環(huán)境微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)一到三4300字

實(shí)驗(yàn)一顯微鏡油鏡的使用和細(xì)菌形態(tài)的觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、了解顯微鏡的基本構(gòu)造和使用方法2、掌握油鏡的原理和使用方法3、了解細(xì)菌的三種基本形態(tài)二、顯微鏡的基本構(gòu)造三、油鏡使用的原理油鏡，即油浸物鏡。當(dāng)光線由反光鏡通過玻片與鏡頭之間的空氣時(shí)，由于空氣與玻片的密度不同，使光線受到曲折，發(fā)生散射，降低了視野的照明度。若中間的介質(zhì)是一層油（其折射率與玻片的相近），則幾乎不發(fā)生折射，增加了視野的進(jìn)光量和顯微鏡的分辨率從而使物象更加清晰。四、實(shí)驗(yàn)器材1、細(xì)菌三態(tài)裝片2、顯微鏡3、香柏油4、擦鏡紙等五、操作步驟1.放置好顯微鏡2.調(diào)節(jié)光源3.低倍鏡觀察4.高倍鏡觀察5.油鏡觀察6.清潔和還原顯微鏡顯微鏡觀察細(xì)菌涂片（細(xì)菌三型涂片、枯草桿菌涂片）使用油鏡：低倍鏡（10×）高倍鏡（40×）油鏡（100×）1.放置好顯微鏡置顯微鏡于平穩(wěn)的實(shí)驗(yàn)臺(tái)上。鏡檢者姿勢要端正。（不論使用單筒顯微鏡或雙筒顯微鏡均應(yīng)雙眼同時(shí)睜開觀察，以減少眼睛疲勞，也便于邊觀察邊繪圖或記錄2.調(diào)節(jié)好光源接通電源，打開光源。3.低倍鏡的觀察觀察任何標(biāo)本都必須先用低倍鏡觀察，因?yàn)榈捅剁R視野范圍大，容易發(fā)現(xiàn)觀察目標(biāo)，確定觀察部位。將標(biāo)本片放在載物臺(tái)上，用標(biāo)本夾夾住，調(diào)節(jié)標(biāo)本移動(dòng)螺旋，使觀察的目的物處于物鏡的正下方。調(diào)節(jié)粗調(diào)螺旋，使物鏡（10×）與標(biāo)本靠近，眼睛在測向注視物鏡，防止物鏡和載玻片相碰。張開雙眼向目鏡里觀察，如果見到目的物，但不十分清楚，可用細(xì)準(zhǔn)焦螺旋調(diào)節(jié)，至目的物清晰為止。通過玻片夾推進(jìn)器慢慢移動(dòng)玻片，認(rèn)真觀察標(biāo)本各部分，找到合適的目的物，仔細(xì)觀察并記錄所觀察到的結(jié)果。4.高倍鏡的觀察（1）用低倍鏡找到標(biāo)本并調(diào)節(jié)清晰后，將欲放大的觀察部位用推進(jìn)器調(diào)到視野中央。（2）.旋動(dòng)轉(zhuǎn)換器換高倍鏡。如果高倍鏡下觀察目的物有點(diǎn)模糊，調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，直到視野清晰。調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋時(shí)要注意旋轉(zhuǎn)方向與載物臺(tái)上升或下降的關(guān)系，防止鏡頭與載玻片強(qiáng)力接觸，損壞鏡頭或載玻片。5.油鏡的觀察（1）如果用高倍鏡目的物未能看清，可用油鏡。先用低倍鏡和高倍鏡檢查標(biāo)本片，將目的物移到視野正中。下降載物臺(tái)，在載玻片上滴一滴香柏油，將油鏡移至正中，緩慢調(diào)節(jié)粗調(diào)螺（2）旋使油鏡頭浸沒在油中，剛好貼近載玻片。然后再用細(xì)準(zhǔn)焦螺旋微微向上調(diào)（切忌用粗準(zhǔn)焦螺旋）即可。（應(yīng)特別注意不要在升降載物臺(tái)時(shí)用力過猛，或者調(diào)焦時(shí)誤將粗調(diào)節(jié)螺旋向反方向轉(zhuǎn)動(dòng)而損壞鏡頭及載玻片）6.清潔顯微鏡和還原顯微鏡.觀察結(jié)束后，調(diào)節(jié)光源到最小再關(guān)掉電源開關(guān)。調(diào)節(jié)粗調(diào)螺旋，使載物臺(tái)下降到最低，取下玻片。.把油鏡轉(zhuǎn)離光軸，擦鏡紙擦1～2次，去油，用二甲苯滴濕的擦鏡紙擦2次，再用擦鏡紙擦1～2次，順鏡頭直徑方向擦，不要圓周擦和來回擦。擦干凈鏡體，罩上防塵罩，然后放回原處。.用擦油鏡頭的方法擦玻片。六、顯微結(jié)構(gòu)圖的繪制?嚴(yán)格按光學(xué)顯微鏡的操作方法，依低倍、高倍及油鏡的次序觀察細(xì)菌裝片，并繪出其形態(tài)圖。?生物繪圖中繪出的圖要清楚，并正確的表示出形態(tài)構(gòu)造的特點(diǎn)，繪圖注意事項(xiàng)如下：(1)繪圖要用黑色硬鉛筆，不要用軟鉛筆或有色鉛筆，一般用2H鉛筆為宜。(2)圖的大小及在紙上分布的位置要適當(dāng)。(3)畫圖時(shí)先用輕淡小點(diǎn)或輕線條畫出輪廓，再依照輪廓一筆畫出與物象相符的線條。線條要清晰，比例要準(zhǔn)確。(4)繪出的圖要正確，觀察時(shí)要把混雜物、破損、重疊等現(xiàn)象區(qū)別清楚，不要把這些現(xiàn)象繪上。(5)圖的明暗及濃淡，應(yīng)用細(xì)點(diǎn)表示，不要采用涂抹方法。點(diǎn)細(xì)點(diǎn)時(shí)，要點(diǎn)成圓點(diǎn)，不要點(diǎn)成小撇。