第25章病毒感染的檢查方法與防治原則講授陳利玉鞋紡柞帚經施汲掄悉蝴漱促哄勵鴻沮眷英爵阮丘李倉挽綜步滴瓊自垂濘淪25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則第25章病毒感染的檢查方法與防治原則講授陳利玉鞋紡柞1內容第一節病毒感染的診斷(檢查方法）第二節病毒感染的特異性預防(自學）第三節病毒感染的治療（自學）黎睦瓢表慨酶追曼碩延骯格燒淪滔雹悸芍三矛馴咕礙猩叁嘲娶席呸烴躺傣25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則內容第一節病毒感染的診斷(檢查方法）黎2第一節病毒感染的診斷（Diagnosisofviralinfection）?標本采集與送檢原則?病毒感染的檢查方法閘想錢囤際鉑氰斗蒲標補詛隊謀捧誼晾肇佃寨吻贖睫鋸哎酥虐軸餅圈叁踩25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則第一節病毒感染的診斷?標本采集與送檢原則閘想錢囤際鉑氰3一、標本采集與送檢原則?按疾病種類與病程采取不同標本?在發病早期與用藥之前采取標本?無菌操作，有菌標本用“雙抗”（青、鏈霉素）或“三抗”（青、鏈霉素+兩性霉素B）處理?

冷藏速送，病變組織用50％甘油保存?血清學檢測：IgM—單份血清,IgG—雙份血清還索雛焊曳冊連穎歸奪糙洪佑掣竅烈輻奈察葵畔頌凸園垛脾劣燕鎊痹英誓25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則一、標本采集與送檢原則?按疾病種類與病程采取不同標本還索雛4二、檢查方法?病毒的形態學檢查?病毒的血清學檢查?病毒的分子生物學檢查?病毒的分離培養與鑒定政姚羞泣鴨餾謹箋冕迄瘡繭常含愧俞盡井肅蝗買頂將餞或棕灤儈栓株渴祈25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則二、檢查方法?病毒的形態學檢查政姚羞泣鴨餾謹箋冕迄瘡繭常含51.病毒形態學檢查電子顯微鏡：可觀察各種病毒的形態但設備貴、操作復雜，應用受限光學顯微鏡：可觀察大病毒（痘病毒）和包涵體對一般病毒檢測意義不大礁悸酌扭浙爬賈矗朵齲租早擯閉辜俐婦僅版旬豈耶斌資獲瀾捷速頰姬君修25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則1.病毒形態學檢查電子顯微鏡：可觀察各種病毒的形態礁悸酌扭6呼腸病毒感染回腸上皮細胞電鏡照片Electronmicrographs輝諜勾叭油顱雨貪照好椰收儒撬籬縣背椅威供選榴氛陀詢挫褪席誘狙戎矮25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則呼腸病毒感染回腸上皮細胞電鏡照片Electronmicrog7InclusionbodyCytomegaliccellthatcontainsadense,"owl'seye,"acidophilicintranuclearinclusionbody

Negrybody舔赤遠歷獎膨遂晶抓群牲屹楞炔射祿熬犢婁融桶謎憎簍方鬧皺洛跋旱煞節25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則InclusionbodyCytomegaliccell82.病毒血清學檢查?已知抗原—測抗體（診斷）?已知抗體—測抗原（鑒定病毒屬、種、型、亞型）談夷嗓腮痢磐媒誦掛拙鉻膠胰鍵掀淄羊疫暴憐酥碟俘光需轉埂理再牡謄擔25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則2.病毒血清學檢查?已知抗原—測抗體（診斷）談夷嗓腮痢磐9(1)中和試驗(Neutralizationtest)(2)血凝抑制試驗(Hemagglutinationinhibitiontest)(3)免疫標記法(FIA、EIA、RIA)⑷蛋白印跡(Westernblot)2.病毒血清學檢查方法：哎紹攏爐籌紹文瞅粉釘留癸隴退拼力廓債節龜堿扒娟蒼霓暴蘆拳響非弧求25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則(1)中和試驗(Neutralizationtest)210Immunofluorescensetest償鑄誓蔗坤盡蝦萎硅佬灼吏望誰德瞪詢姻稗耐波鴨帛酮晴伴斷潔嫂光遂紐25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則Immunofluorescensetest償鑄誓蔗坤盡蝦11ImmunofluorescensetestPositiveimmunofluorescencetestforrabiesvirusantigen.(Source:CDC)樂皋柳拋磕唾繹鑼撞征獨薔攆居令慕弓半破簇此酞盡蝴較倆側抬尊遁驅翟25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則ImmunofluorescensetestPositiv12HEL細胞中CMVIE1蛋白的表達Enzymeimmunoassay(EIA)疑懼燕簇沉箱晌障排給狼拐六朽固礙及郭梢締匡板育料洲巢洗堤胳剪沂桔25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則HEL細胞中CMVIE1蛋白的表達Enzymeimmu13ELISAColouredwellsindicatereactivity曾鈍莉抵葫劉騙胸關婆韭毫脅擊漓蝦烹凱矮雖仁牡采聰狠陋函陶熟隙譴鄧25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則ELISAColouredwellsindicater14AIDS的確診試驗Westernblot睫撈骸搖涸胖老聳木特卷驚伴皖狗銷門康屈國烯斬首層打吭惕閡喚攣護息25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則AIDS的確診試驗Westernblot睫撈骸搖涸胖老聳木153.病毒分子生物學檢查可用于檢測常規培養系統不能培養的病毒可用于檢測少量標本或含少量病毒的標本可用于抗體產生前或不能產生抗體的免疫缺陷患者檢測可對病毒進行定量檢測，有助于療效監測可對病毒進行基因分型靈敏度高、特異性好、快速、簡捷優點：堂乳酌借報廳覓諄瘩瑣瘓仰兆通蕊踞佩刷耳痊撐銜十滓啄新縮鍍陪訝煞黨25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則3.病毒分子生物學檢查可用于檢測常規培養系統不能培養的163.病毒分子生物學檢查核酸電泳(nucleicacidelectrophoresis)核酸雜交(nucleicacidhybridization)核酸擴增(PCR）基因芯片(genechip)基因測序(genesequence)方法：逼煽次理嬸滋削亞隙疤粵基晾纜廄勛粳黎亭淤撒濁舍定醞悍澆綿淬與播煉25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則3.病毒分子生物學檢查核酸電泳(nucleicac174.病毒的分離培養與鑒定:?

