固．與人體纖溶酶的結(jié)合不很牢固。（1）底物溶液的制備(2)胰蛋白酶稀釋溶液的制備精密量取胰蛋白酶溶液1ml，用硼砂－氯化鈣緩沖液（pH8.0）稀釋成20ml，室溫放置10min，置于冰浴中。取N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯鹽酸鹽171.3mg，加水溶解并稀釋至25ml。臨用時(shí)配制。胰蛋白酶溶液的制備取胰蛋白酶對照品適量，精密稱定，加鹽酸滴定液（0.001mol/L）溶解并制成每1ml中約含0.8單位（每1ml中約含1mg）的溶液，臨用時(shí)配制并置于冰浴中。(3)供試品溶液的制備取本品適量，精密稱定，加硼砂一氯化鈣緩沖液（pH8.0）溶解并制成每1ml中約含1.67單位（每1ml中約含0.6mg）的溶液，精密量取0.5ml與胰蛋白酶溶液2ml，再用硼砂一氯化鈣緩沖液（pH8.0）稀釋成20ml，反應(yīng)10分鐘，置冰浴中（2小時(shí)內(nèi)使用）。(4)測定法取硼砂－氯化鈣緩沖液（pH8.0）9.0ml與底物溶液1.0ml，置25ml燒杯中，于25℃±0.5℃恒溫水浴中放置3～5分鐘，在攪拌下滴加氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）調(diào)節(jié)pH值為8.0，精密加入供試品溶液（經(jīng)25℃保溫3～5分鐘）1ml，并立即計(jì)時(shí)，用1ml微量滴定管以氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）滴定釋放出的酸，使溶液的pH值始終保持在7.9～8.1。每隔60秒讀取pH值恰為8.0時(shí)所消耗的氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）的體積（ml），共6分鐘。另精密量取胰蛋白酶稀釋溶液1ml，按上法操作，作為對照（重復(fù)一次）。以時(shí)間為橫坐標(biāo)，消耗的氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）為縱坐標(biāo)作圖，應(yīng)為一條直線。供試品和對照兩條直線應(yīng)基本重合，求出每秒鐘消耗氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）的體積（ml），按下式計(jì)算。每1mg抑肽酶的效價(jià)（單位）式中4000為系數(shù)；W為抑肽酶制成每1ml中約含1.67單位時(shí)的酶量，mg；n1為對照測定時(shí)每秒鐘消耗的氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）的體積，ml；n2為供試品溶液每秒鐘消耗氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）的體積，ml；2為供試品溶液中所加入胰蛋白酶的量為對照測定時(shí)的2倍；f為氫氧化鈉滴定液（0.1mol/L）校正因子。效價(jià)單位定義能抑制一個(gè)胰蛋白酶單位[每秒鐘能水解1μmol的N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯（BAEE）為一個(gè)胰蛋白酶單位（microkatal）]的活力稱為一個(gè)抑肽酶活力單位（EPU）。每1EPU的抑肽酶相當(dāng)于1800KIU。注意事項(xiàng)：（1）本實(shí)驗(yàn)測定原理：在一定條件下（pH8.0，25℃），胰蛋白酶可使N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯水解為N-苯甲酰-L-精氨酸，使溶液pH下降，當(dāng)加入氫氧化鈉滴定后，使溶液pH又回到8.0，水解繼續(xù)進(jìn)行。（2）當(dāng)胰蛋白酶中加入抑肽酶后，使50%的胰蛋白酶活性被抑制，剩余的胰蛋白酶繼續(xù)與底物進(jìn)行水解反應(yīng)，用氫氧化鈉滴定釋放出的酸，使pH始終維持7.9~8.0，在一定時(shí)間內(nèi)，根據(jù)根據(jù)樣品消耗的氫氧化鈉（0.1mol/L）的體積（ml)算出活力單位。總結(jié)：

在進(jìn)行多肽藥物含量進(jìn)行測定時(shí)可以采用了兩種形式：

第一種屬于比較精準(zhǔn)的定量——如酸堿滴定法和紫外分光光度法。這兩種方法都是利用多肽分子結(jié)構(gòu)上的特點(diǎn)。方法一利用游離的氨基或羧基，使多肽表現(xiàn)出酸堿性，可以利用低濃度酸或堿進(jìn)行滴定；方法二利用某些特性的官能團(tuán)來進(jìn)行定量。因此再要進(jìn)行對某種多肽物質(zhì)進(jìn)行定量時(shí)，可以從結(jié)構(gòu)特性下手，利用特性化學(xué)反應(yīng)或者物理特性進(jìn)行定量。

第二種屬于一種比較抽象的定量方式——效價(jià)測定。跟酶活力單位類似是一個(gè)可以隨人為規(guī)定變化而變化的，但通過規(guī)定統(tǒng)一