臨床微生物學檢驗考試重點知識總結臨床微生物學檢驗考試重點知識總結臨床微生物學檢驗考試重點知識總結資料僅供參考文件編號：2022年4月臨床微生物學檢驗考試重點知識總結版本號：A修改號：1頁次：1.0審核：批準:發布日期：潛伏感染：若宿主與病原體在相互作用過程中暫時處于平衡狀態，病原體潛伏在病灶內或某些特殊組織內，一般不排出體外，稱為潛伏感染。抗生素相關性腹瀉,嚴重時引起偽膜性腸炎、真菌性腸炎、葡萄球菌腸炎等，如果腸道正常菌群破壞后艱難梭菌異常增長并分泌腸毒素，則可損傷腸粘膜引起偽膜性腸炎。病原菌的毒力包括侵襲力和毒素。病原菌在宿主間傳播、侵襲、定植并逃逸免疫的能力，稱為侵襲力。細菌的大小以微米（um）為測量單位。球菌呈圓球形、近圓球形、矛頭狀或腎形。觀察細菌動力可用懸滴法或壓滴法在顯微鏡下直接觀察其運動，也可將細菌穿刺接種半固體培養基觀察動力。鞭毛染色鞭毛可鑒別細菌，糖萼可作為細菌的鑒定和分型。芽孢的功能：⑴熱力、干燥、輻射、化學消毒劑等具有強大的毒抗力。⑵以是否殺死芽孢作為物品消毒滅菌判斷效果的指標。⑶芽孢在菌體的位置和直徑大小隨菌種的不同，這種形態特點有助于細菌鑒別。生長曲線：細菌接種到液體培養基后以二分裂法進行繁殖。以傾注平板法計數孵育后的菌落數可換算出菌落形成單位，連續檢測細菌不同培養時間的CFU，以CFU為縱坐標，培養時間為橫坐標可以作出一條反映細菌生長數的變化規律曲線，稱生長曲線。生長曲線分為四期：⑴遲緩期：是細菌適應環境的過程，為細菌的分裂繁殖做好準備。⑵對數生長期：細菌以最大的速率生長和分裂，細菌數量對數增加。此期細菌代謝活躍而穩定，其大小、形態、染色性和生化反應典型，對外界因素反應敏感，是檢測細菌生物學性狀和進行藥物敏感性試驗的適宜階段.⑶穩定期：生長繁殖菌數和死亡數處于動態平衡，此期細菌合成較多的代謝產物（如抗生素）.⑷衰亡期：細菌死亡速率逐步增加，死亡數大于增加數，一般不用該期的細菌做鑒定和研究工作。細菌的遺傳物質包括染色體、質粒。病毒的基本結構包括核心、衣殼。輔助結構是包膜，包膜對乙醚是敏感的，若呈陽性，則說明有乙醚存在。營養體呈單細胞類型的真菌又稱酵母菌。營養體呈多細胞類型的真菌是由菌絲和孢子交織組成，稱為絲狀菌或霉菌。細菌的科學名稱的生物雙名式，有一個屬名和一個種名構成，屬名在前，是名詞，首字母大寫；種名在后，是形容詞。例如Mycobecteriumtuberculosis（結核分枝桿菌）病原學檢測（標本采集的原則）：⑴盡早采集：一旦懷疑細菌感染，應及時采集標本進行細菌學檢驗。⑵選擇不同采集時機和標本種類：根據臨床癥狀和流行病學資料可預測感染性疾病的病原體，根據病程和感染部位的不同，選擇合適時機采集不同種類標本。⑶在抗生素應用前采集：應盡可能在抗生素留取前標本。⑷遵守無菌操作：應嚴格注意無菌操作，不得被其他部位細菌污染。盛放標本的容器應無菌。⑸正確保存和運送：采集的標本及時運送，如路途遙遠，一般應冷藏（但對腦膜炎和淋病奈瑟菌，需保溫35~37℃）。革蘭染色影響因素①涂片厚薄②酒精脫色時間③染液貯存時間④細菌生長時期抗酸染色法主要用于結核分枝桿菌和麻風分支桿菌的檢查。傾注平板接種法：常用于牛乳、飲水和尿液標本的菌數的測定。氧化—發酵試驗（O—F試驗）：為發酵型，此類細菌無論在有氧或無氧的環境中都能分解葡萄糖，通常為兼性厭氧型。IMVIC試驗：I代表吲哚試驗，M代表MR試驗，V代表VP試驗，C代表枸櫞酸鹽試驗；IMVIC試驗用于腸桿菌和細菌的鑒定。氧化酶試驗：本試驗腸桿菌科陰性，弧菌科、非發酵菌陽性（除個別菌種外）、奈瑟菌屬均陽性。