(6)整個(gè)圖要美觀、整潔，還要特別注意準(zhǔn)確性。七、思考題1、使用油鏡時(shí)，為什么要先用低倍鏡觀察？2、油鏡使用原理是什么？3、繪出細(xì)菌三型圖。實(shí)驗(yàn)二細(xì)菌的簡單染色雖然各種類型的顯微鏡能夠觀察到微生物的各種形態(tài)結(jié)構(gòu)，但一般實(shí)驗(yàn)室常用的是普通光學(xué)顯微鏡。由于細(xì)菌體積小且透明，在活體細(xì)胞內(nèi)又含有大量的水分，因此，對光線的吸收和反射與水溶液相差不大。當(dāng)把細(xì)菌懸浮在水滴內(nèi)，放在顯微鏡下觀察時(shí)，由于與周圍背景沒有顯著的明暗差，難于看清它們的形狀，更談不上識(shí)別其細(xì)微結(jié)構(gòu)。而經(jīng)過染色，就可借助顏色的反襯作用比較清楚地看到菌體形態(tài)，亦即菌體表面及內(nèi)部結(jié)構(gòu)著色與背景形成鮮明對比，這樣便可在普通光學(xué)顯微鏡下清晰地觀察到微生物的形狀和結(jié)構(gòu)，因此，微生物染色技術(shù)是觀察微生物形態(tài)結(jié)構(gòu)的重要手段。本實(shí)驗(yàn)通過對細(xì)菌的染色觀察，使同學(xué)們在掌握細(xì)菌染色技術(shù)的基礎(chǔ)上，了解各種其他的染色制片技術(shù)；觀察微生物的各種形態(tài)結(jié)構(gòu)，以鞏固課堂知識(shí)，增強(qiáng)感性認(rèn)識(shí)。一、目的要求1．學(xué)習(xí)微生物涂片、染色的基本技術(shù)，掌握細(xì)菌的單染色方法及無菌操作技術(shù)。2．鞏固顯微鏡的使用方法。二、基本原理1.簡單染色法：所謂單染色法是利用單一染料對細(xì)菌進(jìn)行染色的一種方法。此法操作簡便，適用于菌體一般形態(tài)的觀察。在中性、堿性或弱酸性溶液中，細(xì)菌細(xì)胞通常帶負(fù)電荷，所以常用堿性染料進(jìn)行染色。堿性染料并不是堿，和其他染料一樣是一種鹽，電離時(shí)染料離子帶正電，易與帶負(fù)電荷的細(xì)菌結(jié)合而使細(xì)菌著色。例如，美藍(lán)（亞甲藍(lán)）實(shí)際上是氯化亞甲藍(lán)鹽，它可被電離成正、負(fù)離子：帶正電荷的染料離子可使細(xì)菌細(xì)胞染成藍(lán)色。常用的堿性染料除美藍(lán)外，還有結(jié)晶紫（crystalviolet）、堿性復(fù)紅（basicfu-chsin）、番紅（又稱沙黃，safranine）等。細(xì)菌體積小，較透明，如未經(jīng)染色常不易識(shí)別，而經(jīng)著色后，與背景形成鮮明的對比，使易于在顯微鏡下進(jìn)行觀察。三、器材1、活材料：培養(yǎng)24小時(shí)的大腸桿菌、葡萄球菌。2、染色液和試劑：草酸銨結(jié)晶紫、番紅、蒸餾水、無菌水、二甲苯、香柏油等。3、器材：廢液缸、洗瓶、載玻片、接種杯、酒精燈、擦鏡紙、顯微鏡。四、操作步驟（1）涂片：取干凈載玻片一塊，左手持菌液試管，右手持接種環(huán)在火焰上灼燒滅菌，待接種環(huán)冷卻后在火焰旁從試管中取一環(huán)菌液，在潔凈無脂的載玻片上涂直徑約0.5-1cm的均勻薄膜。如果從斜面或平板上取菌，用無菌環(huán)挑取少量菌體，涂在預(yù)先滴有一小滴無菌水的載玻片上，使其薄而均勻。（2）晾干：讓涂片自然晾干或者在酒精燈火焰上方文火烘干。（3）固定：手執(zhí)玻片一端，讓菌膜朝上，通過火焰2-3次固定（以不燙手為宜），使細(xì)胞質(zhì)凝固，以固定細(xì)菌的形態(tài)，并使其不易脫落。但不能在火焰上烤，否則細(xì)菌形態(tài)將毀壞。（4）染色：將固定過的涂片放在廢液缸上的擱架上，加一滴草酸銨結(jié)晶紫染色1-2min（5）水洗：用洗瓶或滴管緩慢沖洗涂片上的染色液，直至沖下之水無色時(shí)為止。（6）干燥：將洗過的涂片放在空氣中晾干或用吸水紙吸干。（7）鏡檢：先低倍觀察，再高倍觀察，并找出適當(dāng)?shù)囊曇昂螅瑢⒏弑剁R轉(zhuǎn)出，在涂片上加香柏油一滴，將油鏡頭浸入油滴中仔細(xì)調(diào)焦觀察細(xì)菌的形態(tài)。（8）改用番紅染色，重復(fù)以上過程。實(shí)驗(yàn)完畢后的處理：①將浸過油的鏡頭按下述方法擦拭干凈，a.先用擦鏡紙將油鏡頭上的油擦去。b.用擦鏡紙沾少許二甲苯將鏡頭擦2-3次。c.再用干凈的擦鏡紙將鏡頭擦2-3次。注意擦鏡頭時(shí)向一個(gè)方向擦拭。②觀察后的染色玻片用廢紙將香柏油擦干凈，放入回收容器內(nèi)。五、注意事項(xiàng)（1）要有對數(shù)生長期的菌種菌齡過小或過大均影響細(xì)菌的正常形態(tài)，菌齡太小還沒有分化完整，而菌齡過大，往往會(huì)發(fā)生自溶。（2）涂片不宜過厚，以免造成菌體重疊，不利于觀察形態(tài)。（3）火焰固定不宜過熱，否則會(huì)使細(xì)菌變形。六、實(shí)驗(yàn)報(bào)告1．結(jié)果繪出葡萄球菌和大腸桿菌的形態(tài)圖。2．思考題簡單染色應(yīng)注意哪些，為什么？實(shí)驗(yàn)三細(xì)菌的革蘭氏染色一.目的要求1.初步掌握細(xì)菌涂片方法2.