1、12179202001V9NSE神經元特異性烯醇化酶07 V9中文 Elecsys and cobas e analyzers12133113 122 100測試本試劑盒可使用的分析儀：注意事項患者標本NSE測定值與所使用的檢測方法有關。因此，實驗室檢測結果必須包括相關檢測方法的說明。不同檢測方法所測定的NSE值不可直接比較，否則會造成錯誤的醫學解釋。如果在監測治療過程中NSE檢測過程中有任何得變更，那么變化后測得的NSE值必須通過平行測定進行確認。主要用途用免疫分析法定量測定人體血清中NSE濃度。Elecsys NSE免疫分析試劑盒用于監測腫瘤患者的治療及程度，尤其是小細胞肺癌和神經母細胞瘤

2、患者。Elecsys1010/2010分析儀和Modular Analytics E170（Elecsys 模塊）免疫分析儀運用電化學發光免疫測定法“ECLIA”進行測定。臨床應用糖分解烯醇酶(2-phospho-D-glycerate hydrolase. EC 4.2.4.11 ，分子量約為80kD)有多種二聚異構體，由三種亞單位、 和組成。烯醇酶亞單位見于哺乳動物多種類型組織中，而亞單位則主要見于心臟和肌肉組織。和酶異構體稱為神經元特異烯醇化酶（NSE）或酶，高濃度存在于神經細胞和神經內分泌細胞以及這些細胞所引發的腫瘤細胞中1。肺癌：NSE可作為檢測小細胞肺癌首選標志物1，而CYFRA

3、21-1在非小細胞肺癌檢測中優于NSE2,3,9。60-81小細胞肺癌病例NSE濃度升高1,7。盡管NSE濃度與轉移部位或腦部轉移沒有相關性，但是與臨床分期如疾病進展有很好的相關性1。首個化療周期開始后24-72小時NSE濃度有短暫的升高，原因是腫瘤細胞溶解1。這種NSE濃度升高可持續1周或首個化療周期結束時血清濃度迅速下降（治療前濃度增加）。相反地，對化療無反應的患者NSE濃度持續升高或沒有下將到參考范圍1,8。病情緩解期間，80-96患者NSE濃度正常，而病情復發時NSE濃度升高。一些病例其1-4月潛伏期中NSE濃度升高，常為指數式升高（10-94天濃度翻倍），這與生存期有關1。NSE可用

4、于評估小細胞肺癌患者預后情況、治療有效性和相關病因：診斷靈敏度93，陽性預測值921,7,8。神經母細胞瘤：62患兒NSE血清濃度高于30ng/ml，升高值與疾病進展有關。異常NSE值大小或頻率與疾病嚴重程度有明顯的相關性；與無病生存期呈負相關性1。Apudoma神經內分泌腫瘤：34患者血清NSE濃度升高（12.5ng/ml）1,4。精原細胞瘤：臨床上68-73患者有明顯的NSE濃度增加1，與疾病臨床分期有關。其他腫瘤：22非肺部惡性疾病患者（任何期別腫瘤）NSE濃度高于25ng/ml。腦部腫瘤如神經膠質瘤、腦脊膜瘤、纖維神經瘤和神經瘤僅偶爾有血清NSE值升高。在原發腦瘤或腦轉移性瘤10和惡性

5、黑色素瘤及腎上腺嗜鉻細胞瘤（PC）患者中，可發現中樞神經系統CNS的NSE值升高1。14%器官排斥和46轉移性腎癌患者NSE濃度升高，與病情有關，可作為一個獨立的預后因子1,12。良性疾病：良性肺部和腦部疾病NSE濃度略有升高（12ng/ml），主要見于CSF中，包括下列疾病患者：腦脊膜炎、彌漫性腦膜炎、脊髓與小腦退化、腦梗塞、腦血腫、蛛網膜下出血、腦外傷、腦炎、器質性癲癇、精神分裂癥和Jakob-Creutzfeld病1,5,6。反應原理“三明治”法，總檢測時間：18分鐘。第一次孵育：20l標本和一份生物素抗NSE特異性單克隆抗體一起孵育，一份釕復合體標記的NSE特異性單克隆抗體后，反應形成

6、一“三明治”樣抗原抗體復合體。第二次孵育：加入鏈霉親和素包被的微粒，復合體在鏈霉親和素和生物素相互作用下形成固相。將反應液吸入檢測池中，檢測池中的微粒通過電磁作用吸附在電極表面。未結合的物質通過ProCell除去。在電極上加以一定的電壓，使復合體化學發光，用光電倍增器檢測發光的強度。通過檢測儀的定標曲線得到最后的檢測結果，定標曲線是通過2定標點和試劑條形碼上獲得的主曲線生成的。a)Tris(2,2-bipyridyl)ruthenium(II)-complex (Ru(bpy)三聯吡啶釕試劑工作溶液M 鏈霉親和素包被的微粒（透明瓶蓋）每瓶6.5ml鏈霉親和素包被的微粒：0.72mg/ml，結合

