1、紅酒的薄層色譜分析第1頁，共16頁，2022年，5月20日，9點53分，星期二薄層色譜分析的介紹近年來，隨著科技的突飛猛進(jìn)，現(xiàn)代儀器分析的方法已廣泛用于中藥的理化鑒定及含量測定中。薄層色譜法由于操作簡便，色譜結(jié)果直觀，并具有分離鑒定雙重功能，已成為中藥分析的常用手段。但是薄層色譜技術(shù)還存在某些缺陷，如由于是斑點的原位定量帶來了鋪板質(zhì)量、上樣技術(shù)、展開技術(shù)，顯色等因素的影響，這些因素使測定結(jié)果偏差較大。因此在規(guī)范操作和提高自動化程度方面提出了更高的要求。薄層色譜的實驗成本低、流動相的更換與選擇方便、薄層掃描儀的使用效率高。另外，它提供色彩豐富、直觀易認(rèn)的可見光或熒光色譜圖像，尤其適合日常分析檢驗

2、和現(xiàn)場檢驗。選擇薄層掃描法對中藥進(jìn)行指紋圖譜質(zhì)量控制具有廣闊的應(yīng)用前景。第2頁，共16頁，2022年，5月20日，9點53分，星期二實驗儀器CAMAG Linomat 5 半自動點樣儀CAMAG Scanner3 薄層色譜掃描儀 CAMAG 數(shù)碼攝像系統(tǒng)第3頁，共16頁，2022年，5月20日，9點53分，星期二第4頁，共16頁，2022年，5月20日，9點53分，星期二薄層色譜法是將固定相吸附劑均勻地涂在玻璃板上制成薄層板，試樣中的各組分在固定相和作為展開劑的流動相之間不斷地發(fā)生溶解、吸附、再溶解、再吸附的分配過程。不同物質(zhì)上升的距離不同而形成彼此分開的斑點從而達(dá)到分離。薄層色譜可分為吸附薄

3、層色譜（以硅膠氧化鋁等吸附劑）、分配薄層色譜（用硅藻土和纖維素等）和離子交換薄層色譜。實驗原理（Principle）第5頁，共16頁，2022年，5月20日，9點53分，星期二主要原料(Materials)主要儀器 (Equipments)紅酒、紅色顏料、黃色顏料、藍(lán)色顏料、綠色顏料、粉紅色顏料玻璃片，毛細(xì)管，色譜缸，吹風(fēng)機第6頁，共16頁，2022年，5月20日，9點53分，星期二操作步驟(SOP)（1）根據(jù)被分離物質(zhì)的性質(zhì)選擇吸附劑，最常用的是硅膠和氧化鋁，其次是纖維素、硅藻土、聚酰胺等；（2）薄層板的制備；（3）點樣；（4）展開；（5）顯色，Rf值計算。第7頁，共16頁，2022年，5月

4、20日，9點53分，星期二具體操作1、選擇吸附劑（1）硅膠：微酸性極性固定相，適用于酸性、中性物質(zhì)分離（可制備成酸性不同或堿性硅膠擴大使用范圍）。（2）氧化鋁：堿性極性固定相，適用于堿性、中性物質(zhì)分離（可制備成中性或酸性氧化鋁擴大使用范圍）。（3）纖維素：含有羥基的極性固定相，適用于分類親水性物質(zhì)。（4）聚酰胺：含有酰胺基極性固定相，適用于酚類、醇類化合物的分離。 第8頁，共16頁，2022年，5月20日，9點53分，星期二2、薄板的制備 薄層板的好壞將決定分離的效果。薄層板應(yīng)該盡量均勻且厚薄一致。（1）使用鋪板器：將潔凈干燥的玻璃板置于鋪板器中間，在鋪板槽中倒入糊狀物，自左向右推，將糊狀物均

5、勻地涂在玻璃板上。見下圖：第9頁，共16頁，2022年，5月20日，9點53分，星期二1、吸附劑薄層，2、涂布槽，3、玻璃夾板，4、玻璃板，5、玻璃夾板第10頁，共16頁，2022年，5月20日，9點53分，星期二（2）傾注法：將調(diào)成糊狀物倒在玻璃板上，或用角匙舀到玻璃板上，再用玻璃棒或角匙鋪平并用手捏住玻璃板一角，輕輕碰敲桌面，使薄層表面均勻并除去糊狀物中的氣泡。第11頁，共16頁，2022年，5月20日，9點53分，星期二3、薄層板的活化 將涂好的薄層板水平放置于室溫下晾干后（應(yīng)避免陽光直射，以防開裂），放在烘箱內(nèi)加熱活化。硅膠板需在烘箱內(nèi)慢慢升溫至105-110度后保溫30分鐘；氧化鋁板

6、需在200-220度烘4小時，可得到活性I級的薄板，吸附層的活性隨含水量的降低而增加。活化好的薄板應(yīng)保存在干燥器中備用。第12頁，共16頁，2022年，5月20日，9點53分，星期二4、點樣 將待測樣品溶在極性盡可能低的溶劑中配成1%的溶液。用一支平口的細(xì)毛細(xì)管蘸取少量樣品溶液點在薄板上，點樣基線距底邊1-2cm，樣點直徑在1-1.5mm之間,點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為宜，距邊緣在5mm（以免邊緣效應(yīng)影響分離）。點樣時必須注意勿損傷薄層表面。正常斑點應(yīng)是圓形或橢圓形色斑。 第13頁，共16頁，2022年，5月20日，9點53分，星期二點樣注意：（1）點樣量對分離效果影響很大，而且還與顯色劑靈敏度、吸附劑類型有關(guān)。樣品量過少，展開后斑點不清晰，影響觀察；樣品量過多，展開后拖尾嚴(yán)重，易造成Rf值接近的斑點相連。（2）樣品濃度過稀，可在同一斑點處重復(fù)多次點樣（應(yīng)讓溶劑揮發(fā)后再點）。（3）點樣后一定要等溶劑揮發(fā)后才能把薄板放入層析缸中展開。第14頁，共16頁，2022年，5月20日，9點53分，星期二注意事項(Cautions)1、薄層板的制備是實驗的關(guān)鍵點之一。鋪板必須厚薄均勻一致，不能開裂。2、點樣的圓點必須小且濃度要高些，但不能太高，以免引起拖尾現(xiàn)象。3、點樣后要等溶劑揮發(fā)盡才能將