課題1微生物試驗室培養第1課時專題2微生物的培養與應用培養基分類、成份及用途，無菌技術等基本操作技術第1頁第2頁（一）知識與技能了解相關培養基基礎知識；掌握培養基分類、成份及用途，無菌技術等基本操作技術。（二）過程與方法分析試驗思緒確實定和形成原因，分析試驗流程，對比前面試驗設計，歸納共性，分析差異，增加印象。（三）情感、態度與價值觀形成勇于實踐、嚴謹求實科學態度和科學精神。學習目標第3頁第4頁引入新課在傳統發酵技術應用中，都利用了微生物發酵作用，其中微生物來自于制作過程中自然感染。而在工業化生產中，為了提升發酵質量，需要取得優良菌種，并保持發酵菌種純度。這就要包括到微生物培養、分離、判別等基本技術。第5頁到當前為止，幾十項Nobel生理學和醫學獎，化學獎都與微生物學相關課題背景第6頁微生物包含五類：病毒細菌放線菌真菌原生動物特點：結構都相當簡單,個體多數十分微小.通常要用光學顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有甚至沒有細胞結構.且體內普通不含有葉綠素.不能進行光合作用.原核生物界原生生物界真菌界病毒界微生物基礎知識第7頁（一）培養基

培養基（培養液）是由人工方法配制而成，專供微生物生長繁殖使用混合營養液。（1）按物理狀態來分：培養基可分為固體培養基和液體培養基。其中固體培養基用于菌種分離、判定菌落等。（2）按功效來分，可分為選擇培養基和判別培養基。（3）按成份來分，可分為天然培養基和合成培養基。1.培養基1.1培養基類型和用途第8頁1.1.1按物理狀態來分1.液體培養基：增菌表面生長均勻混濁生長沉淀生長第9頁2.固體培養基：菌落，菌苔純化，增菌1.1.1按物理狀態來分第10頁3.半固體培養基：動力檢測，保種無動力有動力(彌散)(可用于觀察微生物運動，保留菌種)

1.1.1按物理狀態來分第11頁思索：瓊脂來自哪種生物？從紅藻中提取化學成份是什么？多糖在配制培養基中有什么用途？用作為凝固劑1.1.1按物理狀態來分第12頁1.1.2按功效來分1.選擇培養基加入青霉素培養基:分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽培養基:

分離金黃色葡萄球菌不加氮源無氮培養基:分離固氮菌不加含碳有機物無碳培養基:分離自養型微生物加入青霉素等抗生素培養基:分離導入了目標基因受體細胞加入氨基喋呤、次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷培養基:

分離雜交瘤細胞第13頁1.1.2按功效來分2.判別培養基加入伊紅美藍培養基:判別大腸桿菌加入尿素酚紅培養基:

判別尿素分解菌3.用途：選擇培養基:篩選并選擇培養某種微生物判別培養基:

用來判別某種微生物存在第14頁

依據細胞生存所需物質種類和數量，用人工方法模擬合成。合成培養基主要成份是氨基酸、維生素、碳水化合物、無機鹽和其它一些輔助物質。1.合成培養基:2.天然培養基：天然培養基有血清、血漿、和組織提取液（如雞胚和牛胚浸液）。1.1.3按成份來分第15頁血清中含有：①各種蛋白質（白蛋白、球蛋白、鐵蛋白等）②各種金屬離子；③激素；④促貼附物質，如纖粘蛋白、冷析球蛋白、膠原等。⑤各種生長因子⑥轉移蛋白⑦不明成份3.人工合成培養基只能維持細胞生存，要想使細胞生長和繁殖，還需補充一定量天然培養基（如血清）。1.1.3按成份來分第16頁標準培養基類型配制特點主要應用物理性質固體培養基加入瓊脂較多菌種分離,判定,計數半固體培養基加入瓊脂較少菌種保留液體培養基不加入瓊脂工業生產，連續培養化學組成合成培養基由已知成份配制而成，培養基成份明確菌種分類、判定天然培養基由天然成份配制而成，培養基成份不明確工業生，產降低成本目標用途判別培養基添加某種指示劑或化學藥劑菌種判別選擇培養基添加（或缺乏）某種化學成份菌種分離培養基分類歸納總結第17頁液體培養基用途判別培養基選擇培養基菌種分離工業生產，連續培養菌種判別培養基類型例1:連線典例精析第18頁典例精析例2.以下選項中，不是使用選擇培養基培養微生物目標是()A．除去其它微生物 B．使需要微生物大量繁殖C．經過表現特殊性狀，與其它微生物相區分 D．能夠增加要培養微生物濃度[解析]判別培養基作用是經過微生物表現特殊性狀，與其它微生物相區分。C第19頁第20頁一.培養基：微生物生存環境和營養物質1.基本成份：思索：微生物“吃”什么？碳源、氮源、水、無機鹽⑴碳源無機碳源：有機碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自養微生物異養微生物⑵氮源無機氮源：有機氮源：NH4＋、NO3-（為硝化細菌提供N源和能源）牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含C、H、O、N有機物是異養型微生物碳源、氮源、能源1.2培養基成份第21頁2.特殊營養：維生素、堿基等（生長因子）（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）3.pH、氧氣需求：1.2培養基成份思索：不一樣微生物培養時所需要培養基成份相同嗎？不一樣微生物往往需要采取不一樣培養基配方