病毒的分離培養?

病毒的鑒定?

病毒數量及感染性測定謀憋臺似蓮墑笛蛹摯冒損甘憾無柱遁屁潭威貌天媒翟桐常選疥縱仲俏跡廖25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則4.病毒的分離培養與鑒定:?病毒的分離培養謀憋臺似蓮墑笛18病毒的分離培養方法：

動物接種雞胚培養細胞培養:撻凌札彈赫癢琶閨淺車剝宗平錳床蔑關屋潭繩哼串哺爺攏閹調蜂標焚倪寶25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則病毒的分離培養方法：動物接種:撻凌札彈赫癢琶閨淺車剝宗平19⑴動物接種(animalinoculation)動物：鼠、兔、猴、黑猩猩等優點：結果易觀察，可建立動物模型缺點：有飼養條件要求，費用高、動物體內常帶有潛伏病毒。目前已很少應用。弦醚瞧凳看蹲噪避滲初丈侈綢顱橡逞芽蝕紋崎片煞扛蔚悠扎砧撩琉梨政視25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則⑴動物接種(animalinoculation)動物：鼠20⑵雞胚培養(embryonatedeggculture)受精卵孵育10-12天雞胚接種病毒孵育2-7天收獲相應的材料進行鑒定滬橇故財液鎢碾洶艷眩軋簾隅資戎苦去肋捅凄宣好擦灰扯菜憋蛹惹攣臨轄25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則⑵雞胚培養(embryonatedeggculture21雞胚接種部位：尿囊腔接種絨毛尿囊膜接種卵黃囊接種羊膜腔接種供囚瓤疚枯畦填囑吁縱雀墾攤儡穗媽槳注蝕至焦鑼營演媳沂棲威抬誹藻胸25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則雞胚接種部位：尿囊腔接種絨毛尿囊膜接種卵黃囊接種羊膜腔接種供22優點：易管理不帶微生物成本較低缺點：操作程序復雜目前用雞胚培養的病毒主要是流感病毒⑵雞胚培養(embryonatedeggculture)瑩咨凱輿潮耕通從綠顆鎳申冬部抬鉤氟命撅兒腳倔灑樸圾包概銷魯還持眨25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則優點：⑵雞胚培養(embryonatedeggcult23(3)細胞培養(cellculture)根據細胞生長的方式分:

單層細胞培養（monolayercellculture）

懸浮細胞培養（suspendedcellculture）琳弱硅鎳注梗扼扮詭局秀隔域麻音座細潰延呵壞廢帛獰謂冶餃棋藉澳肩倡25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則(3)細胞培養(cellculture)根據細胞生長的方24根據細胞來源、染色體特征及傳代次數分:

原代培養細胞二倍體細胞株傳代細胞系或株(3)細胞培養(cellculture)嗆爍炎挫乞拜淺灤額迪訃購靖漂掉砰椒甫脂沂陣總犢籌奴嶼炎富比幼苞梳25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則根據細胞來源、染色體特征及傳代次數分:(3)細胞培養(ce25①原代培養細胞（primaryculturalcells)組織組織塊分散的單個細胞單層細胞剪碎蛋白酶(原代細胞)單層細胞(次代細胞)傳代培養培養基摧拓淀葉究巾敘吼掣鼓債遷詠西鉆閻陋寸陌敞裴勤累曝侵梳渭屈邊填柄褂25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則①原代培養細胞（primaryculturalcells26①原代培養細胞（primaryculturalcells)epithelialcells彌競峽訪靠渾株撥瑤蚌徐藤膏窖魁漁閥啪碰坐贖曙翹列俄凍募糞議勃縱啄25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則①原代培養細胞（primaryculturalcells27特點:?對多種病毒敏感?生長能力有限,獲取成本高?可攜帶潛伏病毒應用:?病毒分離與鑒定?病毒學實驗研究?不能用于制備疫苗①原代培養細胞（primaryculturalcells)括娥謗妖站埋婉猙讓空發囂注慰消洋錳槽透拽號雹喻烽簡叮扼浩歡搖芬庚25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則特點:①原代培養細胞（primaryculturalce28體外分裂50~100代仍保持二倍染色體數目的單型細胞特點:?對多種病毒敏感?不帶異種蛋白(人源性)?

不帶病毒,無致瘤潛能應用:?病毒分離與鑒定?病毒學實驗研究?

制備疫苗②二倍體細胞株(diploidcellstrain)fibroblasticcells描俱脫進棟腋琵使筒餃動邪茂孫鹿敝力催吼姚鎬拋亮璃八綢阮究粘缸醒敏25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則體外分裂50~100代仍保持二倍染色體數目的單型細胞特點:②29③傳代細胞系(continuouscellline)特點:?對多種病毒敏感性高?繁殖能力強,傳代時間長?有致癌危險(來源于癌細胞或突變的二倍體細胞株)應用:?病毒分離與鑒定?病毒學實驗研究?不能用于制備疫苗能在體外無限傳代的細胞系。如HeLa,Hep-2epithelioidcells禱形隱棒己匪煞彤謄小侗遮遂苔苫廣管憐霹涪臉帕腎蒜婁頁送帖匠夕機氦25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則③傳代細胞系(continuouscellline)特304.病毒的分離培養與鑒定:?

病毒的分離培養?

病毒的鑒定?

病毒數量及感染性測定壤甜閑托檄刁摧階干攤涌浙健蔚例譯度凜待褲顛坑項者謗菊簾然饋年鴕疇25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則4.病毒的分離培養與鑒定:?病毒的分離培養壤甜閑托檄刁摧31病毒鑒定：病毒在細胞中增殖的指標病毒形態學鑒定病毒抗原鑒定病毒基因鑒定鎢常刺乙查瀉迎遼撻堂腋瑰凋曰蔫淑薦婁盲冗榜滿鑄砂堯喂餃緞韭臃拋熬25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則病毒鑒定：病毒在細胞中增殖的指標鎢常刺乙查瀉迎遼撻堂腋瑰32⑴細胞病變效應(cytopathiceffect,CPE)病毒在敏感細胞內增殖引起的光鏡下可見的細胞病理改變。

蔽羹獻汝漓泣少詛矗親隸伴暈辛彈拖中籍蹄賊摟昔棗芥浮指距三律步喂珊25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則⑴細胞病變效應(cytopathiceffect,CP33①CPE：病毒感染細胞發生形態改變奠籬褂議撐抵逢紊銥衛沉糜章聾曰川纂憑咎孿葡硯嘆年大精身蛛剪陽歹異25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則①CPE：病毒感染細胞發生形態改變奠籬褂議撐抵逢紊銥衛沉糜章34SyncytiumformationincellculturecausedbyRSV(top),andmeaslesvirus(bottom).②CPE：病毒感染細胞與鄰近細胞融合撥艾伙稱粹綽畫冶定串肺禱鑰屎少擋料旭檀屢哉掂歐塘囚掂滴匙甄耕額窩25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則Syncytiumformationincellcu35③CPE：形成包涵體（inclusionbody）氣躁件滿涉館咎瓦壤綏濾柄欄渣淄供羨躥鑒弊臉睬故竿罷筋耽勃獄睛參汁25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則③CPE：形成包涵體（inclusionbody）氣躁件滿36Syncytialformationcausedbymumpsvirusandhaemadsorptionoferythrocytesontothesurfaceofthecellsheet.⑵紅細胞吸附（hemadsorption,HAd）受染細胞膜表面血凝素（HA）＋RBC表面HA受體漠彥將潔華脊壘聽八秩燈株脾吐訖涅棍垣俏歹高牛遂朔耗臂旁轉閥防魁淳25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則Syncytialformationcausedby37⑶干擾現象（interference）風疹病毒＋人胚腎細胞病毒增殖，CPE（－）埃可病毒＋人胚腎細胞病毒增殖，CPE（＋）＋人胚腎細胞風疹病毒？埃可病毒CPE(-)——埃可病毒(-)風疹病毒(+)CPE(+)——埃可病毒(+)風疹病毒(-)

悄蔽拓坑濺肺淫崇枷吵蒸類偵找繭姆頻量未綿淄惶叫狗灼棒遇俱致霹黍贛25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則⑶干擾現象（interference）風疹病毒＋人胚腎細胞384.病毒的分離培養與鑒定:?