學(xué)習(xí)并掌握革蘭氏染色法步驟二.革蘭氏染色的基本原理革蘭氏染色是丹麥醫(yī)生C.Gram（革蘭）于1884年發(fā)明的一種鑒別不同類型細(xì)菌的染色方法。根據(jù)細(xì)菌細(xì)胞壁的組分和結(jié)構(gòu)不同，通過革蘭氏染色法可將所有的細(xì)菌區(qū)分為兩大類G+和G-.三.實(shí)驗(yàn)材料（一）菌種：1.金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)斜面培養(yǎng)物2.大腸桿菌(E.coli)培養(yǎng)物（二）儀器與其他用品顯微鏡、酒精燈、火機(jī)（火柴）、接種環(huán)、載玻片、擦鏡紙、香柏油、二甲苯，無菌牙簽等。（三）革蘭氏染色液①草酸銨結(jié)晶紫染色液②革氏碘液③95%乙醇④0.5%番紅染液四.革蘭氏染色的過程–制片1、取干凈的載玻片，左手持菌液試管，右手持接種環(huán)在火焰上燒灼滅菌，待接種環(huán)冷卻后在火焰旁從試管中取一環(huán)菌液，在潔凈無脂的載玻片上涂一直徑約0.5-1cm的均勻薄膜。若從斜面或平板上取菌，用無菌接種環(huán)取少量菌體，涂在預(yù)先滴有一小滴無菌水的載玻片上，使其薄而均勻。革蘭氏染色的過程–染色2.初染：在做好的涂面上滴加草酸銨結(jié)晶紫染液，染1分鐘，傾去染液，流水沖洗至無紫色。3.媒染：先用新配的碘液沖去殘水，而后用其覆蓋涂面1分鐘，后水洗。4.脫色：除去殘水后，滴加95%酒精進(jìn)行脫色約20－30秒，使流出的酒精不再有紫色為止，后立即用流水沖洗。5.復(fù)染：滴加番紅染色液，染3－5分鐘，水洗后用吸水紙吸干。6.鏡檢：觀察染色結(jié)果。注意事項(xiàng)（1）革蘭氏染色注意載玻片要潔凈，滴無菌水和取菌不宜過多，涂片要均勻，不宜過厚；熱固定溫度不宜過高，（以玻片背面不燙手為宜），否則會(huì)改變甚至破壞細(xì)胞形態(tài)；水洗時(shí)不要直接沖洗涂面，而應(yīng)使水從載玻片的一端流下，水流不宜過急，過大，以免涂片薄層脫落。（2）革蘭氏染色結(jié)果是否正確，乙醇脫色是革蘭氏染色操作的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，脫色不足，陰性菌被誤染成陽性菌，脫色過度，陽性菌被誤染為陰性菌。（3）菌齡也影響染色結(jié)果，如陽性菌培養(yǎng)時(shí)間過長，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈陰性反應(yīng)。五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告1、你認(rèn)為哪些環(huán)節(jié)會(huì)影響革蘭氏染色結(jié)果的正確性？其中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)是什么？2、進(jìn)行革蘭氏染色時(shí)，為什么特別強(qiáng)調(diào)菌齡不能太老，用老齡細(xì)菌染色出現(xiàn)什么問題？3、乙醇脫色后復(fù)染之前，革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌應(yīng)分別是什么顏色?你認(rèn)為革蘭氏染色中，哪一個(gè)步驟可以省去而不影響最終結(jié)果？

第二篇：微生物實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)規(guī)劃9800字環(huán)保技術(shù)公司微生物實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)規(guī)劃環(huán)保技術(shù)公司技術(shù)部二零一一年十二月十八日目錄微生物實(shí)驗(yàn)室建設(shè).................................................................................3微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的主要設(shè)備..................................................................7微生物實(shí)驗(yàn)室管理...............................................................................15微生物實(shí)驗(yàn)室建設(shè)微生物實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)備室、滅菌室、無菌室、恒溫培養(yǎng)室和普通實(shí)驗(yàn)室五部分組成。這些房間的共同特點(diǎn)是地板和墻壁的質(zhì)地光滑堅(jiān)硬，儀器和設(shè)備的陳設(shè)簡潔，便于打掃衛(wèi)生。微生物實(shí)驗(yàn)室基本要求如下：（一）準(zhǔn)備室準(zhǔn)備室用于配制培養(yǎng)基和樣品處理等。