生物化學實驗基本操作

一.玻璃儀器的洗滌

在生化實驗中，玻璃儀器潔凈與否，是獲得準確結果的重要環節。潔凈的玻璃儀器內壁應十分明亮光潔，無水珠附著在玻壁上。常用的洗滌方法：1.一般儀器，如燒杯、試管等可用毛刷蘸肥皂液、合成洗滌劑仔細刷洗。然后用自來水反復沖洗，最后用少量蒸餾水沖洗2-3次，倒置在器皿架上晾干或置于烘箱烤干備用。

2.容量分析儀器如吸量管、容量瓶、滴定管等，不能用毛刷刷洗。用后應及時用自來水多次沖洗，細心檢查潔凈程度，根據掛不掛水珠采取不同處理方法。（1）如不掛水珠，用蒸餾水沖洗、干燥，方法同上；（2）如掛水珠，則應瀝干后用重鉻酸鉀洗液浸泡4-6小時，然后按上法順序操作，即先用自來水沖洗，再用蒸餾水沖洗，最后干燥。

4.新購置的玻璃儀器，應先置于1-2%稀鹽酸溶液中浸泡2-6小時，除去附著的游離堿，再用自來水沖洗干凈，最后用蒸餾水沖洗2-3次。

總的原則：凡用過的玻璃儀器，均應立即洗滌，久置干涸后洗滌十分困難。如不能及時洗滌，先用流水初步沖洗后浸泡在清水中，待后按常規處理。

二.吸量管的使用

吸量管和定量吸(移)液器(微量加樣器)均為用來轉移一定體積溶液的量器。㈠吸量管：生化實驗中常用的有三種，最常用的是刻度吸量管。1.刻度吸量管：⑴刻度吸量管的種類：

①按容量規格來分，有0.1、0.2、0.25、0.5、1、2、5、10ml等數種。其精密度按不同的容積可達移取量的0.1-1%。通常將管身標明的總容量分刻為100等分。因此，10ml的吸量管一格代表0.1ml；1ml的吸量管一格代表0.01ml,其余類推。

②按“零”點位置來分，有“O”點在吸量管上端的（即讀數從上而下逐漸增大），也有“O”點在吸量管下端的（讀數從下而上逐漸增大)。兩種標示方法，在使用時各有方便之處。③按刻度方法來分，刻度吸量管也有兩種，一種是刻度刻到尖端的，將液體放出時，應吹出殘留在吸量管尖端的少量液體(我實驗室的刻度吸量管全部是這一種)，另一種是刻度不刻到尖端的。

選管（大小合適）總容量等于或稍大于取液量執管（左球右管）取液（一下一上、管身保持垂直）

插入液面下0.5cm，吸至最高刻度上方1～2cm調準刻度（三點一線）

溶液彎月面、視線和刻度線在同一水平上放液（貼壁放液）需要吹的則吹出，如要求不吹的則讓吸量管尖端停靠內壁約15s，同時轉動吸管，重復一次。放置（放回吸管架）禁止平放在實驗臺面上！洗滌（操作結束后）刻度吸量管的使用

㈡定量吸(移)液器(微量加樣器)：定量吸液器是吸量管的革新產品。由塑料制成。目前，因產地廠家不同其質量、價格差異十分懸殊。1.定量吸液器的優點：使用方便，取、加樣迅速，計量準確，不易破損，能吸取多種樣品（只換吸嘴即可）。

⑵可調式：在一定容量范圍內可根據需要進行調節取加樣量。例如規格為50～200μl的可調式定量吸液器，可以在50到200μl的范圍內根據需要調節成設計容許的各種取加樣容量（60μl、85μl、110μl、170μl、200μl等）。一般來講，固定式吸液器比較準確，可調式吸液器使用較為方便。

⑷排液：將吸液器的吸嘴尖置于加樣容器壁上，用大拇指慢慢地將按鈕按下到第一停止點，停留1秒鐘（粘性較高的溶液停留時間應適當延長）。然后再把按鈕按到第二停止點上，讓吸嘴沿管壁向上滑動。當吸嘴尖與容器壁或溶液離開時，方可釋放按鈕，使其恢復到初始位置。⑸吸液器用后應及時取下吸嘴。將吸嘴用自來水沖洗后浸入盛水的容器內（以防干涸），待實驗結束后集中仔細清洗。

三.溶液的混勻

㈠混勻的目的：⒈使反應體系內的各種物質分子很好地互相接觸，充分進行反應；⒉使欲稀釋的溶液成為濃度均一的溶液。

電動離心機的使用方法：1.將欲離心的液體，置于離心管或小試管內。并檢查離心管或小試管的大小是否與離心機的套管相匹配。2.取出離心機的全部套管，并檢查套管底部是否鋪有軟墊，有無玻璃碎片或漏孔（有玻璃碎片必須取出，漏孔應該用蠟封住）。檢查合格后，將盛有離心液的兩個試管分別放入套管中，然后連套管一起分置于粗天平的兩側，通過往離心管與套管之間滴加水來調節兩邊的重量使之達到平衡。

㈡混勻的方法通常有以下幾種：1.顛倒混勻：用玻璃紙堵住管口，上下顛倒混勻。2.叩擊混勻:左手執試管上端，用右手指輕擊試管下半部，使管內溶液作旋轉運動。3.利用旋渦混合（振蕩）器混勻。4.振蕩混勻：右手執試管上部，手腕抖動混勻。5.不得已時可用干燥清潔的玻璃棒攪勻。

㈢混勻的注意事項：⒈防止盛器內的液體濺出或被污染。⒉嚴禁用手指堵塞管口或瓶口震蕩混勻。實驗一無蛋白血濾液的制備實驗目的：

1.掌握玻璃儀器的洗滌、刻度吸量管的使用、溶液的混勻、離心機的使用等基本操作；2.熟悉制備無蛋白質血濾液的基本方法、原理、臨床意義；3.了解定量移液器的使用。

3.將已平衡的兩只裝有離心管的套管，分別放入離心機相互對應的兩插孔內。蓋上離心機蓋。打開電源開關。逐檔扭動旋鈕，緩慢增加離心機轉速，直至所需數值。達到離心所需時間后，將轉速旋鈕逐步回零，關閉電源，讓離心機自然停止轉動后（不可人為制動），