7、力：470ng生物素/mg微粒，微粒經防腐處理。R1 生物素化NSE特異性抗體（灰色瓶蓋）每瓶10ml。生物素化單克隆抗NSE抗體18E5 （小鼠）：2mg/L；磷酸鹽緩沖液：100mmol/L，PH值7.4；經防腐處理。R2 釕復合物標記的NSE特異性抗體（黑色瓶蓋）每瓶10ml。釕復合物標記抗NSE單克隆抗體（小鼠）：84B10 1.0mg/L；磷酸鹽緩沖液：100mmol/L，PH值7.2；經過防腐處理。警告和注意事項僅用于體外診斷。在使用本試劑盒時必需遵循所有試驗室試劑操作的注意事項。所有廢棄物必需按照當地法規進行處置。避免與任何形式的試劑或任何形式的標本（標本、定標液和質控品）形成泡

8、沫。試劑處理本試劑盒的任何一種試劑只可與試劑盒的其它試劑聯合使用，不可單獨使用。可從試劑條形碼讀取有關如何正確使用該試劑的所有信息。儲存及穩定性存放于28。請垂直擺放Elecsys NSE試劑盒，以確保使用前自動混合過程中微粒完全有效。穩定性：28（未開封）：有效期內均可使用。開封后，28：可存放12周。在MODULAR ANALYTICS E170 和cobas e601 分析儀上：可保存8周。在Elecsy 2010 and cobas e411分析儀上：可保存8周。在Elecsy 1010分析儀上：可保存4周（存放在冰箱內或分析儀上，溫度2025）；徹底暴露情況下可保存20小時。標本的收

9、集和準備只有按如下方法收集的標本才適合用本試劑盒檢測。血清必須用標準試管或內有分離膠的試管收集。（原則：重現性90110；斜率0.91.1；相關系數0.95；2分析敏感度（LDL，最低檢測水平）1小時內離心血液標本。發生溶血或不正確的離心（如離心前放置時間延長）時,紅細胞和血小板中的NSE會導致檢測結果增加1,13。穩定性：在1525C可保存6小時，28C可保存24小時；在-20C可保存3月，只可凍溶一次14。注意：上述-20C下穩定性需滿足下列條件：至多1ml標本放置在低于-70C下冷凍后保存在-20C溫度下14。當采用其他冷凍過程時，標本檢測值可能會降低。有關含有分離膠的試管收集的血清的穩

10、定性信息，參照生產商提供的指導。如標本中有沉淀出現，必須先作離心處理再進行分析。已經加熱失活的標本無法分析。不要對使用疊氮化物作為穩定劑的標本或質控標本進行分析。在進行分析前，請確保患者的標本、定標液及質控標本處于室溫（2025C）中。由于蒸發因素的影響，標本、定標液及質控標本在放入分析儀后請在2小時內完成測定。提供的物品參閱“試劑工作溶液”章節。需要的物品（未提供）貨號12133121, Elecsys NSE CalSet（定標液）, 4 x 1 mL 貨號11776452, Elecsys PreciControl Tumor Marker, for2 x 3 mL各含 Tumor Ma

11、rker 1和2貨號 03004864, Elecsys Diluent NSE, 4 x 3 ml樣品稀釋液常規實驗設備 Elecsys 1010/2010 或MODULAR ANALYTICS E170 免疫分析儀 Elecsys 1010 /2010和cobas e411分析儀所需材料: 貨號11662988122, Elecsys ProCell, 6 x 380 mL ,系統緩沖液貨號11662970122, Elecsys CleanCell, 6 x 380 mL,檢測池洗液 貨號11930346122, Elecsys SysWash, 1 x 500 mL 附加洗液 貨號11

12、933159001, SysClean 適配器 貨號11706829001, Elecsys 1010 分析杯, 12 x 32 反應管，或貨號11706802001, Elecsys 2010分析杯,60 x 60反應管 貨號11706799001, Elecsys 2010 分吸吸頭, 30 x 120 移液管吸頭 Modular Analytics E170 和cobas e601免疫分析儀所需材料: 貨號04880430, ProCell M, 2 x 2 L 系統緩沖液 貨號04880293, CleanCell M, 2 x 2 L 檢測池洗液貨號03023141001, PC/C

13、C杯, 50杯用于在測定前預熱Procell M及Cleancell M。貨號03005712190,ProbeWash M, 12 x 70 mL 清洗液，用于在檢測完畢后或更換試劑時清洗系統。貨號12102137001,分析杯/分析吸頭 組合裝 M, 48 分析杯x 84 反應管或加液器吸頭,廢物袋 貨號03023150001, WasteLiner,廢物袋 貨號03027651001, SysClean 適配器 M 三種分析儀均需要的材料: 貨號11298500316, Elecsys SysClean, 5 x 100 mL 系統清洗液 測定要獲得最佳的測定結果，請遵照本說明書中有關分