室內(nèi)設(shè)有試劑柜、存放器具或材料的專柜、實(shí)驗(yàn)臺(tái)、電爐、冰箱和上下水道、電源等。準(zhǔn)備室還要用于洗刷器皿等。室內(nèi)應(yīng)備有加熱器、蒸鍋，洗刷器皿用的盆、桶等，還應(yīng)有各種瓶刷、去污粉、肥皂、洗衣粉等。（二）滅菌室滅菌室主要用于培養(yǎng)基的滅菌和各種器具的滅菌，室內(nèi)應(yīng)備有高壓蒸汽滅菌器、烘箱等滅菌設(shè)備及設(shè)施。（三）無菌室無菌室也稱接種室，是系統(tǒng)接種、純化菌種等無菌操作的專用實(shí)驗(yàn)室。在微生物工作中，菌種的接種移植是一項(xiàng)主要操作，這項(xiàng)操作的特點(diǎn)就是要保證菌種純種，防止雜菌的污染。在一般環(huán)境的空氣中，由于存在許多塵埃和雜菌，很易造成污染，對接種工作干擾很大。1.無菌室的設(shè)置無菌室應(yīng)根據(jù)既經(jīng)濟(jì)又科學(xué)的原則來設(shè)置。其基本要求有以下幾點(diǎn)：（1）無菌室應(yīng)有內(nèi)、外兩間，內(nèi)間是無菌室，外間是緩沖室。房間容積不宜過大，以便于空氣滅菌。最小內(nèi)間面積2×2.5＝5m2，外間面積1×2＝2m2，高以2.5m以下為宜，都應(yīng)有天花板。（2）內(nèi)間應(yīng)當(dāng)設(shè)拉門，以減少空氣的波動(dòng)，門應(yīng)設(shè)在離工作臺(tái)最遠(yuǎn)的位置上；外間的門最好也用拉門，要設(shè)在距內(nèi)間最遠(yuǎn)的位置上。（3）在分隔內(nèi)間與外間的墻壁或“隔扇”上，應(yīng)開一個(gè)小窗，作接種過程中必要的內(nèi)外傳遞物品的通道，以減少人員進(jìn)出內(nèi)間的次數(shù)，降低污染程度。小窗寬60cm、高40cm、厚30cm，內(nèi)外都掛對拉的窗扇。（4）無菌室容積小而嚴(yán)密，使用一段時(shí)間后，室內(nèi)溫度很高，故應(yīng)設(shè)置通氣窗。通氣窗應(yīng)設(shè)在內(nèi)室進(jìn)門處的頂棚上（即離工作臺(tái)最遠(yuǎn)的位置），最好為雙層結(jié)構(gòu)，外層為百葉窗，內(nèi)層可用抽板式窗扇。通氣窗可在內(nèi)室使用后、滅菌前開啟，以流通空氣。有條件可安裝恒溫恒濕機(jī)。2.無菌室內(nèi)設(shè)備和用具（1）無菌室內(nèi)的工作臺(tái)，不論是什么材質(zhì)、用途的，都要求表面光滑和臺(tái)面水平。（2）在內(nèi)室和外室各安裝一個(gè)紫外燈（多為30W）。內(nèi)室的紫外線燈應(yīng)安裝在經(jīng)常工作的座位正上方，離地面2m，外室的紫外線燈可安裝在外室中央。（3）外室應(yīng)有專用的工作服、鞋、帽、口罩、盛有來蘇兒水的瓷盆和毛巾、手持噴霧器和5%石炭酸溶液等。（4）內(nèi)室應(yīng)有酒精燈、常用接種工具、不銹鋼制的刀、剪、鑷子、70%的酒精棉球、工業(yè)酒精、載玻璃片、特種蠟筆、記錄本、鉛筆、標(biāo)簽紙、膠水、廢物筐等。3.無菌室的滅菌消毒（1）薰蒸：這是無菌室徹底滅菌的措施。無菌室使用了較長時(shí)間，污染比較嚴(yán)重時(shí)，應(yīng)進(jìn)行薰蒸滅菌。可用甲醛、乳酸或硫磺薰蒸。（2）噴霧：在每次使用無菌室前進(jìn)行。噴霧可促使空氣中微粒及微生物沉降，防止桌面、地面上的微塵飛場，并有殺菌作用。可用5%石炭酸噴霧。（3）紫外線照射：在每次使用無菌室前進(jìn)行。紫外線有較好的殺菌效果。通常應(yīng)開啟紫外線燈照射30～60min。4.無菌室工作規(guī)程（1）無菌室滅菌。每次使用前開啟紫外線燈照射30min以上，或在使用前30min，對內(nèi)外室用5%石炭酸噴霧。（2）用肥皂洗手后，把所需器材搬入外室；在外室換上已滅菌的工作服、工作帽和工作鞋，戴好口罩，然后用2%煤酚皂液將手浸洗2分鐘。（3）將各種需用物品搬進(jìn)內(nèi)室清點(diǎn)、就位，用5%石炭酸在工作臺(tái)面上方和操作員站位空間噴霧，返回外室，5～10min后再進(jìn)內(nèi)室工作。（4）接種操作前，用70%酒精棉球擦手；進(jìn)行無菌操作時(shí)，動(dòng)作要輕緩，盡量減少空氣波動(dòng)和地面揚(yáng)塵。（5）工作中應(yīng)注意安全。如遇棉塞著火，用手緊握或用濕布包裹熄滅，切勿用嘴吹，以免擴(kuò)大燃燒；如遇有菌培養(yǎng)物灑落或打碎有菌容器時(shí)，應(yīng)用浸潤5%石炭酸的抹布包裹后，并用浸潤5%石炭酸的抹布擦拭臺(tái)面或地面，用酒精棉球擦手后再繼續(xù)操作。（6）工作結(jié)束，立即將臺(tái)面收拾干凈，將不應(yīng)在無菌室存放的物品和廢棄物全部拿出無菌室后，對無菌室用5%石炭酸噴霧，或開紫外線燈照射30min。（四）恒溫培養(yǎng)室1.培養(yǎng)室的設(shè)置（1）培養(yǎng)室應(yīng)有內(nèi)、外兩間，內(nèi)室是培養(yǎng)室，外室是緩沖室。房間容積不宜大，以利于空氣滅菌，內(nèi)室面積在3.2×4.4＝14m2左右，外室面積在3.2×1.8＝6m2左右，高以2.5m左右為宜，都應(yīng)有天花板。