凝固酶試驗用于致病性葡萄菌的鑒定。玻片法凝集試驗原理：取已知型別的抗血清1滴滴在玻片的一端，用接種環取細菌混勻成懸滴。另取生理鹽水1滴滴在載玻片的另一端，用接種環混勻成懸滴，輕輕搖晃玻片，如果加入血清出現凝集顆粒，而對照側仍然均勻渾濁，則凝集陽性。用途：用于細菌菌種鑒定和分型。特點：方便簡單、快速、特異性強。莢膜腫脹試驗原理：有莢膜的細菌如肺炎鏈球菌等，當與相應的抗血清反應時莢膜將明顯增寬，在顯微鏡下可見在藍色細菌周圍有邊界清晰的環狀物，厚薄不等，而對照側無，則為莢膜腫脹試驗陽性。用途：常用于肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌等的檢測。制動試驗：用已知鞭毛抗體與未知細菌鞭毛抗原結合，使鞭毛強制相互粘著失去動力，細菌停止運動，從而特異性的鑒定。常用于運動活躍的細菌鑒定，如霍亂弧菌。病毒的分離培養方法：⑴動物接種⑵雞胚培養⑶組織培養【實驗室主流】27、二倍體細胞培養：廣泛用于病毒分離和疫苗制備。28、紙片擴散法：培養基：pH為7.2~7.4，瓊脂厚度為4mm。對營養要求較高的細菌如鏈球菌、腸球菌屬、流感嗜血桿菌和腦膜炎奈瑟菌等需加入相應的營養添加劑。細菌接種：用0.5麥氏管校正菌液濃度（1.5×108CFU/ml），在瓊脂表面均勻涂布接種3次，每次旋轉平板60°以保證接種菌的均勻分布，各紙片中心相距>24mm，紙片距平板內緣>15m，苛養菌應孵育在含CO2的環境中，腸球菌檢測對苯咗西林和萬古霉素的耐藥性須孵育24h。29、最低抑菌濃度（MIC）：稀釋法所測得的某抗菌藥物能抑制待測菌肉眼可見生長的最低藥物濃度稱為最低抑菌濃度。用途：是體外藥敏試驗衡量細菌對抗菌藥物的敏感指標。30、K-B法影響因素：1.培養基：培養基的質量如pH、硬度、濕度、深度。2.藥敏紙片：藥敏紙片的含藥量、藥敏紙片的保存和厚薄。3.接種菌量4.試驗操作質量：孵育條件和溫度、時間，抑菌圈測量工具等。31、E-試驗：是一種結合稀釋法和擴散法的原理和特點測定微生物對抗菌藥物的敏感度的定量技術，E試條是一種寬5mm，長50mm的商品化塑料試條。32、聯合藥物敏感試驗：體外聯合藥物敏感試驗的意義：1.治療混合性感染2.預防或延遲細菌抗生素耐藥性的發生3.聯合用藥可以減少劑量以避免達到病毒性劑量4.聯合用藥比單一用藥時常常效果更好。抗菌藥物聯合用藥可以出現4種結果：1.拮抗作用2.無關作用3.累加作用4.協同作用。判斷標準：FIC指數<0.5協同作用；0.5~1為相加作用；1~2為無關作用；>2為拮抗作用。33、培養基的一般質量控制：1.外觀：每種培養基均應標注清楚、無渾濁，固體培養基應無菌落生長。2.無菌試驗：培養基制作完成后，應檢測每批培養基的滅菌效果，無菌生長為合格。3.培養基的量：斜面培養基的長度為試管長度的2/3，MH平板的厚度為4mm，其他平板厚度一般為3mm。4.培養基pH：配制好的培養基pH應與規定的pH相差±0.2以內。5.性能試驗：每一批新配制的、新購入的培養基，均應用已知性質的標準菌株進行預測，合格方可使用。34、滅菌器：用生物指示劑嗜熱脂肪芽孢桿菌ATCC7953和ATCC12980的培養基或菌片。35、生物安全水平及適用范圍：⑴一級生物安全防護實驗室BSL-1：是微生物基礎實驗室，進行試驗用的都是最低等級的污染物或安全的微生物，并且完全符合標準實驗室操作，如枯草芽孢桿菌等。