1、HIV感染和AIDS的實驗診斷 HIV感染及AIDS的實驗診斷揭開AIDS歷史的 第一頁MMWR JUNE 5,1981/VOL.30/NO.21MORBIDITY AND MORTALITY WEEKLY REPORT 愛滋病是一種有病毒引起的全身性傳染病,其定義是血液中查到人類免疫缺陷病毒抗體或其他相關的病毒學指標,機體抵抗感染和疾病的免疫機能受到破壞，而發生的一系列相應癥狀HIV感染者的定義是血液呈HIV陽性而無癥狀的感染者。獲得性免疫缺陷綜合征(Acquired immuno-deficiency Syndrome, AIDS)一）生物學特征1.發展簡史 1983年,法國巴斯德研究所分

2、離到一種新的 逆轉錄病毒，命名為LAV。1984年美國國立 癌腫研究所分離出命名為HTLV-的病毒。 同年，美國加州大學分離出AIDS相關病毒（AIDS Related Virus,ARV）.1986年，非洲西部發現了另一種病毒國際微生物學會及病毒分類學會統一命名為HIV。一）生物學特征2.HIV的結構與蛋白質功能HIV呈球形或卵形，直徑為100-120nm，雙層結構。核心由兩個相同拷貝的RNA及蛋白質、反轉錄酶、核糖核酸酶及整合酶組成，核心外為病毒衣殼，20面體立體對稱，有蛋白質（P17/P18、P24/P25）。最外層是膜蛋白。包膜上有刺突，含糖蛋白gp120，在雙層脂質中有 gp41 。

3、HIV病毒顆粒及其結構蛋白和其他毒粒蛋白人類免疫缺陷病毒HIVHIV基因編碼的產物及其功能HIV結構蛋白包括:核心蛋白(gag),包膜蛋白(env )聚合蛋白(pol)。核心蛋白包括: P17位于核蛋白與殼層之間的基質上，包被于包膜蛋白的內部。P24和P15包被于內部核酸外圍核衣殼主要為P24。包膜蛋白為糖蛋白: gp160 是前體分子，在感染初期產生，然后分解成 gp120 和gp41。聚合酶蛋白包括: P66、P51和P31，聚合酶抗原位于病毒的核區內，與病毒核酸緊密相關。其功能為轉錄RNA為DNA；整合病毒DNA到宿主細胞的DNA上和切割前體分子使之成為有活性的小分子。HIV 的結構蛋白

4、3. HIV的病原特異性：HIV-1分為M、O、N三組，M組包括A、B、C、D、E、F、G、H、I、J共10個亞型，加上O、N型共12個亞型。HIV-2至少有A、B、C、D、E、F 等6個亞型。HIV亞型ABCDEFGHIJOHIV2SIVAdapted from : J. Levy HIV and the Pathogenesis of AIDSHIV1HIV-1 亞型全球分布B,a,c,d,f,oA,O,d,g,hB,a,d,e,oBBBBB,f,cB,eBCA,D,eC,a,dC,a,b,eC,E,bE,bB,e,cB,eB,a,c,d,g,hB,iUNAIDS Dec. 1996非洲及

5、亞洲部分地區有重組株病毒。HIV的亞型特點有相對優勢亞型同一亞型差異很大亞型內的變異水平估算存在時間不同亞型傳播途徑和致病性不一不同亞型對抗-HIV藥物引起耐藥不同亞型重組屬于逆轉錄病毒，復制速度快可感染人體各種細胞，造成多器官損傷破壞具有調節免疫系統功能T4淋巴細胞在血液、淋巴液、精液、陰道分泌液和乳汁中其抗體無保護作用對外界抵抗力弱（低于乙肝病毒）人類免疫缺陷病毒1.艾滋病成為全球第四大殺手，傳染性疾病 的第一大殺手奪取了超過280萬人的性命；2.截止2008年，15-49歲HIV患病人數已有4000萬，其中40%是15-24歲的青年.(有120萬兒童)3.亞洲人感染艾滋病的增長速度最快，