（2）分隔內(nèi)室與外室的墻壁上部應(yīng)設(shè)帶空氣過濾裝置的通風(fēng)口。（3）為滿足微生物對溫度的需要，需安裝恒溫恒濕機(jī)。（4）內(nèi)外室都應(yīng)在室中央安裝紫外線燈，以供滅菌用。2.培養(yǎng)室內(nèi)設(shè)備及用具（1）內(nèi)室通常配備培養(yǎng)架和搖瓶機(jī)（搖床）。常用的搖瓶機(jī)有旋轉(zhuǎn)式、往復(fù)式兩種。（2）外室應(yīng)有專用的工作服、鞋、帽、口罩、手持噴霧器和5%石炭酸溶液、70%酒精棉球等。3.培養(yǎng)室的滅菌、消毒同無菌室的滅菌、消毒措施。小規(guī)模的培養(yǎng)可不啟用恒溫培養(yǎng)室，而在恒溫培養(yǎng)箱中進(jìn)行。（五）普通實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行微生物的觀察、計(jì)數(shù)和生理生化測定工作的場所。室內(nèi)的陳設(shè)因工作側(cè)重點(diǎn)不同而有很大的差異。一般均配備實(shí)驗(yàn)臺(tái)、顯微鏡、柜子及凳子。實(shí)驗(yàn)臺(tái)要求平整、光滑，實(shí)驗(yàn)柜要足以容納日常使用的用具及藥品等。微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室主要設(shè)備（一）凈化工作臺(tái)凈化工作臺(tái)是一種局部層流裝置，能在局部形成高潔度的工作環(huán)境。它由工作臺(tái)、過濾器、風(fēng)機(jī)、靜壓箱和支撐體等組成，采用過濾空氣使工作臺(tái)操作區(qū)達(dá)到凈化除菌的目的。室內(nèi)空氣經(jīng)預(yù)過濾器和高效過濾除塵后以垂直或水平層流狀態(tài)通過工作臺(tái)的操作區(qū)，由于空氣沒有渦流，所以，任何一點(diǎn)灰塵或附著在灰塵上的雜菌都能被排除，不易向別處擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移。因此，可使操作區(qū)保持無菌狀態(tài)。與無菌室和接種箱比較，使用凈化工作臺(tái)具有工作條件好、操作方便、無菌效果可靠、無消毒藥劑對人體危害、占用面積小且可移動(dòng)等優(yōu)點(diǎn)。如果放在無菌室內(nèi)使用，無菌效果更好。其缺點(diǎn)是價(jià)格昂貴，預(yù)過濾器和高效過濾器還需要定期清洗和更換。（二）高壓蒸汽滅菌鍋高壓蒸汽滅菌鍋是一個(gè)密閉的、可以耐受一定壓力的雙層金屬鍋。鍋底或夾層內(nèi)盛水，當(dāng)水在鍋內(nèi)沸騰時(shí)由于蒸汽不能逸出，使鍋內(nèi)壓力逐漸升高，水的沸點(diǎn)和溫度可隨之升高，從而達(dá)到高溫滅菌的目的。一般在0.11MPa的壓力下，121℃滅菌20~30min，包括芽孢在內(nèi)的所有微生物均可被殺死。如果滅菌物品體積較大，蒸汽穿透困難，可以適當(dāng)提高蒸汽壓力或延長滅菌時(shí)間。高壓滅菌鍋有臥式、立式、手提式等多種類型，在微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室，最為常用的是手提式和立式高壓蒸汽滅菌鍋。和常壓滅菌鍋相比，高壓滅菌鍋的優(yōu)點(diǎn)是滅菌所需的時(shí)間短、節(jié)約燃料、滅菌徹底等。其缺點(diǎn)是價(jià)格昂貴，滅菌容量較小。（三）培養(yǎng)箱培養(yǎng)箱是培養(yǎng)微生物的專用設(shè)備。制熱式培養(yǎng)箱是由電爐絲和溫度控制儀合成的固定體積的恒溫培養(yǎng)裝置，大小規(guī)格不一。微生物實(shí)驗(yàn)室常用的培養(yǎng)箱工作容積有450×450×350mm3或650×500×500mm3，適用于室溫至60℃之間的各類微生物培養(yǎng)。目前，隨著科學(xué)水平的發(fā)展，培養(yǎng)箱設(shè)備的完善程度和價(jià)格有很大差別。有各種結(jié)構(gòu)合理、功能齊全的培養(yǎng)箱，如恒溫培養(yǎng)箱、恒溫恒濕培養(yǎng)箱、低溫培養(yǎng)箱、微生物多用培養(yǎng)箱和二氧化碳培養(yǎng)箱等。有的用計(jì)算機(jī)控制，可選擇多條時(shí)間線變換溫差，從而克服了環(huán)境溫度的影響，一年四季均能達(dá)到培養(yǎng)要求的溫度。微生物多用培養(yǎng)箱是集加熱、制冷和振蕩于一體的微生物液體發(fā)酵裝置。工作室的溫度在15~50℃范圍內(nèi)任意選定，選定后經(jīng)溫控儀自動(dòng)控制，保持工作室內(nèi)恒溫。同時(shí)設(shè)有可控硅調(diào)速系統(tǒng)，振蕩機(jī)轉(zhuǎn)速可在1~220rpm范圍內(nèi)任意調(diào)控。（四）干燥箱干燥箱是用于除去潮濕物料內(nèi)及器皿內(nèi)外水分或其它揮發(fā)性溶液的設(shè)備。類型很多，有箱式、滾筒式、套間式、回轉(zhuǎn)式等。微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室多用箱式干燥箱，大小規(guī)格不一。