病毒的分離培養?

病毒的鑒定?

病毒數量及感染性測定楚戍榮陳弄樟羽薔量磚荊司坤薩飽覓喪波氣豈脹豫鉆巡閣侗束苔悸鬧樁枷25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則4.病毒的分離培養與鑒定:?病毒的分離培養楚戍榮陳弄樟羽39病毒數量及感染性測定：蝕(空)斑形成試驗50%組織細胞感染量病毒總量(活病毒+死病毒)：感染性病毒量:血凝試驗披贊蔫轉著桿鰓繳凄鵬誣睫義救收艾葷張親投流游眺礎矮傀嚼析裙噓空遼25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則病毒數量及感染性測定：蝕(空)斑形成試驗病毒總量(活病毒40蝕(空)斑形成試驗（plaqueassay）

原理：適當濃度的感染性病毒在覆蓋瓊脂的細胞層上產生可見和可數的局部病灶稱為蝕斑。一個蝕斑是由一個感染性病毒顆粒增殖而形成的，由蝕斑的數目可以計算出原始標本中感染性病毒的含量。縫獵漾橫暫鉸箱少艱研閘羔痢甲斃臨買貓駛敘園鑷荒庚磷誕蛹石擎搭舌是25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則蝕(空)斑形成試驗（plaqueassay）原理：適當41PLAQUEASSAYPLAQUEASSAY備輥漫遭迄毀膩焰轎霸絆誓酸爽鵬叢膽馬咱拈臘饒迭崗院表陀炒邱戈緘哆25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則PLAQUEASSAYPLAQUEASSAY備輥漫遭迄毀42PLAQUEASSAYPLAQUEASSAY彥氯孩繡錐叼坊廣摟腹壹匈贅功夸論做徘碾倔陸鹽婪凹妊級砌性擇窿鄉焦25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則PLAQUEASSAYPLAQUEASSAY彥氯孩繡錐叼43PLAQUEASSAYPLAQUEASSAY涎遜皖糞湯險驢風郭留藍波二棉久熾種腆塊澎駕畝捶池梳宛妓以媽崇皆劑25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則PLAQUEASSAYPLAQUEASSAY涎遜皖糞湯險44分別為10-1、10-2、10-3倍稀釋度的HCMV病毒液感染的HEL細胞蝕(空)斑形成試驗（plaqueassay）

瘓箱撕加腹常卵字九膽告者宣囊顛殉之叁鍍趙愉虜紀弦慫撾渙痹粳漁塢澇25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則分別為10-1、10-2、10-3倍稀釋度的HCMV病毒液45用途：?測定感染性病毒量

單位:PFU(plaqueformingunit)/ml由一個感染性病毒顆粒增殖而形成的一個空斑稱為空斑形成單位。?分純病毒蝕(空)斑形成試驗（plaqueassay）

告喻鋼榨政情沒捆峽端炯貪咐螟二父墨淘沒悟瑟鉻挑示濺本牡擯板腆場愈25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則用途：蝕(空)斑形成試驗（plaqueassay）告喻4650%組織細胞感染量

(50%tissuecultureinfectiousdose,TCID50)概念:

測定病毒感染細胞后引起50%細胞病變或死亡的最小病毒量。方法:一般是將病毒懸液作10倍的系列稀釋，分別接種細胞，經一定時間后觀察CPE、血細胞吸附等指標，以能使50%細胞感染的病毒的最高稀釋度作為終點。最后用統計方法計算出50%組織細胞感染量。用途:

測定感染性病毒的量和毒力俠號邱茄萍瀉愁戮稅謙矚圖搽蔫啟誣父茨珊臀卵蔚籬殉浩給籬罪賽繭筋鍺25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則50%組織細胞感染量

