1、支原體、衣原體檢測第1頁實驗目掌握支原體、衣原體檢測方法，結果判斷、臨床意義和注意事項。熟悉支原體、衣原概念分類及其對應檢測原理了解衣原體、支原體檢測臨床意義，分泌物采集、培養方法。第2頁支原體概念和分類支原體是一類無細胞壁，形態上呈多形性，可經過除菌器，能在無生命培養基生長繁殖最小原核細胞型微生物。 肺炎支原體 、生殖器支原體 、 穿通支原體 人型支原體（Mh）、溶脲脲原體（Uu）第3頁衣原體概念和分類衣原體是一類能經過除菌器，專性細胞內寄生，有獨特周期生活原核細胞微生物。 沙眼衣原體、鸚鵡熱衣原體、肺炎衣原體第4頁支原體檢測臨床意義支原體臨床意義： 能夠引發呼吸道感染支原體肺炎，泌尿生殖道

2、非淋病性尿道炎，男性前列腺炎、附睪炎、不育，女性陰道炎、宮頸炎、盆腔炎、輸卵管炎、流產等，還可造成新生兒感染如腦膜炎、腦膿腫、硬腦膜下膿腫。第5頁衣原體臨床意義 沙眼衣原體不但可致眼部感染，而且可引發生殖泌尿系統感染、性病淋巴肉芽腫以及其它器官疾病，為人類發病率最高性傳輸疾病；鸚鵡熱衣原體可引發肺炎和毒血癥；肺炎衣原體主要引發青少年急性呼吸道感染。衣原體檢測臨床意義第6頁支原體、衣原體檢測標本采集支原體標本 棉拭子樣本尿道棉拭子 、宮頸管棉拭子、咽拭子 液體樣本精液、羊水、前列腺液、血清標本衣原體標本 主要為無菌棉拭子采集宮頸分泌分或尿道分泌物 還可有咽拭子、眼結膜拭子、黏稠膿液、血液、痰液等

3、第7頁支原體、衣原體檢測原理支原體檢測原理 Uu含有脲酶分解尿素產生NH3， Mh含有精氨酸脫羧酶分解精氨酸也產生NH3，使培養基PH值升高，培養基由黃色變為紅色。藥敏試驗板上包被有抗生素，若所測支原體對包被抗生素敏感，其酶活性受到抑制，不引發顏色改變。衣原體檢測原理 金標法：利用已知特異性鼠抗衣原體抗體來檢測標本中衣原體抗原。第8頁檢測試劑和器材1、微生物試驗常規工具2、支原體、衣原體棉拭子標本3、支原體、衣原體檢測試劑盒4、一次性無菌吸管和試管5、匯報簽第9頁支原體試劑盒組成 培養基 判定藥敏一體板 無菌吸管 無菌礦物油第10頁衣原體試劑盒組成 第11頁一、支原體試驗步驟1、從冰箱中取出支

4、原體試劑盒恢復室溫2、從試劑盒中取出UU-Mh培養瓶一瓶，反應板一條，在 反應板寫上病人姓名。3、取一只一次性無菌塑料吸管，然后吸收100ul培養液加入反應板上左上第一孔 (作為空白對照)。4、將采集標本拭子插入培養瓶，在靠近液面上方瓶壁擠壓旋轉拭子數次，使拭子中樣本滲透，然后將拭子取出；5、充分混勻接種了標本后培養基，然后分別吸收100ul加入反應板各孔。(空白孔除外) 6、各孔滴加2滴無菌液體石臘，蓋上反應板蓋，置35-37C孵箱，培養24-48小時。第12頁臨床實際操作過程示范 1、設陰性對照孔 2、樣本處理3、加樣本液 4、加礦物油第13頁 5、加蓋標識 6、恒溫孵育 7、孵育后判定板

5、可出現現象第14頁支原體檢測操作簡化示意圖第15頁判定藥敏一體板模型圖第16頁支原體檢測結果判斷 依據臨床和標準對照試驗確定解脲脲原體（Uu）104ccu/ml、人型支原體（Mh） 104ccu/ml為Uu、 Mh非致病值，非Uu、 Mh感染正常人群定性試驗陰性第17頁支原體藥敏結果分析第18頁支原體檢測結果匯報第19頁二、衣原體操作步驟1、取裂解管一支，豎立滴入裂解液A6滴，放入患者棉拭在管內充分擠壓，轉動約15次，后放置2分鐘。2、再滴加裂解液B至刻度（約6滴），然后一樣操作上述擠壓步驟。3、擠壓棉簽（盡可能擠干），棄去棉簽，在反應板加樣孔處滴加入3滴（約100ul）裂解后溶液。5-10分鐘后觀察結果。第20頁衣原體操作一第21頁衣原體操作二第22頁衣原體檢測結果判斷1、陽性：有兩條紅色帶出現。一條位于測試區（T），另一條位于質控區內（C）。 解釋：標本中含有沙眼衣原體抗原。2、陰性：僅在質控區內（C）出現一條紅色帶。解釋：標本中檢測不出沙眼衣原體抗原。 （或是沒有、或是含量低于可檢測范圍）3、無效：質控區內（C）未出現一條紅色帶 第23頁結果現象第24頁注意事項1、本試驗注意無菌操作，防止污染雜菌，故操作時請點燃酒精燈