ICS65.020.2034CCSB0534安 徽 省 地 方 標 準DB34/T3716—2020動物園飼養貓科動物巴貝斯蟲病防治技術規程TechnicalregulationforpreventionandcontrolonfelidbabesiosisatzooTechnicalregulationforpreventionandcontrolonfelidbabesiosisatzoo2020-11-272020-12-27安徽省市場監督管理局發布DB34/T3716DB34/T3716—2020前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件由安徽農業大學和合肥市野生動物園提出。本文件由安徽省林業局歸口。ft本文件主要起草人：徐前明、王根紅、查日華、胡嘉彥、易剛、方海、楊文超、李應列、魯思光、王艷、張志忠、王桂軍、占松鶴、何長生。IIDB34/T3716DB34/T3716—2020DB34/T3716—DB34/T3716—2020本地區最為常見的主要硬蜱中的血蜱屬蜱蟲。動物園飼養貓科動物巴貝斯蟲病防治技術規程范圍本文件規定了動物園貓科動物巴貝斯蟲病的診斷、防治、監測相關技術要求。本文件適用于動物園飼養野生貓科動物巴貝斯蟲病的防治。（NY/T472綠色食品獸藥使用準則《中華人民共和國動物防疫法》(2015年修正)中華人民共和國主席令第二十四號《中華人民共和國獸藥典》2005年版《中華人民共和國獸藥規范》《動物性食品中獸藥最高殘留限量》中華人民共和國農業部公告第235號下列術語和定義適用于本文件。下列術語和定義適用于本文件。3.1傳播媒介vector在脊椎動物宿主之間傳播寄生蟲病的一種低等動物，更常指的是傳播血液原蟲的吸血節肢動物。3.2巴貝斯蟲病Babesiosis3.3綜合防治comprehensivepreventionandcontrol3.4稽留熱continuousfever此型的特點是：高熱持續數日不退，其晝夜溫差不超過1℃。4防治對象包括虎類動物，豹和獅等。1巴貝斯蟲病：高熱（稽留熱）、貧血、黃染、血紅蛋白尿，頜下和胸前等淋巴結腫大，消瘦。5.4.1.2判定標準：在紅細胞內發現典型的蟲體，大小約為2～4μm，有桿狀、梨籽形的，染色后明顯具有染色質團呈藍色，核呈紫紅色的。5.4.1.2判定標準：在紅細胞內發現典型的蟲體，大小約為2～4μm，有桿狀、梨籽形的，染色后明顯具有染色質團呈藍色，核呈紫紅色的。5.4.2分子生物學鑒定對患病動物的血液提取基因組DNA，然后擴增巴貝斯蟲18SRrna基因。套式PCR技術用于擴增18SrRNA基因引物以及反應條件見附錄A。所擴增的PCR產物經1％瓊脂糖凝膠電泳分析，所擴增的基因序列為359bp。PCRITS-1依據蜱蟲ITS-1ITS-1基因B，PCR6防治治療2預防4——體內給藥：應用伊維菌素、多拉菌素或阿維菌素等給藥，皮下注射方式給藥；112～3月重復給藥11.5月進行115d重復1次。可適當調整防治時間。每年4月開始肌肉注射1次，7月份重復1次。實行整群藥浴和給藥預防，不遺漏。依據《中華人民共和國獸藥典》、《中華人民共和國獸藥規范》、《中華人民共和國動物防疫法》、NY/T47250m7監測3DB34/T3716DB34/T3716—2020DB34/T3716DB34/T3716—202054～5次數6～8以貓科動物發生該病的流行病學規律為依據，確定監測時間。抽樣時，樣本數不得低于群體數的35％。（infection100％（curerate）100％C）。44附錄A（資料性）PCR所擴增巴貝斯蟲的18SrRNA基因引物序列和反應條件PCR18SrRNA見表A.1。表A.1所設計的引物序列和套式PCR反應條件引物名稱序列反應條件上游引物（Bab-1-F）5’-AATTACCCAATCCTGACACAGG-3’95℃預變性5min；95℃變性30s，57℃退火30s，72℃延伸40s，30個循環；下游引物（Bab-1-R:）5’-TTTCGCAGTAGTTCGTCTTTAACA-3’72℃延長7min；4℃保存上游引物（Bab-2-F）5’-GACACAGGGAGGTAGTGACAAGA-395℃預變性5min；95℃變性30s，57℃退火30s，72℃延伸40s，30個循環；下游引物（Bab-2-R:）5’-CCCAACTGCTCCTATTAACCATTAC-3’72℃延長7min；4℃保存套式PCR25μLPCR——ddH2O15.85μL；——10×buffer2.5μL；——25mmol/LMgCl21.5μL；——2.5mmol/LdNTP2μL；20pmol/μL1μL；——基因組DNA1μL；——ExTaq酶(1u/μL)0.15μL。25μLPCR——ddH2O15.85μL；——10×buffer2.5μL；——25mmol/LMgCl21.5μL；——2.5mmol/LdNTP2μL；20pmol/μL1μL；——第一次PCR產物DNA1μL；——ExTaq酶(1u/μL)0.15μL。5附錄B（資料性）PCR擴增蜱蟲ITS-1基因（間隔轉錄基因）引物序列和反應條件PCRITS-1見表B.1。表B.1所設計的引物序列和套式PCR反應條件引物名稱序列反應條件上游引物（ITS-F）5′-TCATAAGCTCGCGTTGATT-3′95℃預變性5min；94℃變性45sec，50℃退火1min，72℃延伸90sec，40個循環；72℃10min；4℃保存下游引物（ITS--R:）5′-AGCTGGCTGCGTTCTTCAT-3′PCRPCR25μl10×ExTaqbuffer2.5μL，dNTP(2.5/