(參考教材附錄3內容)第22頁不論哪種培養基，普通都含有水、碳源、和氮源、無機鹽等營養物質，另外還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養物質,比如:生長因子(即細菌生長必需，而本身不能合成化合物,如維生素、一些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等要求。1.2培養基第23頁牛肉膏蛋白胨培養基是一個應用最廣泛和最普通細菌基礎培養基。1000ml牛肉膏蛋白胨培養基配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g瓊脂20.0g分析營養組成？1.2培養基成份第24頁思索探究1.牛肉膏和蛋白胨主要為微生物提供哪些營養物質？

糖、維生素和有機氮等營養物質。2.培養乳酸桿菌時培養基需要特殊添加什么物質？維生素3.培養霉菌時需要怎樣調整培養基pH？將培養基pH調整為酸性

4.培養細菌時需要怎樣調整培養基pH？將pH調整為中性或微堿性。第25頁二.配制標準⑴目明確：⑵營養全方面、濃度適宜、百分比恰當⑶適宜pH值：有機碳源異養型：依據微生物種類、培養目標選擇原料自養型：不加碳源加入緩沖劑細菌偏堿，真菌偏酸（CO2碳源）生產科研1.2.2培養基配制標準第26頁典例精析例3.牛肉膏與蛋白胨中牛肉膏能為細菌提供營養成份是（）A.無機鹽B.提供碳源、氮源等C.不能為微生物提供生長因子D.只是碳源[解析]牛肉膏與蛋白胨培養基是一個應用十分廣泛天然培養基,其中牛肉膏為微生物提供碳源、磷酸鹽和維生素,蛋白胨主要提供氮源和維生素,還能夠提供生長因子.B第27頁第28頁耐高溫需保持干燥物品，160～170℃1～2小時接種環、接種針等金屬用具70~75℃、30min80℃、15min100℃、5~6min消毒滅菌定義方法較為溫和理化方法，殺死部分有害菌體（不包含芽孢、孢子）強烈理化方法，殺死全部微生物（包含芽孢、孢子）煮沸消毒法巴氏消毒法化學藥劑紫外線灼燒滅菌干熱滅菌酒精、氯氣、石炭酸等高壓蒸汽滅菌培養基，100KPa、121℃、15～30min無菌技術：預防外來雜菌污染2.無菌技術2.1.消毒與滅菌：第29頁芽孢有些細菌在一定條件下，細胞里面形成一個橢圓形休眠體，叫做芽孢。芽孢壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣環境有很強抵抗力。比如，有細菌芽孢，煮沸3小時以后才死亡。芽孢又小又輕，能夠隨風飄散。當環境適宜（如溫度、水分適宜）時候，芽孢又能夠萌發，形成一個細菌孢子細菌、原生動物、真菌和植物等產生一個有繁殖作用生殖細胞。能直接發育成新個體。第30頁請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。假如需要，請選擇適當方法。（1）培養細菌用培養基與培養皿（2）玻璃棒、試管、燒瓶和吸管（3）試驗操作者雙手思考2.1.消毒與滅菌：高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌或灼燒滅菌酒精消毒第31頁典例精析例4.滅菌標準是（）。A.殺死全部病原微生物B.殺死全部微生物C.殺死全部微生物細胞、芽孢和孢子D.使病原菌不生長[解析]滅菌是指使用強烈理化原因，殺死物體內外全部微生物，包含芽孢和孢子。C第32頁1.無菌技術包含：（1）對試驗操作空間、操作者衣著和手進行

清潔和消毒；（2）將培養器皿、接種用具和培養基等器具進行

滅菌；（3）為防止周圍微生物污染，試驗操作應在酒精燈火焰附近旁進行；（4）防止已滅菌處理材料用具與周圍物品

相接觸。2.2.無菌技術范圍：第33頁2.無菌范圍：試驗操作空間消毒操作者手、衣著消毒試驗用具滅菌試驗操作過程酒精燈旁操作超凈工作臺2.2.無菌技術范圍：思索：無菌技術除了預防培養物被污染外，還含有目標是預防感染試驗操作者。第34頁典例精析例5.將配制好培養基進行滅菌應用()A．灼燒滅菌B．高壓蒸汽滅