⑵二級生物安全防護實驗室BSL-2：適用于對人或環境具有中等潛在危害的微生物，屬于第三類病原微生物的如：沙門菌屬、乙型肝炎病毒等的試驗操作。⑶三級生物安全防護實驗室BSL-3：操作對象一般是可以經呼吸道傳播的危險微生物，如：結核分枝桿菌。⑷四生物安全防護實驗室級BSL-4：進行試驗研究的物質是一些非常高危險性并且可以致命的有毒物質，可以通過空氣傳播并且現今并沒有有效的疫苗或者治療方法來處理，如:出血熱病毒。36、醫院感染：又稱醫院獲得性感染，包括在醫院獲得而出院后才發生感染，但不包括入院前已存在的感染或入院時已處于潛伏期的感染。探視者在醫療機構中獲得的感染、工作人員的職業性感染也屬于醫院感染，入院48h后發生的感染通常認為是醫院感染。37、醫院感染病原體特點：1.病原體以細菌最多見，真菌感染明顯增多2.大多數為條件治病微生物3.多數病原菌對抗菌藥物具有耐藥性或多重耐藥4.免疫功能低下患者可以感染多種病原體常見的醫院感染：泌尿道感染38、血培養的指征：1.當患者發熱≥38℃或低體溫≤36℃2.外周血白細胞計數超過10×10⑨/L（特別是存在核左移時），或絕對粒細胞減少3.合并有明顯感染癥狀體征、伴有感染病灶存在時，就應該采血進行血液細菌培養39、血液標本采集：.①采血時機：理想的血液細菌培養應該是患者接受抗生素治療之前進行，故采集血培養應盡可能在患者寒戰或發熱前②采血部位：應行徑皮外周靜脈穿刺采血，應嚴格無菌操作③采血份數：對每名患者應至少從不同部位采集至少2~3份，對懷疑亞急性感染性心內膜炎的患者，應間隔1h，連續采集3份血進行培養④采血量：通常采血量應是培養基的1/5或1/10，成人患者每次最好采集10~15ml；對于兒童患者，每瓶至少注入1~5ml。40、全自動血培養儀的檢測原理：微生物在生長過程中消耗培養基內的營養物質產生CO2，通過CO2感應器反映瓶內CO2濃度變化，以此來判斷瓶內有無微生物生長。檢測方法：放射性14C標記技術，特殊CO2感受器均質熒光等檢測培養基中PH值，氧化還原電勢以判斷血液或其他無菌體液中有無細菌。41、用于常規細菌檢測的腦脊液應為>或=1ml；用于檢測抗酸菌的腦脊液量應為>或=5ml42、皮膚和軟組織感染的細菌學檢查：封閉性A、封閉性膿腫：局部消毒后，用注射器抽取膿液和膿腫標本置于厭氧運送培養基內送檢B、放線菌感染標本：選取流出膿液中的額“硫磺樣顆粒”置于無菌試管內送檢。急性呼吸道感染約有70%~80%由病毒引起。痰液標本的采集法中的氣管采集法：通過支氣管鏡用保護性導管支氣管刷采取呼吸道標本，最適合進行細菌培養。痰液標本的檢查方法：確定標本是否適合做細菌培養，在低倍視野中鱗狀上皮細胞<10個，或白細胞>25個。常規糞便培養，同時選用腸道強選擇性培養基（SS平板或XLD或HE）和弱選擇性培養基（如Mac或EMB或中國藍平板）金黃色葡萄球菌感染為黃綠色水樣糞便膀胱穿刺法：常采用恥骨上膀胱穿刺抽取尿液法，該方法是目前判斷膀胱內有無細菌感染的金標準，常在懷疑厭氧菌感染時采用。尿液中一般細菌及假絲酵母菌培養菌落計數>105CFU/ml提示可能為泌尿系統感染。淋病奈瑟菌、衣原體、生殖道支原體、杜克嗜血桿菌的分離培養是淋病、生殖道沙眼衣原體感染、生殖道支原體感染、軟下疳實驗室診斷的“金標準”，陽性者可確診。葡萄球菌屬：多數菌株耐鹽性強；凝固酶陰性葡萄球菌（CNS）近年來成為醫院感染的主要病原菌。鏈球菌屬：A群鏈球菌也稱化膿性鏈球菌，可致急性腎小球腎炎、風濕熱等變態反應性疾病；草綠色鏈球菌偶可引起亞急性細菌性心內膜炎。腦膜炎奈瑟菌引起化膿性腦脊髓膜炎（流腦）；淋病奈瑟菌引起急性淋病性尿道炎。