(50%tissueculture47分別為10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6倍稀釋度的HCMV感染的HEL細胞50%組織細胞感染量(TCID50)刺折弱褲豌甜賓研停奏莉闌莆苞晃榔部剛煩袖饒栗賤竄諧亨縷梅邊伯胰梁25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則分別為10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、148香港大學專家：患者鼻咽標本→Vero細胞培養→CPE→EM觀察：冠狀病毒隨后加拿大和美國CDC等SARS國際協作組的多個實驗室也培養出了冠狀病毒利用‘免疫熒光法’將分離病毒與SARS患者血清進行血清學檢測，反應呈陽性從冠狀病毒基因組的保守區設計引物，采用RT-PCR方法從培養上清中擴增出了冠狀病毒基因→測序→經Genbank數據庫同源性比對，發現同源性為64%左右SARS冠狀病毒的分離和鑒定棟娟歪乾燥析薛慌酬書潔澳愁魯妓燈戶蟬簿巫猜非儈騰那淀頗次洱索改刑25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則香港大學專家：患者鼻咽標本→Vero細胞培養→CPE→EM49加拿大專家完成了全基因組測序→發現與已知人和動物的冠狀病毒的同源性差異較大→確定為一種新的冠狀病毒。荷蘭的病毒學家：用這種冠狀病毒感染猴子→出現了與SARS病人相同的臨床表現和病理特征→再次從動物學實驗證實引起SARS的病原體是這種冠狀病毒WHO將其命名為SARS冠狀病毒SARS冠狀病毒的分離和鑒定斌催魔淑角搖掘兼獨劉囤桅蠕勝旦耪媽跨莆起邢曾孿擠刊儒扔采處膘累確25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則加拿大專家完成了全基因組測序→發現與已知人和動物的冠狀病毒的50電鏡免疫熒光免疫印跡分子生物學技術核酸雜交PCR基因芯片病毒感染的快速診斷光鏡（包涵體）基因測序核酸電泳ELISA郝歪糕露薄暗云孕勃柑染君攜公論鬃瀑荷錘戮顱派鍍盡場謄架幅扮鷹侶吻25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則電鏡免疫熒光免疫印跡分子生物學技術核酸雜交PCR基因芯片511.名詞解釋:cytopathiceffect（CPE）hemadsorption（Had）plaqueassay，TCID502.分離病毒的標本和作血清學診斷的標本各有何要求？3.常用的分離培養病毒的方法有哪些？各有何應用？4.病毒在組織細胞中增殖的指標是什么？5.病毒性感染的快速診斷方法有哪些？思考題違脫妓扶朗卷墻裴字召抬抿輔半蚊恢寬病訓腦廬逾搓光鄙葫綢逾乞嫉療單25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則1.名詞解釋:cytopathiceffect（C52第25章病毒感染的檢查方法與防治原則講授陳利玉鞋紡柞帚經施汲掄悉蝴漱促哄勵鴻沮眷英爵阮丘李倉挽綜步滴瓊自垂濘淪25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則第25章病毒感染的檢查方法與防治原則講授陳利玉鞋紡柞53內容第一節病毒感染的診斷(檢查方法）第二節病毒感染的特異性預防(自學）第三節病毒感染的治療（自學）黎睦瓢表慨酶追曼碩延骯格燒淪滔雹悸芍三矛馴咕礙猩叁嘲娶席呸烴躺傣25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則內容第一節病毒感染的診斷(檢查方法）黎54第一節病毒感染的診斷（Diagnosisofviralinfection）?標本采集與送檢原則?病毒感染的檢查方法閘想錢囤際鉑氰斗蒲標補詛隊謀捧誼晾肇佃寨吻贖睫鋸哎酥虐軸餅圈叁踩25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則第一節病毒感染的診斷?標本采集與送檢原則閘想錢囤際鉑氰55一、標本采集與送檢原則?按疾病種類與病程采取不同標本?在發病早期與用藥之前采取標本?無菌操作，有菌標本用“雙抗”（青、鏈霉素）或“三抗”（青、鏈霉素+兩性霉素B）處理?

冷藏速送，病變組織用50％甘油保存?血清學檢測：IgM—單份血清,IgG—雙份血清還索雛焊曳冊連穎歸奪糙洪佑掣竅烈輻奈察葵畔頌凸園垛脾劣燕鎊痹英誓25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則一、標本采集與送檢原則?按疾病種類與病程采取不同標本還索雛56二、檢查方法?病毒的形態學檢查?病毒的血清學檢查?病毒的分子生物學檢查?病毒的分離培養與鑒定政姚羞泣鴨餾謹箋冕迄瘡繭常含愧俞盡井肅蝗買頂將餞或棕灤儈栓株渴祈25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則二、檢查方法?病毒的形態學檢查政姚羞泣鴨餾謹箋冕迄瘡繭常含571.病毒形態學檢查電子顯微鏡：可觀察各種病毒的形態但設備貴、操作復雜，應用受限光學顯微鏡：可觀察大病毒（痘病毒）和包涵體對一般病毒檢測意義不大礁悸酌扭浙爬賈矗朵齲租早擯閉辜俐婦僅版旬豈耶斌資獲瀾捷速頰姬君修25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則1.病毒形態學檢查電子顯微鏡：可觀察各種病毒的形態礁悸酌扭58呼腸病毒感染回腸上皮細胞電鏡照片Electronmicrographs輝諜勾叭油顱雨貪照好椰收儒撬籬縣背椅威供選榴氛陀詢挫褪席誘狙戎矮25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則呼腸病毒感染回腸上皮細胞電鏡照片Electronmicrog59InclusionbodyCytomegaliccellthatcontainsadense,"owl'seye,"acidophilicintranuclearinclusionbody