6、尤其 是中國和印度；4. HIV的研究仍跟不上其破壞的速度；5.治療性控制是可以達到的。二）流行病學全球愛滋病感染人數及感染途徑 根據聯合國愛滋病委員會和世界衛生組織統計，全球每年新感染愛滋病帶毒者410萬。(24h全球增加16000感染者) 因HIV死亡的人數超過了280萬,已超過了 肺結核(病死率200萬)和瘧疾(100萬).近年AIDS流行特點：1.西方國家HAART的使用，患病率和病死率在下降，而發展中國家AIDS形勢嚴峻；2.以注射吸毒和性傳播(以異性間的傳播為主)；3.不潔的血液采集;4.女性病例上升；母嬰傳播5.兒童病例增加（2個月2 重組或多肽 間接 42-45d3 重組+多肽

7、 夾心 22d4 抗原+抗體 夾心 16d(抗原5pg)5 基因擴增法，基因芯片 6-11.5dHIV抗體篩查試劑： 第三代抗體試劑的雙抗原夾心法模式兩步法酶標法測試，可以用來檢測HIV抗體I型，II型和O亞型。手工/自動化酶標儀檢測，用血清/血漿樣本。Murex HIV-1.2.O. 夾心模式板底樣本結合物抗原包被（1）辣根過氧化物酶標記抗原（2）模式：雙抗原夾心法。Murex HIV-1.2.O 抗原HIV-1 envHIV-1 envHIV-1 envHIV-1 envHIV-1 envHIV-2 envHIV-1 envHIV-1 p24 HIV-1 envPODPOD PODHIV-

8、O HIV-OHIV-2多肽抗原重組抗原板結合物CD SDPODHIV-1 envHIV-1 p24HIV-1 p24P41/p36前帶/后帶效應的機制兩步沖洗法-可避免此效應低濃度的結合物高濃度的結合物 HOOK效應的機制Ag 變構是二步夾心酶免出現鉤狀HOOK的原因被測抗原如具有多重決定族與親和性高于包被抗體的酶標抗體發生交叉重疊結合，由于立體效應和互相擠壓， Ag分子發生構象改變而從包被抗體上脫落，造成反應信號下降2.POCT 在艾滋病毒檢測中的應用快速Determine HIV1/2 O抗體檢測第三代抗體試劑的雙抗原夾心法模式可以用來檢測HIV抗體I型，II型和O亞型。可用手指/靜脈血

9、，15分鐘出結果，可用血清/血漿/全血樣本結果可密封保存。快速試劑研制的背景就地檢測（POCT）概念：急診-手術，緊急輸血，事故緊急檢測。 （醫護人員和病人的保護）篩查概念：母嬰篩查，就職，移民，性及吸毒犯罪人員體檢等-簡單易用。日常檢測：大，中，小型實驗室，及極少量HIV樣本實驗室，偏遠地區，實驗室條件或設備不齊，外出檢測-方便攜帶，使用。結果可保存。 靈敏度排名及分數產品排名分數Genscreen HIV 1/21237Murex HIV 1.2.O2235Imx HIV III3231Ortho HIV 1/23231Abbott HIV Beads 4229Murex 1/25227O

10、rganon Uni II.x5.214-225Innotest HI 1/2Last1783. 第四代試劑及抗原有關的試劑HIV 抗原/抗體聯合試劑：Murex HIV Ag/Ab：第四代試劑大大提高靈敏度的篩查試劑，進一步縮短了 檢測“窗口期” 。RIA Delta HIV Ag/Ab：放免HIV抗原/抗體聯合試劑。HIV抗原試劑：Murex HIV抗原單克隆試劑：臨床上只用于HIV抗原檢測以早期檢測樣本， 或觀察HIV 疾病進程。 Murex HIV 抗原確認試劑,確認抗原試劑陽性樣本。HIV 標記物 CDCgroup I CDCgroup II/III CDCgroup IVHIV A

11、g/RNAIgMIgG (env)IgG (p24)HIV Ag/RNA第一代第二代第三代第四代抗原補充 4. HIV特殊試劑HIV 抗體WB確認試劑： 為唯一一種經典和全球公認的抗體確認試劑，2.2版本包含有極早期血清轉換片段，便于早期樣本的確認。LCx HIV 核酸物質定性/定量分析： （LCR和PCR技術） 用于HIV 病人遺傳物質檢測，可用于部分確認，和病人治療監測。 Western Blot分析HIV 蛋白結構蛋白HIV-1HIV-2 envgp160前體 gp140gp120外部 gp105/125gp41跨膜 gp36/41polP66逆轉錄酶 p68P51逆轉錄酶 p53P31內切酶 p31/34gagp55前體 p56p24核心 p26p17