工作室內(nèi)配有可活動(dòng)的鐵絲網(wǎng)板，便于放置被干燥的物品。制熱升溫式干燥箱也是有電爐絲和溫度控制儀組成，可調(diào)節(jié)溫度從室溫至300℃任意選擇。有的干燥箱采用導(dǎo)電溫度計(jì)為敏感元件，配合晶體管和繼電器組成自動(dòng)控制系統(tǒng)，克服了金屬管型熱膨脹控制的缺點(diǎn)。此外，還有真空干燥箱(配有真空泵和氣壓表)，可在常壓或減壓下操作。（五）搖床搖床又稱搖瓶機(jī)，它是培養(yǎng)好氣性微生物的小型試驗(yàn)設(shè)備或作為種子擴(kuò)大培養(yǎng)之用，常用的搖床有往復(fù)式和旋轉(zhuǎn)式兩種。往復(fù)式搖床的往復(fù)頻率一般在80~140次/min，沖程一般為5~14cm，如頻率過快、沖程過大或瓶內(nèi)液體裝量過多，在搖動(dòng)時(shí)液體會(huì)濺到包扎瓶口的紗布或棉塞上，導(dǎo)致雜菌污染，特別是啟動(dòng)時(shí)更容易發(fā)生這種情況。旋轉(zhuǎn)式搖床的偏心距一般在3~6cm之間，旋轉(zhuǎn)次數(shù)為60~300rpm。放在搖床上的培養(yǎng)瓶（一般為三角瓶）中的發(fā)酵液所需要的氧是由空氣經(jīng)瓶口包扎的紗布(一般8層)或棉塞通入的，所以氧的傳遞與瓶口的大小、瓶口的幾何形狀、棉塞或紗布的厚度和密度有關(guān)。在通常情況下，搖瓶的氧吸收系數(shù)取決于搖床的特性和三角瓶的裝樣量。往復(fù)式搖床是利用曲柄原理帶動(dòng)搖床作往復(fù)運(yùn)動(dòng)，機(jī)身為鐵制或木制的長方框子，有一層至三層托盤，托盤上有圓孔備放培養(yǎng)瓶，孔中凸出一個(gè)三角形橡皮，用以固定培養(yǎng)瓶并減少瓶的振動(dòng)，傳動(dòng)機(jī)構(gòu)一般采用二級皮帶輪減速，調(diào)換調(diào)速皮帶輪可改變往復(fù)頻率。偏心輪上開有不同的偏心孔，以便調(diào)節(jié)偏心距。往復(fù)式搖床的頻率和偏心距的大小對氧的吸收有明顯的影響。旋轉(zhuǎn)式搖床是利用旋轉(zhuǎn)的偏心軸使托盤擺動(dòng)，托盤有一層或兩層，可用不銹鋼板、鋁板或木制板制造。在三個(gè)偏心軸上裝有螺栓可調(diào)節(jié)上下，使托盤保持水平。這種搖床結(jié)構(gòu)復(fù)雜，造價(jià)高。其優(yōu)點(diǎn)是氧的傳遞較好、功率消耗小、培養(yǎng)基不會(huì)濺到瓶口的紗布上。（六）顯微鏡微生物個(gè)體微小，必須借助顯微鏡才能觀察清楚它們的個(gè)體形態(tài)和細(xì)胞結(jié)構(gòu)。因此，在微生物學(xué)的各項(xiàng)研究中，顯微鏡就成為不可缺少的工具。顯微鏡的種類很多，根據(jù)其結(jié)構(gòu)，可以分為光學(xué)顯微鏡和非光學(xué)顯微鏡兩大類。光學(xué)顯微鏡又可分為單式顯微鏡和復(fù)式顯微鏡。最簡單的單式顯微鏡即放大鏡（放大倍數(shù)常在10倍左右），構(gòu)造復(fù)雜的單式顯微鏡為解剖顯微鏡（放大倍數(shù)在200左右）。在微生物學(xué)的研究中，主要是復(fù)式顯微鏡。其中以普通光學(xué)顯微鏡（明視野顯微鏡）最為常用。此外，還有暗視野顯微鏡、相差顯微鏡、熒光顯微鏡、偏光顯微鏡、紫外光顯微鏡和倒置顯微鏡等。非光學(xué)顯微鏡為電子顯微鏡。下面以普通光學(xué)顯微鏡為例，簡單介紹一下顯微鏡的結(jié)構(gòu)、原理等。1.基本構(gòu)造普通光學(xué)顯微鏡由機(jī)械裝置和光學(xué)系統(tǒng)兩部分組成（如圖1.1）。機(jī)械裝置由鏡座、鏡臂、載物臺(tái)、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器和調(diào)焦裝置（粗調(diào)焦螺旋和微調(diào)焦螺旋）等組成。光學(xué)系統(tǒng)包括物鏡、目鏡、聚光器、彩虹光闌和光源等。2.成像原理和性能普通光學(xué)顯微鏡的成像原理如圖1.2所示。將被檢物體置于集光器和物鏡之間，平行的光線自反光鏡折入聚光器，光線經(jīng)過聚光器穿過透明的物體進(jìn)入物鏡后，即在目鏡的焦點(diǎn)平面（光闌部位或附近）上形成一個(gè)初生倒置的實(shí)像。從初生實(shí)像射過來的光線，經(jīng)目鏡的接目透鏡而達(dá)到眼球。這時(shí)的光線已變?yōu)榛蚪咏叫泄猓偻高^眼球的水晶體時(shí)，便在視網(wǎng)膜后形成一個(gè)直立的實(shí)像。圖1.2復(fù)式光學(xué)顯微鏡成像原理圖顯微鏡的主要性能包括放大率、工作距離、焦點(diǎn)距離、焦點(diǎn)深度、分辨率、鏡像亮度和視場亮度等。（1）放大率在顯微鏡組合中，光線通過物鏡先將物體放大為一個(gè)左右相反、前后倒置的實(shí)像，經(jīng)目鏡再次放大為一個(gè)虛像，這一虛像的大小和物體大小的比例，就叫放大率。顯微鏡的放大率=物鏡的放大倍數(shù)×目鏡的放大倍數(shù)=（光學(xué)筒長/物鏡焦距）×（明視距離/目鏡焦距）明視距離是已知數(shù)，物鏡焦距和目鏡焦距在說明書上有數(shù)據(jù)可查，而光學(xué)筒長是指物鏡上焦平面到目鏡下焦平面的距離，一般為160mm。