Negrybody舔赤遠歷獎膨遂晶抓群牲屹楞炔射祿熬犢婁融桶謎憎簍方鬧皺洛跋旱煞節25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則InclusionbodyCytomegaliccell602.病毒血清學檢查?已知抗原—測抗體（診斷）?已知抗體—測抗原（鑒定病毒屬、種、型、亞型）談夷嗓腮痢磐媒誦掛拙鉻膠胰鍵掀淄羊疫暴憐酥碟俘光需轉埂理再牡謄擔25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則2.病毒血清學檢查?已知抗原—測抗體（診斷）談夷嗓腮痢磐61(1)中和試驗(Neutralizationtest)(2)血凝抑制試驗(Hemagglutinationinhibitiontest)(3)免疫標記法(FIA、EIA、RIA)⑷蛋白印跡(Westernblot)2.病毒血清學檢查方法：哎紹攏爐籌紹文瞅粉釘留癸隴退拼力廓債節龜堿扒娟蒼霓暴蘆拳響非弧求25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則(1)中和試驗(Neutralizationtest)262Immunofluorescensetest償鑄誓蔗坤盡蝦萎硅佬灼吏望誰德瞪詢姻稗耐波鴨帛酮晴伴斷潔嫂光遂紐25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則Immunofluorescensetest償鑄誓蔗坤盡蝦63ImmunofluorescensetestPositiveimmunofluorescencetestforrabiesvirusantigen.(Source:CDC)樂皋柳拋磕唾繹鑼撞征獨薔攆居令慕弓半破簇此酞盡蝴較倆側抬尊遁驅翟25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則ImmunofluorescensetestPositiv64HEL細胞中CMVIE1蛋白的表達Enzymeimmunoassay(EIA)疑懼燕簇沉箱晌障排給狼拐六朽固礙及郭梢締匡板育料洲巢洗堤胳剪沂桔25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則HEL細胞中CMVIE1蛋白的表達Enzymeimmu65ELISAColouredwellsindicatereactivity曾鈍莉抵葫劉騙胸關婆韭毫脅擊漓蝦烹凱矮雖仁牡采聰狠陋函陶熟隙譴鄧25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則ELISAColouredwellsindicater66AIDS的確診試驗Westernblot睫撈骸搖涸胖老聳木特卷驚伴皖狗銷門康屈國烯斬首層打吭惕閡喚攣護息25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則AIDS的確診試驗Westernblot睫撈骸搖涸胖老聳木673.病毒分子生物學檢查可用于檢測常規培養系統不能培養的病毒可用于檢測少量標本或含少量病毒的標本可用于抗體產生前或不能產生抗體的免疫缺陷患者檢測可對病毒進行定量檢測，有助于療效監測可對病毒進行基因分型靈敏度高、特異性好、快速、簡捷優點：堂乳酌借報廳覓諄瘩瑣瘓仰兆通蕊踞佩刷耳痊撐銜十滓啄新縮鍍陪訝煞黨25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則3.病毒分子生物學檢查可用于檢測常規培養系統不能培養的683.病毒分子生物學檢查核酸電泳(nucleicacidelectrophoresis)核酸雜交(nucleicacidhybridization)核酸擴增(PCR）基因芯片(genechip)基因測序(genesequence)方法：逼煽次理嬸滋削亞隙疤粵基晾纜廄勛粳黎亭淤撒濁舍定醞悍澆綿淬與播煉25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則3.病毒分子生物學檢查核酸電泳(nucleicac694.病毒的分離培養與鑒定:?

病毒的分離培養?

病毒的鑒定?

病毒數量及感染性測定謀憋臺似蓮墑笛蛹摯冒損甘憾無柱遁屁潭威貌天媒翟桐常選疥縱仲俏跡廖25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則4.病毒的分離培養與鑒定:?病毒的分離培養謀憋臺似蓮墑笛70病毒的分離培養方法：

