實驗三石蠟切片法(三)

——切片、貼片

一、實驗原理

切片就是把包埋好的材料塊用切片機切成所需要的厚度的切片帶。貼片是用粘貼劑把切片平鋪貼在載玻片上，以便于染色。二、實驗用品

(一)器材切片機，切片刀，磨刀機或磨刀石，單面刀片，展片臺，酒精燈，溫度計，蠟鏟，臺木，毛筆，蠟帶盤，載玻片，鑷子。(二)試劑粘片劑，氯仿。(三)材料已包埋好的蠟塊。三、實驗程序

(一)切片(二)貼片附：常用的粘片劑1．蛋白甘油亦稱為梅氏蛋白(Mayer'salbumen)

蛋白50mL

甘油50mL

水楊酸鈉(防腐劑)lg2．郝普特氏明膠粘片劑(Haupt'sgelatinefixative)明膠lg蒸餾水100ml石炭酸2g甘油15mL實驗四石蠟切片法(四)

——染色、封藏

一、實驗原理1．染色的一般原理細胞和組織的不同結構之所以能被染成各種不同顏色，是由于染料對它們所起的物理或化學的綜合作用。(1)物理作用：滲透、吸收、吸附(2)化學作用2．封藏的原理封藏是使已經透明的材料，保存在適合折光率的封藏劑中(如封藏劑加拿大樹膠的折光率為1.52，它與玻璃的折光率1.51很接近)，使材料能在顯微鏡下清晰的顯示出來，并能長期保存。下面以海登漢鐵礬蘇木精染色法為例介紹如下。

(1)將用二甲苯脫蠟的切片放入二甲苯和純酒精的混合液中浸10min。(2)用純酒精處理5～10min。(3)放入95％、90％、80％、70％、50％、30％的酒精中各2—5min。(4)水洗1min。(5)用2％或4％鐵明礬水溶液媒染0.5—2h。(6)水洗5min。(7)蒸餾水中更換數次約3～5min。(8)0.5％蘇木精中染色1-24h。附：常用的染料的性能及其配制方法

生物學上用的染料，按其來源可分為兩大類，一類是天然染料，一類是人工染料。天然染料是從動植物體中提取出來的，日常用的有蘇木精、洋紅、地衣紅、靛青等。最早的人工染料是由苯胺制成的，所以常稱為苯胺染料。但以后多數的人工染料是由煤焦油中提取出來的。下面介紹常用的染料的性能及其配制方法。常用的蘇木精配方有：(1)海登漢(Heidenhain)氏鐵蘇木精甲液(媒染劑)鐵明礬(即硫酸鐵銨)2－4g蒸餾水100ml(甲液必須在用時配制，保持新鮮)乙液(染液)蘇木精0.5g純酒精或95％酒精10mL蒸餾水90mL蘇木精溶于酒精中，然后加蒸餾水混合，置于廣口瓶內，用紗布縛住瓶口，靜置使其氧化，4周成熟后使用。(2)埃利希(Ehrlich)氏蘇木精：蘇木精1g純酒精(或95％酒精)50ml冰醋酸5ml甘油50ml鉀礬(硫酸鋁鉀)約5g(飽和量)蒸餾水50ml配法：①將蘇木精溶于約15mL的純酒精中，再加冰醋酸后攪拌。②當蘇木精溶解后即將甘油倒入并搖動容器，同時加入其余的酒精。③將鉀礬在研缽中研碎并加熱，然后將它溶解于水中。④將溫熱的鉀礬溶液一滴一滴地加入上述染液中，并隨時攪動。⑤此液混合完畢，將瓶口用一層紗布包著小塊棉花塞起來，放在暗處通風的地方成熟時間約3～4周。若加入0．2g碘酸鈉，可立刻成熟。此液穩定而染色均勻，染核效果良好，不會發生沉淀，長期貯備無妨。此液可分別與伊紅(enosin曙紅)，橙黃G，番紅進行二重染色。(3)哈里斯(Harris)氏蘇木精：甲液：蘇木精0.5g95％酒精5ml

乙液：鉀礬或銨礬10g蒸餾水100ml氧化汞0.25g冰醋酸幾滴配法：①將0.5g蘇木精溶解于5ml95%酒精中。②溶解10g鉀礬或銨礬于100ml的蒸餾水中，并加熱煮沸。③將上述兩液混合煮沸0.5min，并加入氧化汞。④移入冷水中冷卻。⑤冷卻液過夜后用雙層濾紙過濾，并加入幾滴冰醋酸。2．洋紅(Carmine)

洋紅又稱卡紅。是從一種熱帶昆蟲胭脂蟲的雌性蟲體中提取的。洋紅為核的優良染料，染色標本不易褪色，用作切片或組織塊染色均適宜，特別適宜于小形材料的整體染色。(2)明礬洋洋紅：洋紅lg銨明礬(硫酸鋁銨)10g蒸餾水100mL先將銨明礬溶于蒸餾水，再將洋紅加入銨明礬水中煮沸，用玻棒充分攪和使洋紅溶解，冷卻過濾后，加入少許防腐劑。(3)醋酸洋紅

洋紅4～5g冰醋酸45ml蒸餾水55ml將洋紅粉加入水及醋酸中，在小火焰上加溫，煮沸用玻棒攪和使其溶解，冷卻后過濾，用時加入99ml蒸餾水稀釋。(2)堿性品紅(basicfuchsin)：堿性品紅為強力的細胞核染料，對粘液、彈性纖維、輪藻、原球藻及細菌等的染色都有較好的效果。堿性品紅可溶于酒精和水，在酒精中的溶解度大。(3)美藍(亞甲藍methyleneblue)：美藍的染色范圍很廣，是重要的生物染料之一，美藍可用于神經組織和核仁的活體染色，也是最常用的血液染色劑。

(4)結晶紫(crystalviolet)：結晶紫應用范圍較廣，動物、植物、微生物方面的材料都可使用。結晶紫溶于水和酒精，配制方法可因用途而異。

(2)酸性品紅(acidfuchsin)：酸性品紅廣泛地應用于動物材料的染色，可染動物細胞的細胞質、細胞核。也可染植物組織，對髓部薄壁細胞的染色具有良好的作用。還可染胚囊、花粉以及寄生于動、植物組織中的霉菌等。

(3)伊紅(曙紅)(eosin)：伊紅是最優良的動物細胞染料，常與蘇木精對動物組織進行對比染