（2）工作距離當(dāng)顯微鏡調(diào)準(zhǔn)焦距時(shí)，從蓋玻片到物鏡前透鏡表面之間的距離叫工作距離。工作距離的大小和物鏡的放大倍數(shù)與數(shù)值口徑有關(guān)。物鏡放大倍數(shù)和數(shù)值口徑愈大，則工作距離愈小，反之愈大。表1.1表示標(biāo)準(zhǔn)物鏡的主要性質(zhì)。一般油鏡的工作距離最短，約0.2mm。因此，要求蓋玻片的厚度為0.17~0.18mm。若蓋玻片過厚，就不可能將被檢體聚焦，且易引起物鏡的意外損壞。表1.1標(biāo)準(zhǔn)物鏡的主要性質(zhì)（3）焦點(diǎn)距離（焦距）它是指平行光線經(jīng)過單一透鏡后集于一點(diǎn)，由這一點(diǎn)到透鏡中心的距離。一個(gè)物鏡通常有幾個(gè)不同性質(zhì)的透鏡組成。因此，它的焦距的測定比較復(fù)雜。一般，顯微鏡的物鏡上都注明焦距的長度。物鏡的放大倍數(shù)越大，焦距越短。（4）焦點(diǎn)深度在使用顯微鏡時(shí)，當(dāng)焦點(diǎn)對準(zhǔn)某一物體時(shí)，不僅位于該點(diǎn)平面上的各點(diǎn)都可看清楚，而且在此平面的上下一定厚度內(nèi)，也可看清楚，這個(gè)清晰部分的厚度就是焦點(diǎn)深度。焦深與總放大率和數(shù)值口徑成反比，因此，高放大率和高數(shù)值口徑的顯微鏡其焦深就淺，不能看到標(biāo)本的全厚度。必須調(diào)節(jié)螺旋仔細(xì)地從上到下進(jìn)行觀察。另外，被檢物體周圍介質(zhì)（封片劑）的折射率加大可增大焦深。尤其在顯微照相時(shí)，更應(yīng)考慮封片劑的使用。（5）數(shù)值口徑（numericalaperture簡寫為NA）數(shù)值口徑是指物鏡與標(biāo)本間介質(zhì)折射率（n）和光線投射到物鏡上的最大入射角（α）一半正弦的乘積。其計(jì)算公式為：NA=n×sin(α/2)其中，n=介質(zhì)折射率，干燥系物鏡n=1，油浸系物鏡n=1.515；α=光線進(jìn)入物鏡的最大夾角，也稱鏡口角。（6）分辨率顯微鏡能夠分辨物體結(jié)構(gòu)中兩點(diǎn)之間的最小距離的能力，就叫分辨率。分辨率與物鏡的數(shù)值口徑成正比，與光波波長成反比。因此物鏡的數(shù)值口徑愈大，光波波長愈短，則顯微鏡的分辨率愈大，被檢物體的細(xì)微結(jié)構(gòu)也愈明晰地區(qū)分出來。因此，一個(gè)高分辨率意味著一個(gè)小的分辨距離。顯微鏡的分辨率是用可分辨的最小距離（D）來表示的：D=λ/（2NA）（7）鏡像亮度與視野亮度鏡像亮度是顯微鏡的圖像亮度的簡稱，指在顯微鏡下觀察到的圖像的明暗程度。使用時(shí)，對鏡像亮度的要求，一般是使眼睛既不感到暗淡，又不耀眼。鏡像亮度與數(shù)值口徑平方成正比，，與總放大倍數(shù)的平方成反比。視場亮度是指顯微鏡下整個(gè)視場的明暗程度。視場亮度不僅與目鏡、物鏡有關(guān)，還直接受聚光鏡、光闌和光源等因素的影響。在不更換物鏡和目鏡的情況下，視場亮度大，鏡像亮度也大。3.油鏡的基本原理油鏡，也稱油浸物鏡，一般在鏡頭上標(biāo)有“HI”和“HO”字樣，或在鏡頭下緣刻有1~2道黑線作為標(biāo)記。使用油鏡時(shí)，需將鏡頭浸在香柏油中進(jìn)行觀察，這是為了消除光由一種介質(zhì)進(jìn)入另一種介質(zhì)時(shí)發(fā)生散射，結(jié)果不僅提高了放大倍數(shù)，還增加了照明度和分辨率。（1）照明亮度油鏡與其它物鏡不同之處在于玻片和物鏡之間的介質(zhì)不是空氣，而是一種和玻璃折射率（n=1.52）相近的香柏油（n=1.515）。如果玻片與物鏡之間的介質(zhì)是空氣（n=1.00），光線通過玻片后發(fā)生散射，進(jìn)入視場的光線顯然減少，結(jié)果降低了視場亮度。當(dāng)光線通過玻片又通過香柏油進(jìn)入物鏡就不發(fā)生散射，結(jié)果，提高了照明度，觀察的標(biāo)本顯得更清晰（圖1.3）（2）分辨率強(qiáng)使用油鏡還能增加顯微鏡的分辨率。由于顯微鏡分辨率與物鏡的數(shù)值口徑（NA）成反比，與波長成正比。因此物鏡的數(shù)值口徑愈大，光波愈短，則顯微鏡的分辨率就愈大。人們?nèi)庋鬯芨惺艿墓獠ㄆ骄L度為0.55μm，加入數(shù)值口徑NA=0.65高倍物鏡，能分辨兩點(diǎn)之間的距離為0.42μm，而小于0.42μm的兩點(diǎn)之間距離就分辨不出，而使用數(shù)值口徑NA=1.25油鏡，能分辨兩點(diǎn)之間的最小距離為0.22μm。因?yàn)椴徽摽偡糯蟊稊?shù)多大，用普通光學(xué)顯微鏡是無法觀察到小于0.2μm的物體，但大部分細(xì)菌直徑在0.5μm以上，故用油鏡就能清晰地觀察到細(xì)菌的個(gè)體形態(tài)。4.注意事項(xiàng)使用顯微鏡應(yīng)注意以下事項(xiàng)：（1）取拿顯微鏡時(shí)，必須用一手握住鏡臂，另一手托住顯微鏡的鏡座，使顯微鏡保持直立的狀態(tài)，切忌用單手提拿。（2）將顯微鏡放置桌上時(shí)，務(wù)必要輕輕放下。（3）顯微鏡的鏡頭必須保持清潔，必要時(shí)用擦鏡紙擦拭鏡頭，不可使用布或一般的紙，以免損傷鏡頭。