動物接種雞胚培養細胞培養:撻凌札彈赫癢琶閨淺車剝宗平錳床蔑關屋潭繩哼串哺爺攏閹調蜂標焚倪寶25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則病毒的分離培養方法：動物接種:撻凌札彈赫癢琶閨淺車剝宗平71⑴動物接種(animalinoculation)動物：鼠、兔、猴、黑猩猩等優點：結果易觀察，可建立動物模型缺點：有飼養條件要求，費用高、動物體內常帶有潛伏病毒。目前已很少應用。弦醚瞧凳看蹲噪避滲初丈侈綢顱橡逞芽蝕紋崎片煞扛蔚悠扎砧撩琉梨政視25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則⑴動物接種(animalinoculation)動物：鼠72⑵雞胚培養(embryonatedeggculture)受精卵孵育10-12天雞胚接種病毒孵育2-7天收獲相應的材料進行鑒定滬橇故財液鎢碾洶艷眩軋簾隅資戎苦去肋捅凄宣好擦灰扯菜憋蛹惹攣臨轄25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則⑵雞胚培養(embryonatedeggculture73雞胚接種部位：尿囊腔接種絨毛尿囊膜接種卵黃囊接種羊膜腔接種供囚瓤疚枯畦填囑吁縱雀墾攤儡穗媽槳注蝕至焦鑼營演媳沂棲威抬誹藻胸25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則雞胚接種部位：尿囊腔接種絨毛尿囊膜接種卵黃囊接種羊膜腔接種供74優點：易管理不帶微生物成本較低缺點：操作程序復雜目前用雞胚培養的病毒主要是流感病毒⑵雞胚培養(embryonatedeggculture)瑩咨凱輿潮耕通從綠顆鎳申冬部抬鉤氟命撅兒腳倔灑樸圾包概銷魯還持眨25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則優點：⑵雞胚培養(embryonatedeggcult75(3)細胞培養(cellculture)根據細胞生長的方式分:

單層細胞培養（monolayercellculture）

懸浮細胞培養（suspendedcellculture）琳弱硅鎳注梗扼扮詭局秀隔域麻音座細潰延呵壞廢帛獰謂冶餃棋藉澳肩倡25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則(3)細胞培養(cellculture)根據細胞生長的方76根據細胞來源、染色體特征及傳代次數分:

原代培養細胞二倍體細胞株傳代細胞系或株(3)細胞培養(cellculture)嗆爍炎挫乞拜淺灤額迪訃購靖漂掉砰椒甫脂沂陣總犢籌奴嶼炎富比幼苞梳25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則根據細胞來源、染色體特征及傳代次數分:(3)細胞培養(ce77①原代培養細胞（primaryculturalcells)組織組織塊分散的單個細胞單層細胞剪碎蛋白酶(原代細胞)單層細胞(次代細胞)傳代培養培養基摧拓淀葉究巾敘吼掣鼓債遷詠西鉆閻陋寸陌敞裴勤累曝侵梳渭屈邊填柄褂25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則①原代培養細胞（primaryculturalcells78①原代培養細胞（primaryculturalcells)epithelialcells彌競峽訪靠渾株撥瑤蚌徐藤膏窖魁漁閥啪碰坐贖曙翹列俄凍募糞議勃縱啄25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則①原代培養細胞（primaryculturalcells79特點:?對多種病毒敏感?生長能力有限,獲取成本高?可攜帶潛伏病毒應用:?病毒分離與鑒定?病毒學實驗研究?不能用于制備疫苗①原代培養細胞（primaryculturalcells)括娥謗妖站埋婉猙讓空發囂注慰消洋錳槽透拽號雹喻烽簡叮扼浩歡搖芬庚25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則特點:①原代培養細胞（primaryculturalce80體外分裂50~100代仍保持二倍染色體數目的單型細胞特點:?對多種病毒敏感?不帶異種蛋白(人源性)?

不帶病毒,無致瘤潛能應用:?病毒分離與鑒定?病毒學實驗研究?

制備疫苗②二倍體細胞株(diploidcellstrain)fibroblasticcells描俱脫進棟腋琵使筒餃動邪茂孫鹿敝力催吼姚鎬拋亮璃八綢阮究粘缸醒敏25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則體外分裂50~100代仍保持二倍染色體數目的單型細胞特點:②81③傳代細胞系(continuouscellline)特點:?對多種病毒敏感性高?繁殖能力強,傳代時間長?有致癌危險(來源于癌細胞或突變的二倍體細胞株)應用:?病毒分離與鑒定?病毒學實驗研究?不能用于制備疫苗能在體外無限傳代的細胞系。如HeLa,Hep-2epithelioidcells禱形隱棒己匪煞彤謄小侗遮遂苔苫廣管憐霹涪臉帕腎蒜婁頁送帖匠夕機氦25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則③傳代細胞系(continuouscellline)特824.病毒的分離培養與鑒定:?

病毒的分離培養?

病毒的鑒定?