淋病奈瑟菌的培養：標本應接種于預溫的巧克力平板，5%~10%CO2培養，35~37℃，24~48h。奈瑟菌的特征：革蘭陰性球菌，腎形或咖啡狀，成雙排列，凹面相對。氧化酶和觸酶陽性，淋病奈瑟菌只分解葡萄糖，產酸不產氣。腸桿菌科生物學特性：①革蘭陰性桿菌，無芽孢，有菌毛，多數有周身鞭毛。②需氧或兼性厭氧，營養要求不高，在普通培養基上生長良好，血平板生長為灰白、濕潤、光滑的菌落，在腸道選擇性培養（MAC、EMB、SS）上，因乳糖分解或不分解，生長為不同特征的菌落。③生化反應活躍，發酵葡萄糖，氧化酶陰性（鄰單胞菌除外），觸酶陽性（痢疾志賀菌除外），能還原硝酸鹽為亞硝酸鹽。④腸桿菌科抗原構成主要的有菌體抗原（O抗原）、鞭毛抗原（H抗原）、表面抗原和菌毛抗原等；表面抗原可阻斷O抗原與相應抗體之間的反應，加熱去除表面抗原能消除這種阻斷作用。⑤腸桿菌科細菌抵抗力不強，大多數腸道致病菌不分解乳糖，在Mac平板出呈無色菌落。大腸埃希菌對青霉素、第1、2、3代頭孢菌素及單環菌素耐藥，其耐藥性主要由該菌產生超廣譜β—內酰胺酶（ESBL）所致。副傷寒可于第1周采取血液，第2、3周取糞便，第3周取尿液，全病程取骨髓做培養。肥達試驗：用來輔助診斷傷寒和副傷寒。志賀菌屬的微生物學檢驗：㈠標本采集㈡分離培養：將標本接種于MAC/EMB、SS，35℃培養18~24h觀察結果，有無色半透明菌落生長，應作進一步檢查。㈢鑒定：氧化酶陰性，KIA：KA——，不產生脲酶，動力陰性，IMViC為—/++——。㈣血清學鑒定：首先志賀菌屬4種多價血清做玻片凝集試驗，如凝集，再進一步做血清定型鑒定。變形桿菌屬的鑒定：迅速分解尿素。鼠疫是我國甲類傳染病。小腸結腸炎耶爾森菌為兼性厭氧菌，在4~40℃均能生長。非發酵革蘭陰性桿菌是一群不發酵葡萄糖或僅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厭氧、無芽孢的革蘭陰性桿菌；多為需氧菌，菌體直而細長，絕大多數動力陽性，最適生長溫度一般為30~37℃，多為條件致病菌；在醫院感染中銅綠假單胞菌、不動桿菌為主要。銅綠假單胞菌可導致肺囊性纖維化患者的潛在感染，燒傷病人。銅綠假單胞菌的微生物學檢驗：⒈標本采集：不同的標本，如痰、傷口分泌物、尿液、膿及穿刺液、血液、腦脊液、胸腹水、關節液。⒉直接顯微鏡檢查：分泌物直接涂片革蘭染色鏡為革蘭陰性桿菌。⒊分離培養：將標本接種血平板，35~37℃，18~24h，典型的銅綠假單胞菌落，中等大小，表面菌屬光澤。⒋鑒定：產生水溶性藍綠色、特殊的氣味、氧化酶試驗陽性，作非發酵菌微量生化鑒定。不動桿菌屬為一群不發酵糖類、氧化酶陰性、硝酸鹽還原陰性、不能運動的革蘭陰性桿菌。霍亂弧菌的生物學特性：菌體一端有單鞭毛，采患者“米泔水”樣糞便或培養物做懸滴觀察，細菌運動非常活潑，呈穿梭樣或流星狀，革蘭染色鏡檢，可見大量革蘭陰性弧菌，呈魚群樣排列。霍亂弧菌現分為155個血清群，其中僅O1群霍亂弧菌和O139群霍亂弧菌引起霍亂。初次分離常選用PH8.5的堿性蛋白胨水進行選擇性增菌，在TCBS選擇基上，發酵蔗糖產酸，菌落呈黃色，在含亞碲酸鉀的選擇性培養基上如4號瓊脂和慶大霉素瓊脂平板，可將碲離子還原成元素碲，形成灰褐色菌落中心。霍亂弧菌的微生物學檢驗：⒈標本采集：糞便。⒉直接顯微鏡檢查：⑴涂片染色鏡檢鏡檢有“魚群”樣排列的革蘭陰性弧菌。⑵動力和制動試驗直接取“米泔水”樣便制成懸滴（或壓滴）標本，用暗視野或相差顯微鏡直接觀察呈穿梭樣運動的細菌。