14、析儀的相關指導，并參照分析儀特定檢測的操作手冊。在使用前分析儀自動使微粒處于懸浮狀態。通過各試劑條形碼可讀取其詳細實驗參數。在少數情況下，分析儀無法自動讀取信息時，請輸入標簽上的15位數字序列。E170、 Elecsys2010和cobas e 分析儀：將各試劑降溫至20C左右，放到分析儀的試劑盤（20C）上，避免泡沫產生。分析儀將自動調節反應溫度及各試劑瓶瓶蓋的開關狀態。Elecsys 1010分析儀：將各試劑降溫至2025C左右，放到分析儀的試劑盤上（環境溫度2025C），避免泡沫產生。在測定過程中需手動開關各試劑瓶的瓶蓋。使用后儲存于28C。定標溯源性：本測定方法已按照酶測試NSE定標標

15、準化20,21。每批NSE試劑的試劑盒上都有條形碼記錄各批號試劑特異的定標信息。預先確定的主曲線適用于用Elecsys NSE CalSet試劑盒進行測定的分析儀。定校間隔：對不同批號的試劑盒必須重新進行定標（在試劑盒被分析儀識別后的24小時內）。除此之外，以下情況必須重新進行定標：Elecsys 2010、E170和cobas e分析儀：同一批號的試劑盒在分析儀上使用超過1個月（28天）。同一試劑盒在分析儀上使用超過7天Elecsys 1010分析儀：每換一個試劑盒就要定標一次。系統溫度在2025C時7天定標一次。在三種分析儀上均需定標：根據需要：如質控數據超過額定的限值。定標核實：沒有必要

16、對定標進行核實。分析儀的軟件會自動對定標結果的準確性進行分析，當出現任何偏差時系統會自動提醒。質控Elecsys PreciControl Tumor Marker 1和2試劑和其它適合的試劑均可作為測定時的質控液。在測定時，對于不同濃度范圍的標本，每24小時內必須進行一次質控測試。每次更換試劑盒或進行定標后也須進行質控測試。每個實驗室須根據各自的情況確定合適的質控間隔和范圍。測定值必須處于規定的范圍內。若測定值不在規定的范圍內，則每個試驗室必須建立相應的矯正方法。計算分析儀自動計算得出每份標本的測定濃度（單位可為ug/L或ng/mL）。干擾因素14測定結果不受黃疸 (膽紅素 72mg/dL)

17、, 高脂血癥 (脂肪乳劑 2000 mg/dl) 和生物素（ 5mg/天），必須在末次生物素治療8小時后采集標本。濃度達1500U/ml的風濕因子對測定無影響。體外對21種常用藥物進行試驗未發現有藥物影響檢測結果。高達100000ng/ml大劑量不產生鉤狀效應。由于檢測試劑中含有單克隆抗體，因此某些接受單克隆鼠抗體治療或診斷的患者標本檢測結果可能有誤。Elecsys NSE試劑盒附帶有試劑添加劑以減少以上不良影響。少數病例中極高濃度的鏈霉抗生物素蛋白和釕抗體會影響測定結果。NSE濃度升高也見于良性肺部疾病和惡性神經內分泌疾病，如良性腫瘤，髓性甲狀腺癌，皮膚Merkel細胞腫瘤和胰腺及腎上腺癌1

18、5-17。必須結合患者病史，各項實驗室檢查及其它臨床資料來綜合評估測定結果。測定范圍200.050-370 ng/ml （由系統主曲線的最低限和最高限決定）。NSE濃度低于檢測最低限則報告為370ng/ml,或最多2倍稀釋740ng/ml。稀釋超過檢測范圍的樣品可以用Diluent NSE進行稀釋。推薦稀釋比例為1：2。稀釋的樣品濃度必須50ng/ml。檢測結果乘以稀釋比例。參考范圍11一項多中心研究對NSE進行了評估，共檢測了3個臨床中心547份健康人群的樣品，結果如下：16.3 ng/ml (95%百分比)15.717.0 ng/ml (95% 可信區間)Status: Elecsys 每個實驗室必須調查各自患者群體的參考范圍變異性，必要時根據具體情況制訂自己的參考范圍。特殊的性能指標10分析儀的代表性試驗數據如下。各實驗室由于具體情況不同，所得出的數據可能會稍有差異。精密度根據NCCLS（全國臨床實驗室規范化操作委員會）制訂的改良試驗計劃(EP5-A)，應用Elecsys試劑盒、人血液標本和質控液驗證Elecsys NSE試劑盒檢測重復性。每日測6 次共10 日（n60）；在E170 分析儀上的組間精密度（n21），得結果如下：分析靈敏度（低濃度檢測限值） 0.05 ng/ml檢測限值定義為可以區別零濃度定標液的最低可測濃度值，計算公式為定標液最小濃度2SD（