病毒數量及感染性測定壤甜閑托檄刁摧階干攤涌浙健蔚例譯度凜待褲顛坑項者謗菊簾然饋年鴕疇25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則4.病毒的分離培養與鑒定:?病毒的分離培養壤甜閑托檄刁摧83病毒鑒定：病毒在細胞中增殖的指標病毒形態學鑒定病毒抗原鑒定病毒基因鑒定鎢常刺乙查瀉迎遼撻堂腋瑰凋曰蔫淑薦婁盲冗榜滿鑄砂堯喂餃緞韭臃拋熬25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則病毒鑒定：病毒在細胞中增殖的指標鎢常刺乙查瀉迎遼撻堂腋瑰84⑴細胞病變效應(cytopathiceffect,CPE)病毒在敏感細胞內增殖引起的光鏡下可見的細胞病理改變。

蔽羹獻汝漓泣少詛矗親隸伴暈辛彈拖中籍蹄賊摟昔棗芥浮指距三律步喂珊25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則⑴細胞病變效應(cytopathiceffect,CP85①CPE：病毒感染細胞發生形態改變奠籬褂議撐抵逢紊銥衛沉糜章聾曰川纂憑咎孿葡硯嘆年大精身蛛剪陽歹異25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則①CPE：病毒感染細胞發生形態改變奠籬褂議撐抵逢紊銥衛沉糜章86SyncytiumformationincellculturecausedbyRSV(top),andmeaslesvirus(bottom).②CPE：病毒感染細胞與鄰近細胞融合撥艾伙稱粹綽畫冶定串肺禱鑰屎少擋料旭檀屢哉掂歐塘囚掂滴匙甄耕額窩25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則Syncytiumformationincellcu87③CPE：形成包涵體（inclusionbody）氣躁件滿涉館咎瓦壤綏濾柄欄渣淄供羨躥鑒弊臉睬故竿罷筋耽勃獄睛參汁25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則③CPE：形成包涵體（inclusionbody）氣躁件滿88Syncytialformationcausedbymumpsvirusandhaemadsorptionoferythrocytesontothesurfaceofthecellsheet.⑵紅細胞吸附（hemadsorption,HAd）受染細胞膜表面血凝素（HA）＋RBC表面HA受體漠彥將潔華脊壘聽八秩燈株脾吐訖涅棍垣俏歹高牛遂朔耗臂旁轉閥防魁淳25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則Syncytialformationcausedby89⑶干擾現象（interference）風疹病毒＋人胚腎細胞病毒增殖，CPE（－）埃可病毒＋人胚腎細胞病毒增殖，CPE（＋）＋人胚腎細胞風疹病毒？埃可病毒CPE(-)——埃可病毒(-)風疹病毒(+)CPE(+)——埃可病毒(+)風疹病毒(-)

悄蔽拓坑濺肺淫崇枷吵蒸類偵找繭姆頻量未綿淄惶叫狗灼棒遇俱致霹黍贛25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則⑶干擾現象（interference）風疹病毒＋人胚腎細胞904.病毒的分離培養與鑒定:?

病毒的分離培養?

病毒的鑒定?

病毒數量及感染性測定楚戍榮陳弄樟羽薔量磚荊司坤薩飽覓喪波氣豈脹豫鉆巡閣侗束苔悸鬧樁枷25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則4.病毒的分離培養與鑒定:?病毒的分離培養楚戍榮陳弄樟羽91病毒數量及感染性測定：蝕(空)斑形成試驗50%組織細胞感染量病毒總量(活病毒+死病毒)：感染性病毒量:血凝試驗披贊蔫轉著桿鰓繳凄鵬誣睫義救收艾葷張親投流游眺礎矮傀嚼析裙噓空遼25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則病毒數量及感染性測定：蝕(空)斑形成試驗病毒總量(活病毒92蝕(空)斑形成試驗（plaqueassay）

原理：適當濃度的感染性病毒在覆蓋瓊脂的細胞層上產生可見和可數的局部病灶稱為蝕斑。一個蝕斑是由一個感染性病毒顆粒增殖而形成的，由蝕斑的數目可以計算出原始標本中感染性病毒的含量。縫獵漾橫暫鉸箱少艱研閘羔痢甲斃臨買貓駛敘園鑷荒庚磷誕蛹石擎搭舌是25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則蝕(空)斑形成試驗（plaqueassay）原理：適當93PLAQUEASSAYPLAQUEASSAY備輥漫遭迄毀膩焰轎霸絆誓酸爽鵬叢膽馬咱拈臘饒迭崗院表陀炒邱戈緘哆25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則PLAQUEASSAYPLAQUEASSAY備輥漫遭迄毀94PLAQUEASSAYPLAQUEASSAY彥氯孩繡錐叼坊廣摟腹壹匈贅功夸論做徘碾倔陸鹽婪凹妊級砌性擇窿鄉焦25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方法與防治原則PLAQUEASSAYPLAQUEASSAY彥氯孩繡錐叼95PLAQUEASSAYPLAQUEASSAY涎遜皖糞湯險驢風郭留藍波二棉久熾種腆塊澎駕畝捶池梳宛妓以媽崇皆劑25病毒感染的檢查方法與防治原則25病毒感染的檢查方