⒊分離培養：將標本直接接種于堿性胨水，35℃，6~8h后，接種至TCBS平板或4號瓊脂平板或慶大霉素瓊脂平板，35℃、12~18h觀察菌落形態。應使用O1群和O139群霍亂弧菌的多價和單價抗血清進行凝集，結合菌落特征和菌體形態，作出初步判斷。⒋鑒定⒌生化鑒定、血清學分型、生物學分型。副溶血弧菌：菌體一端有單鞭毛。神奈川現象是鑒定副溶血弧菌致病菌株的一項重要指標。幽默螺旋桿菌是人類胃炎、十二指腸潰瘍和胃潰瘍的重要病原菌。衛星現象：將流感嗜血桿菌與金黃色葡萄球菌共同培養時，因金黃色葡萄球菌能合成較多的V因子，靠近金黃色葡萄球菌周圍的流感嗜血桿菌菌落較大，距離越遠的菌落越小，這種現象稱為衛星現象。流感嗜血桿菌根據莢膜多糖抗原的不同分為a，b，c，d，e，f六個血清型，其中b型的致病性最強，f型次之。百日咳鮑特菌常用的培養基為鮑—金培養基（B—G）。軍團菌屬常用的培養基是BCYEa培養基，不能在血平板上生長。串珠試驗將待檢菌種于含0.05~0.5U/ml青霉素的培養基中35℃培養6h后，炭疽桿菌形態發生變化，菌體成為大而均勻的圓球狀成串排列，為炭疽芽孢桿菌特有的現象。蠟樣芽孢桿菌主要的致病物質是腸毒素，引起食物中毒。加特納菌屬的鏡檢，陰道分泌物直接涂片，革蘭染色可見上皮細胞（細胞漿呈紅色，細胞核為藍紫色）被大量革蘭陽性或染色不定小桿菌覆蓋，導致細胞邊緣不清，稱為線索細胞。白喉棒狀桿菌在粘膜局部定殖并產生外毒素，引起局部炎癥和毒血癥，粘膜上皮細胞滲出的纖維蛋白和局部細菌、炎癥細胞、壞死組織凝結在一起形成灰白色膜，稱為假膜。白喉棒狀桿菌的生物學檢驗：㈠標本采集：從疑似假膜的邊緣采集分泌物。㈡直接顯微鏡檢查，將標本直接涂片，分別做革蘭染色和異染顆料染色，鏡檢發現革蘭陽性棒狀桿菌，形態典型且有明顯異染顆料。㈢分離培養：標本分離可用亞碲酸鉀血平板、血平板，純培養用呂氏血清斜面，35~37℃,18~24h，呈黑色菌落。㈣鑒定㈤毒力試驗結核分枝桿菌在液體培養基上生長迅速，有毒力的菌株在液體培養基中呈束狀生長。結核分枝桿菌對理化因素有較強的抵抗力，故實驗室常用酸或堿處理標本以消化標本中的粘稠物質并殺死雜菌。結核菌素是結核分枝桿菌的菌體成分，有兩種：一種是舊結核菌素（OT），另一種是純蛋白衍生物（PPD），目前都有PPD。PPD有二種：結核分枝桿菌制成的PPD—C和卡介苗制成的BBC—PPD，每0.1ml含5個單位。試驗時，取0.1mlPPD注射兩前臂皮內，48~72h后，紅腫硬結超過5mm者為陽性，表明感染過結核分枝桿菌或接種過卡介苗或細胞免疫正常。麻風分支桿菌的人工培養迄今為止尚未成功。厭氧菌分為：芽孢厭氧菌和無芽孢厭氧菌。厭氧菌感染的臨床及細菌學特征：⒈感染局有其他產生⒉發生在粘膜附近的感染⒊深部外傷⒋有特殊的分泌物⒌某些抗生素治療無效感染⒍細菌學特征厭氧菌的常用培養方法：厭氧罐（盒）培養法、厭氧氣袋法和厭氧手套箱培養法。產氣莢膜梭菌在厭氧血平板上培養，多數菌株有雙層溶血環，可作為產氣莢膜梭菌的鑒定之一。艱難梭菌在CCFA平板上，形成較大的表面粗糙、邊緣不齊的黃色菌落，在紫外線照射下，可見黃綠色熒光。脆弱類桿菌群，臨床標本中為最多見。鉤端螺旋體屬在血清學診斷中，目前常用顯微鏡凝集試驗。密螺旋體屬血清學診斷：⑴非密螺旋體抗原試驗：國際上常用性病研究實驗室（VDRL），國內常用不加熱血清反應素試驗（USR）和快速血漿反應素環狀卡片試驗（RPR，TRUST試驗。⑵密螺旋體抗原試驗肺炎、支氣管炎：肺炎支原體泌尿生殖道感染：解脲脲原體、人