（4）將顯微鏡輕輕地放置桌上，鏡座后緣位于離桌子邊緣約5cm處。（七）接種箱接種箱分為固體菌種接種箱和液體菌種接種箱兩種。固體菌種接種箱是一個(gè)用木料和玻璃制成或由有機(jī)玻璃焊接而成的密閉小箱。又分為雙人和單人操作箱。箱體可大可小，一般箱體長約143cm，寬86cm，總高154cm，支架76cm。箱的上部左右兩側(cè)各裝有兩扇能啟閉的玻璃推拉門，方便菌種進(jìn)出。窗的下部分別設(shè)有兩個(gè)直徑約13cm的圓洞，兩洞的中心距離為52cm（同肩寬），洞口裝有帶松緊帶的袖套，以防雙手在箱內(nèi)操作時(shí)，外界空氣進(jìn)入箱內(nèi)造成污染。操作時(shí)兩人相對而坐，雙手通過袖套伸入箱內(nèi)。箱兩側(cè)最好也裝上玻璃，箱頂部為木板或玻璃。箱內(nèi)頂部裝有紫外線殺菌燈和照明用日光燈各一支。箱體安裝木板或玻璃均可，但要注意密封。液體菌種接種箱是專為移接液體菌種而設(shè)計(jì)的。比固體菌種箱窄長，單側(cè)兩人操作。內(nèi)設(shè)軌道和紫外線燈，箱兩端開有高25cm，寬10cm的長方形出口，方便菌種進(jìn)出，洞口設(shè)有小推門。進(jìn)出口下處設(shè)蒸汽源，接種時(shí)用蒸汽封住進(jìn)出口，以防雜菌進(jìn)入箱內(nèi)。箱背面設(shè)有液體菌種移接管能進(jìn)入的小孔。接種箱滅菌時(shí)，用紫外線照射30min。如果沒有紫外線燈，可用甲醛和高錳酸鉀（甲醛10～14mL/m3+高錳酸鉀5～7g/m3空間）熏蒸30min以上。使用時(shí)，先將所需物品和工具放入接種箱內(nèi)，然后進(jìn)行藥劑熏蒸和紫外線滅菌，再按無菌操作進(jìn)行接種。接種箱的結(jié)構(gòu)簡單，造價(jià)低廉，易消毒滅菌，操作方便，而且人在箱外操作，氣溫較高時(shí)也能作業(yè)。缺點(diǎn)是進(jìn)出培養(yǎng)基費(fèi)工費(fèi)時(shí)，每次接種前都需要進(jìn)行滅菌。（八）冰箱微生物實(shí)驗(yàn)室的冰箱主要有兩種：普通冰箱和低溫冷凍冰箱。普通冰箱一般都具有兩個(gè)柜子，即鮮藏柜和冷藏柜，溫度分別為4℃和－20℃；低溫冷凍冰箱溫度一般控制在－40～－80℃。它們都可以用于微生物菌種保藏。鮮藏柜常用于保存斜面菌種，保藏時(shí)間在3個(gè)月左右。超過3個(gè)月，斜面就會(huì)變干，因此需要轉(zhuǎn)接菌種。如果要長時(shí)間保存菌種，則需要經(jīng)過處理后，貯藏于普通冰箱的冷藏柜或低溫冷凍冰箱中，它們的保藏時(shí)間較長，一般都在1年以上。微生物實(shí)驗(yàn)室管理一、實(shí)驗(yàn)室管理制度1．實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定儀器配備管理、使用制度，藥品管理、使用制度，玻璃器皿管理、使用制度，并根據(jù)安全制度和環(huán)境條件的要求，本室工作人員應(yīng)嚴(yán)格掌握，認(rèn)真執(zhí)行。2．進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室必須穿工作服，非實(shí)驗(yàn)室人員不得進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室，嚴(yán)格執(zhí)行安全操作規(guī)程。3．實(shí)驗(yàn)室內(nèi)物品擺放整齊，試劑定期檢查并有明晰標(biāo)簽，儀器定期檢查、保養(yǎng)、檢修,嚴(yán)禁在冰箱內(nèi)存放和加工私人食品。4．各種器材應(yīng)建立請領(lǐng)消耗記錄，貴重儀器有使用記錄，破損遺失應(yīng)填寫報(bào)告；藥品、器材、菌種不經(jīng)批準(zhǔn)不得擅自外借和轉(zhuǎn)讓，更不得私自拿出。5．禁止在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)吸煙、進(jìn)餐、會(huì)客、喧嘩，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不得帶入私人物品，離開實(shí)驗(yàn)室前認(rèn)真檢查水電，對于有毒、有害、易燃、污染、腐蝕的物品和廢棄物品應(yīng)按有關(guān)要求執(zhí)行。6．負(fù)責(zé)人嚴(yán)格執(zhí)行本制度，出現(xiàn)問題立即報(bào)告。二、儀器配備、管理使用制度1．食品微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備下列儀器：培養(yǎng)箱、高壓鍋、普通冰箱、低溫冰箱、厭氧培養(yǎng)設(shè)備、顯微鏡、離心機(jī)、超凈臺(tái)、振蕩器、普通天平、千分之一天平、烤箱、冷凍干燥設(shè)備、勻質(zhì)器、恒溫水浴箱、菌落計(jì)數(shù)器、生化培養(yǎng)箱，電位pH計(jì)、高速離心機(jī)。2.實(shí)驗(yàn)室所使用的儀器、容器應(yīng)符合標(biāo)準(zhǔn)要求，保證準(zhǔn)確可靠，凡計(jì)量器具須經(jīng)計(jì)量部門檢定合格方能使用。